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鳜鱼传染性脾肾坏死病病毒TB Green嵌合荧光定量PCR法的建立
1
作者 李雪雁 刘琪 +5 位作者 梁慧仪 叶树才 黄晓声 贾晓菲 李琳 潘子强 《中国动物检疫》 2025年第4期68-73,共6页
为建立鳜鱼传染性脾肾坏死病病毒(ISKNV)的快速检测方法,对ISKNV主衣壳蛋白(MCP)编码基因进行分析,依据编码基因保守序列设计并合成引物,建立了定性和定量检测ISKNV的TB Green嵌合荧光定量PCR法,并对该方法进行了灵敏度、重复性和特异... 为建立鳜鱼传染性脾肾坏死病病毒(ISKNV)的快速检测方法,对ISKNV主衣壳蛋白(MCP)编码基因进行分析,依据编码基因保守序列设计并合成引物,建立了定性和定量检测ISKNV的TB Green嵌合荧光定量PCR法,并对该方法进行了灵敏度、重复性和特异性试验。结果显示:自行重组质粒标准品构建的荧光定量PCR标准曲线R2值为0.997,线性关系良好;检测下限约为15.9 copies/μL,灵敏度是普通PCR的100倍;30个样品扩增曲线基本重合;对草鱼呼肠孤病毒和锦鲤疱疹病毒及阴性对照的检测结果均为阴性。本研究建立的ISKNV TB Green嵌合荧光定量PCR法具有灵敏度高、重复性好和特异性强等优点,在鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断方面具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 传染性脾肾坏死病 鳜鱼 MCP蛋白 荧光定量pcr 染料法
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甘精胰岛素生物学活性定量免疫荧光测定法和胰岛素生物测定法的等效性研究 被引量：1
2
作者 高益敏 张红梅 +3 位作者 何开勇 尹登科 孙备 许雷鸣 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2193-2199,共7页
目的建立甘精胰岛素基于转基因细胞CHO-INSRB 1284的定量免疫荧光生物学活性测定法(In-Cell Western,ICW),并将其与《中国药典》胰岛素生物测定法进行等效性研究。方法CHO-INSRB 1284细胞以1.5×10^(8) L^(-1)细胞密度铺板,1500μmo... 目的建立甘精胰岛素基于转基因细胞CHO-INSRB 1284的定量免疫荧光生物学活性测定法(In-Cell Western,ICW),并将其与《中国药典》胰岛素生物测定法进行等效性研究。方法CHO-INSRB 1284细胞以1.5×10^(8) L^(-1)细胞密度铺板,1500μmol·L^(-1)甘精胰岛素稀释25倍后再进行3倍系列梯度稀释,在微孔板刺激细胞20 min,经固定、透化及抗体孵育步骤,利用odyssey双色红外荧光成像系统,进行定量免疫荧光生物学活性检测。结果ICW中甘精胰岛素的浓度与相对效价具有良好的量效关系;方法专属性好,相对准确度、中间精密度及线性均符合要求;7批甘精胰岛素样品采用两种方法测定的生物学活性结果相对偏差低于10%,用SPSS软件和SAS软件分析,表明方法具有相关性及等效性。结论建立的甘精胰岛素生物学活性定量免疫荧光测定法,方法专属性好,准确度及精密度高,与体内胰岛素生物测定法具有相关性和等效性,可用于甘精胰岛素的体外药效评价和质量控制。 展开更多
关键词 生物学活性 甘精胰岛素 定量免疫荧光测定法 转基因细胞 方法学验证 等效性评价
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实时荧光定量PCR和测序法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较 被引量：11
3
作者 李永文 刘红雨 +4 位作者 李颖 王玉丽 王竞 陈军 周清华 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第12期1255-1259,共5页
背景与目的以厄洛替尼(Erlotinib)为代表的小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌已经取得很好的疗效。许多研究发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与酪氨酸激酶抑制剂的疗效密... 背景与目的以厄洛替尼(Erlotinib)为代表的小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌已经取得很好的疗效。许多研究发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关。本研究目的是通过比较荧光定量PCR(Real-time PCR)和DNA测序法检测EGFR基因突变的一致性,建立适用于临床的EGFR基因突变检测方法。方法应用荧光定量PCR(Real-time PCR)及DNA测序法检测103例非小细胞肺癌标本的EGFR外显子19和21的基因突变,结果比较采用卡方检验。结果两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变的检测结果无统计学差异,且荧光定量PCR法比测序法更快捷和灵敏。结论与测序法相比,荧光定量PCR更适用于临床检测。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 基因突变 荧光定量pcr DNA测序法
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转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：10
4
作者 王盛 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 谢志勤 黄莉 罗思思 邓显文 黄娇玲 刘加波 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期745-749,共5页
【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以... 【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因,建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法。【结果】构建RNR2基因、GFP基因实时荧光定量PCR的标准曲线,分别为y=-0.2858x+5.6695和y=-0.2826x+2.1048,R2分别为0.9994和0.9989,相关性较高。在检测的5株转基因烟草中GFP基因的拷贝数分别为5、8、19、28和45,非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0。【结论】建立的转基因烟草中外源基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法具有简单、快速、准确等优点,可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析。 展开更多
关键词 转基因烟草 双标准曲线法 外源基因 拷贝数 SYBR Green I实时荧光定量pcr
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荧光定量PCR法检测乙肝病毒的临床意义 被引量：18
5
作者 钱宇 潘钰卿 高睛 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第4期372-373,共2页
目的探讨荧光定量PCR法检测乙肝病毒的临床意义。　方法荧光定量PCR法检测 15 4例患者的乙肝病毒量 ,研究其与乙肝病毒抗体 ,谷丙转氨酶 (ALT)及反映肝纤维化指标的透明质酸酶 (HA)与层粘蛋白 (LN)的关系。　结果免疫荧光定量PCR方法直... 目的探讨荧光定量PCR法检测乙肝病毒的临床意义。　方法荧光定量PCR法检测 15 4例患者的乙肝病毒量 ,研究其与乙肝病毒抗体 ,谷丙转氨酶 (ALT)及反映肝纤维化指标的透明质酸酶 (HA)与层粘蛋白 (LN)的关系。　结果免疫荧光定量PCR方法直接测定病毒量 ,明确反映病毒感染程度 ,其测定值与ALT呈一定程度正相关 ,与肝炎轻、中、重程度及肝纤维化程度成反比。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 免疫荧光定量pcr法 诊断 聚合酶链反应
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牛奶β-乳球蛋白质实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：12
6
作者 贾敏 张银志 +1 位作者 张亦凡 孙秀兰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期605-612,共8页
建立一种快速、特异、灵敏的Taqman实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法,用于牛奶主要过敏原β-乳球蛋白质的检测。根据Gen Bank登录的牛β-乳球蛋白质的DNA序列设计,合成一对特异性引物和探针。将扩增产物连接到p MD19-T载体上,制备... 建立一种快速、特异、灵敏的Taqman实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法,用于牛奶主要过敏原β-乳球蛋白质的检测。根据Gen Bank登录的牛β-乳球蛋白质的DNA序列设计,合成一对特异性引物和探针。将扩增产物连接到p MD19-T载体上,制备质粒标准品并测序鉴定,10倍梯度稀释含有β-乳球蛋白质基因的重组质粒,进行实时荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线,检测该方法的特异性、稳定性、灵敏性,同时将建立的方法用于10种市售食品的检测。成功建立了β-乳球蛋白质的实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线的Ct值与模板浓度在3.18×103~3.18×107copies范围内线性关系良好,R2值为0.997 8;检测灵敏度高（318 copies/μL）;特异性强,对羊奶、豆浆DNA均无扩增反应;稳定性好,组内、组间的变异系数均在5%以内。对10种食品牛奶过敏原的检测结果与标签相符。表明所建立的实时荧光定量PCR方法可应用于食品中牛奶过敏原β-乳球蛋白质的检测并可推广到其它过敏原的检测。 展开更多
关键词 牛奶过敏原质 β-乳球蛋白质 Taqman实时荧光定量pcr法 检测
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国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸中的应用 被引量：3
7
作者 王瑞莲 张婷 +4 位作者 龙军 陈晓娇 林丽娟 方艳平 彭永正 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第21期3594-3596,共3页
目的:评价国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸的临床应用价值。方法:首先,用国产磁珠法试剂B与进口磁珠法试剂A(罗氏试剂)对78例标本进行乙型肝炎病毒核酸的平行测定,比较其相关性。然后,对8个梯度浓度的结果重复检测3次... 目的:评价国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸的临床应用价值。方法:首先,用国产磁珠法试剂B与进口磁珠法试剂A(罗氏试剂)对78例标本进行乙型肝炎病毒核酸的平行测定,比较其相关性。然后,对8个梯度浓度的结果重复检测3次,评价其精密度。最后,用试剂B与煮沸裂解法试剂C对58例标本进行比较,评价其阳性检出率。结果:在相关性方面,试剂A与试剂B显著相关(r=0.987,P<0.05)。在精密度方面,3次重复检测结果之间差异无显著性(F=0.999,P>0.05)。在阳性检出率方面,试剂B阳性检出率(60.34%)高于试剂C(39.77%)。结论:国产磁珠法试剂与进口磁珠法试剂相关性强,精密度和阳性检出率高,且价格较低廉,适合临床推广使用。 展开更多
关键词 国产磁珠法 荧光定量pcr 乙型肝炎病毒 核酸
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兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究 被引量：4
8
作者 徐红伟 臧荣鑫 +4 位作者 杨具田 卢建雄 蔡勇 石来文 马伟龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期84-88,共5页
通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批... 通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明,H-FABP和18S基因标准曲线回归方程分别为CtH-FABP=-3.24375x+38.34230和Ct18S=-3.33137x+33.4573,相关系数(r2)分别为0.9964和0.9992,扩增效率分别为103%和99%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.8%和10%;说明该方法灵敏度高、特异性强、准确可靠、重复性好,是实时荧光定量PCR检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA表达量的有效方法。 展开更多
关键词 兰州大尾羊 脂肪酸结合蛋白 SYBR GreenⅠ法 实时荧光定量pcr
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牛冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：10
9
作者 王莎莎 王吉 岳秉飞 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期69-73,共5页
目的建立特异灵敏的牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)荧光定量PCR检测方法,并对牛源性样本进行筛查。方法根据Genbank中登录的BCV的N基因序列设计Taq Man引物探针,建立基于Taq Man探针法的BCV PCR检测方法,对收集到的牛源样本进行BC... 目的建立特异灵敏的牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)荧光定量PCR检测方法,并对牛源性样本进行筛查。方法根据Genbank中登录的BCV的N基因序列设计Taq Man引物探针,建立基于Taq Man探针法的BCV PCR检测方法,对收集到的牛源样本进行BCV筛查,并对部分阳性样本的PCR产物进行测序鉴定。结果建立了能够特异检测BCV的Taq Man探针法荧光定量PCR检测方法,其标准曲线相关系数Slope为-3.417,相关系数r2为0.999,,扩增效率Eff为96.195%。该方法检测BCV的敏感度为40 copies。使用该方法检测64份牛肛拭子样本检出率为1.5%,检测33份牛源生物制品检出率为6%,部分阳性样本的PCR产物经测序比对为BCV核酸序列,说明BCV在国内牛群中流行,牛源相关生物制品中有感染BCV的潜在风险。结论经测序验证,建立的方法能够灵敏的检测样本中的BCV核酸,应加强牛源相关生物制品中BCV的监测,避免人感染BCV的潜在风险。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 TAQ Man探针法荧光定量pcr方法 检测和初步应用
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荧光定量PCR法和ELISA检测儿童呼吸道感染病原体的意义 被引量：7
10
作者 刘来成 张鹏辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期1547-1549,共3页
儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）和肺炎衣原体（chlamydiapliel pneumoniae,CP）也逐渐成为急性呼吸道感染的... 儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）和肺炎衣原体（chlamydiapliel pneumoniae,CP）也逐渐成为急性呼吸道感染的主要病原体。由于该两类病原体的分离培养方法复杂,所需时间长,不便于临床快速诊断[1],早期检测出病原体而成为临床诊断棘手的问题。目前大多数医院对该两类病原体的检测仍以血清学方法（如ELISA）为主。 展开更多
关键词 肺炎支原体 肺炎衣原体 荧光定量pcr 酶联免疫法 诊断
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实时荧光定量PCR法快速测定水中微囊藻 被引量：1
11
作者 李继影 吴昕贤 +2 位作者 徐恒省 刘孟宇 景明 《环境监测管理与技术》 2013年第6期47-51,共5页
以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)16S rRNA基因片段为靶序列设计一对特异性引物,采用Real-time PCR法,对铜绿微囊藻进行定性、定量检测。试验表明,仅含铜绿微囊藻DNA模板的样品有特异性扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温... 以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)16S rRNA基因片段为靶序列设计一对特异性引物,采用Real-time PCR法,对铜绿微囊藻进行定性、定量检测。试验表明,仅含铜绿微囊藻DNA模板的样品有特异性扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温度为(87±1)℃。以重组质粒pMD-18T-16S为标准品,检测区间为1.1×102copies/mL～1.1×108copies/mL,所得标准曲线符合制备实时定量PCR标准曲线的要求,对标准品进行测定,方法检出限为11 copies/mL。用该标准曲线对实验室培养获得的铜绿微囊藻DNA样品进行定量检测,与显微镜计数结果基本一致。 展开更多
关键词 微囊藻 实时荧光定量pcr法 16S RRNA 水质
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QD-Infinity免疫荧光定量测定法快速筛查牛乳中铅的含量
12
作者 赵义良 刘松雁 +2 位作者 何立宁 崔荣飞 张梦雪 《今日畜牧兽医》 2019年第8期3-3,2,共2页
目的:利用QD-Infinity免疫荧光测定法快速测定牛乳中铅的含量,为牛乳中铅现场筛查提供快速、有效的检测/监测手段。方法:通过测定牛乳质控样品以及生鲜牛乳样品,结合与原子吸收石墨炉法比较测定,对QD-Infinity免疫荧光测定法的准确度与... 目的:利用QD-Infinity免疫荧光测定法快速测定牛乳中铅的含量,为牛乳中铅现场筛查提供快速、有效的检测/监测手段。方法:通过测定牛乳质控样品以及生鲜牛乳样品,结合与原子吸收石墨炉法比较测定,对QD-Infinity免疫荧光测定法的准确度与精密度进行全面评估。结果:牛乳质控样品铅含量测定值均在其理论值范围内;回收率结果为92.7%、92.0%和96.0%;与原子吸收石墨炉法比较测定20份牛乳,结果的相对偏差在0.56%~5.77%。结论:QD-Infinity免疫荧光测定法能用于牛乳中铅的定量检测,是一种有效的、实用的分析方法。 展开更多
关键词 QD-Infinity免疫荧光测定法 牛乳 铅 定量检测
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SYBR Green荧光定量PCR法对BCL11B基因座位相互作用位点的验证分析
13
作者 任立成 孙元田 +3 位作者 张云霞 苏振宇 杨智 李冬娜 《海南医学院学报》 CAS 2013年第1期1-4,共4页
目的:研究在不同类型细胞核中,位于不同染色体上的BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用关系。方法:通过SYBR Green荧光实时定量PCR法,分别对MCF-7和Jurkat细胞的3C(染色体构象捕获)样品进行定量分析,分析分别位于不同染色体上的BCL11B... 目的:研究在不同类型细胞核中,位于不同染色体上的BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用关系。方法:通过SYBR Green荧光实时定量PCR法,分别对MCF-7和Jurkat细胞的3C(染色体构象捕获)样品进行定量分析,分析分别位于不同染色体上的BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用频率。结果:与TaqMan探针法相比较,基于SYBR Green荧光实时定量PCR法对3C样品的分析同样具有良好的特异性。在MCF-7和Jurkat细胞中,BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用频率存在很大的差异。结论:SYBR Green荧光实时定量PCR法在染色体构象捕获技术中具有很好的特异性;BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用具有细胞类型特异性。 展开更多
关键词 BCL11B基因座位 染色体构象捕获 TaqMan探针法定量pcr SYBR Green荧光实时定量pcr
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Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
14
作者 贾广乐 王晓楠 +1 位作者 廖娟红 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期69-72,共4页
根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性... 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒;标准曲线相关系数为0.995,扩增效率为103%;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏菌(Brucella.spp)及牛血液的核酸样本特异性检测结果均为阴性。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好,对Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 Q热 贝纳柯克斯体 荧光定量pcr TaqMan探针法
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Q热贝纳柯克斯体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立
15
作者 贾广乐 王晓楠 +1 位作者 廖娟红 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期18-21,共4页
根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计引物,建立快速检测Q热的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能检测出102个拷贝数... 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计引物,建立快速检测Q热的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能检测出102个拷贝数的阳性质粒。标准曲线相关系数为0.991,扩增效率为98%。对结核分支杆菌、衣原体、布鲁氏杆菌及牛血液的核酸样品的特异性检测结果均为阴性。结果表明本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法灵敏度高且特异性好,可用于临床检测。 展开更多
关键词 Q热 贝纳柯克斯体 荧光定量pcr SYBR GreenⅠ染料法
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GeneScan试剂盒法快速定量检测玉米中CaMV35S启动子
16
作者 朱飞宇 黄宇飞 +3 位作者 高梅莹 刘佳 刘丹 铁晓威 《现代农业科技》 2025年第14期121-124,130,共5页
针对玉米中转入的CaMV35S启动子,开展了一种新型试剂盒[GMO Quant(LR)35S Screen corn]荧光定量PCR检测方法试验,建立新的转基因玉米中含有CaMV35S启动子标记基因的定量检测方法。选用3个玉米品种先玉1321、裕丰303和先玉335进行了CaMV... 针对玉米中转入的CaMV35S启动子,开展了一种新型试剂盒[GMO Quant(LR)35S Screen corn]荧光定量PCR检测方法试验,建立新的转基因玉米中含有CaMV35S启动子标记基因的定量检测方法。选用3个玉米品种先玉1321、裕丰303和先玉335进行了CaMV35S启动子荧光定量PCR检测,标准偏差分别为0.15%、0.39%和0.61%,标准曲线相关系数均在0.98以上,扩增效率为90%~110%,试剂盒中配有1%MON863玉米基因组DNA(已知CaMV35S启动子含量在0.5%左右)作为对照材料,试验结果符合荧光定量PCR检测试验要求,确认此方法准确有效。此方法具有高度的特异性、高效性,是一种新型高效定量检测CaMV35S启动子的方法。 展开更多
关键词 荧光定量pcr CaMV35S启动子 转基因玉米 定量检测 GeneScan试剂盒法
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猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：4
17
作者 王伟 邹月红 +6 位作者 李雪松 陈欣 郎越坤 田华斌 符芳 李曦 李集临 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期104-107,共4页
为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法... 为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法。试验结果表明,本方法最低可检测到的Shimen病毒cDNA含量为100拷贝/μL,敏感度至少是普通PCR的100倍;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、牛流行腹泻病毒Ⅰ型(BVDV-1)和猪瘟病毒C株均无特异性扩增,证明本方法具有很强的特异性;通过批内和批间重复试验,其变异系数<0.7%,结果显示本方法具有很好的重复性。本研究建立了猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法,为猪瘟的预防与控制提供了有效的技术手段,并为猪瘟强毒试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 Shimen毒株 SYBRGreen-Ⅰ染料法实时荧光定量pcr
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大鼠bFGF基因荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：4
18
作者 舒剑波 张瑞 +1 位作者 董茵 郭刚 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2008年第1期1-4,共4页
目的建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平。方法以Trizol一步法提取新鲜骨组织总RNA，以Oligo（dt）18为引物逆转录产生cDNA并进行扩增，以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM—T Easy载体连接成重组质粒并转化E．coli DH5α... 目的建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平。方法以Trizol一步法提取新鲜骨组织总RNA，以Oligo（dt）18为引物逆转录产生cDNA并进行扩增，以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM—T Easy载体连接成重组质粒并转化E．coli DH5α。采用碱裂解法提取重组质粒，经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量，并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果由PGEM-T Easy—bFGF所构建的标准曲线线性关系良好（反应体系中含1×10^2～1×10^7拷贝大鼠bFGF基因分子时，扩增反应α值与拷贝数的对数成线性关系）、灵敏度高、特异性强、准确可靠。批内和批间重复性测定的变异系数分别为1．03％～4、59％以及2．24％～6．46％。结论成功建立了用实时荧光定量PCR检测大鼠bFGF基因表达量的方法。 展开更多
关键词 碱性成纤维生长因子 SYBR Green Ⅰ法 实时荧光定量pcr T-A克隆 标准曲线
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动物肌肉组织DNA的提取方法及实时荧光定量PCR检测 被引量：8
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作者 刘娜 赵新 +4 位作者 陈锐 王成 朱珠 王永 兰青阔 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第18期74-80,共7页
以生鲜羊肉、猪肉、鸡肉、牛肉、鸭肉为实验材料,采用SDS法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和实时荧光定量PCR检测。结果表明,试剂盒法提取的基因组DNA在浓度和纯度方面均优于SDS法... 以生鲜羊肉、猪肉、鸡肉、牛肉、鸭肉为实验材料,采用SDS法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和实时荧光定量PCR检测。结果表明,试剂盒法提取的基因组DNA在浓度和纯度方面均优于SDS法和异硫氰酸胍法。通过对三种提取方法建立的标准曲线进行比较,回归系数(R2)按照质量排序为:试剂盒法≥异硫氰酸胍法>SDS法,扩增效率按照质量排序为:试剂盒法>异硫氰酸胍法>SDS法。三种提取方法的羊源性成分灵敏度检测,最低检出限均为80 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.684%,小于异硫氰酸胍法0.734%和SDS法1.075%;猪源性成分灵敏度检测,SDS法的最低检出限为80 pg/μL,异硫氰酸胍法和试剂盒法的最低检出限均为16 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.092%,小于异硫氰酸胍法4.640%;鸡源性成分灵敏度检测,SDS法和异硫氰酸胍法的最低检出限均为3.2 pg/μL,试剂盒法的最低检出限为640 fg/μL,明显高于SDS法和异硫氰酸胍法。综上所述,试剂盒法提取的基因组DNA更有利于运用实时荧光定量PCR技术进行食物掺假和物种鉴别工作。 展开更多
关键词 动物肌肉 SDS法 异硫氰酸胍法 试剂盒法 DNA 实时荧光定量pcr
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蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：5
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作者 王红坤 王艺桦 +2 位作者 周丹银 董坤 张炫 《河南农业科学》 北大核心 2022年第3期154-161,共8页
为了建立一种灵敏度更高的蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法,根据残翅病毒保守基因片段设计引物,采取反转录过程与荧光定量PCR过程分步进行的方式,建立基于SYBR染料法检测残翅病毒的两步法实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性... 为了建立一种灵敏度更高的蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法,根据残翅病毒保守基因片段设计引物,采取反转录过程与荧光定量PCR过程分步进行的方式,建立基于SYBR染料法检测残翅病毒的两步法实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、稳定性和可行性进行验证。结果显示,建立的两步法荧光定量PCR检测方法采用的引物特异性良好,在6.58×10^(1)~6.58×10^(8)拷贝/μL质粒标准品间具有良好线性关系,R^(2)为0.9997,扩增效率为100.8%。该方法的灵敏度为6.58拷贝/μL,与蜜蜂黑蜂王台病毒和以色列急性麻痹病毒不发生交叉反应,组内变异系数为0.20%~0.66%,组间变异系数为0.08%~0.98%,对蜜蜂样品残翅病毒的阳性检出率明显高于普通PCR,具有良好的特异性、重复性和实用性。综上,成功建立了一种灵敏度高、适用性好的残翅病毒两步法实时荧光定量PCR检测方法,为我国蜜蜂残翅病的流行病学调查、疫情监测和预警机制的构建提供新的技术支持。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 东方蜜蜂 残翅病毒 两步法荧光定量pcr SYBR染料法 灵敏度
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