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兔脊髓微血管内皮细胞的体外培养及鉴定
1
作者
李柏霖
池茗
+1 位作者
张帆
唐元瑜
《中国脊柱脊髓杂志》
北大核心
2025年第5期516-521,共6页
目的:建立一种高效的兔原代脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cells,SCMECs)的体外分离培养方法。方法:选取2周龄日本大耳白兔15只,雌雄不限。在无菌条件下剪开背部皮肤肌肉层,充分暴露脊柱,沿其纵轴方向剪开...
目的:建立一种高效的兔原代脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cells,SCMECs)的体外分离培养方法。方法:选取2周龄日本大耳白兔15只,雌雄不限。在无菌条件下剪开背部皮肤肌肉层,充分暴露脊柱,沿其纵轴方向剪开椎管,获得脊髓组织。剪碎脊髓,用牛血清白蛋白密度梯度离心去髓鞘杂质、筛网过滤获得脊髓微血管段。采用酶促消化法,予0.1%Ⅱ型胶原酶消化微血管段20min后,将其接种于培养皿中,并置于CO_(2)培养箱内静止培养72h。上述操作每次取5只,重复3次,以第3次培养的目的细胞为观察、鉴定对象。通过倒置相差显微镜观察目的细胞生长情况及其形态特征、免疫细胞化学染色法检测细胞第Ⅷ因子相关抗原表达情况,鉴定所培养的目的细胞。结果:接种后的脊髓微血管段镜下呈短棍样或分支状;微血管段培养24h后有短梭形细胞从其周围迁移爬出,呈“出芽式”生长;48h后“岛屿状”的细胞集落形成,增殖迅速;72h后细胞铺满皿底,呈典型的单层、“铺路石样”、镶嵌式排列生长。免疫细胞化学染色显示,99%以上的细胞胞质呈现棕红色,Ⅷ因子相关抗原表达为阳性,苏木素衬染胞核显示为蓝色。结论:酶促消化法可以成功分离培养出活性好、纯度高的日本大耳白兔脊髓微血管内皮细胞。
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关键词
脊髓微血管内皮
细胞
酶促消化法
Ⅷ因子相关抗原
免疫细胞化学染色法
日本大耳白兔
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职称材料
重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响
2
作者
廖洪映
熊利华
+5 位作者
陈波
张惠忠
华平
殷香保
祝曙光
傅玉如
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期421-423,427,共4页
【目的】探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用。【方法】体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法...
【目的】探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用。【方法】体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化。【结果】转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P<0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P<0.01),未见典型的凋亡小体。【结论】腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复。
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关键词
心肌
细胞
凋亡
BCL-XL基因
HOECHST33342
重组
免疫细胞化学染色法
心肌
细胞
表达
细胞
凋亡指数
抗凋亡作用
TUNEL法
绿色荧光蛋白
显微镜下观察
体外培养
抗凋亡基因
腺病毒感染
正常对照组
显著性差异
腺病毒介导
SD大鼠
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职称材料
小鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定
被引量：
3
3
作者
刘昭德
马华根
唐元瑜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期325-329,共5页
目的探索和建立一种纯度高、操作简单且重复性强的小鼠脑微血管内皮细胞原代培养方法。方法通过剪碎、过细胞筛网等物理方法,结合白蛋白密度梯度离心及化学酶消化法,并以严格控制1 g/LⅡ型胶原蛋白酶消化作用时间15~20 min为首要,从2~3...
目的探索和建立一种纯度高、操作简单且重复性强的小鼠脑微血管内皮细胞原代培养方法。方法通过剪碎、过细胞筛网等物理方法,结合白蛋白密度梯度离心及化学酶消化法,并以严格控制1 g/LⅡ型胶原蛋白酶消化作用时间15~20 min为首要,从2~3周龄ICR小鼠脑组织中分离培养出小鼠脑微血管内皮细胞。通过细胞形态学观察和免疫细胞化学染色检测Ⅷ因子相关抗原鉴定所培养的细胞。结果接种24 h,贴壁的血管段周围爬出多角形或短梭状细胞,并逐渐扩散成团簇状;7 d后细胞融合,呈典型的单层、"铺路石样"镶嵌式排列。Ⅷ因子相关抗原细胞免疫化学染色鉴定为阳性,胞质呈棕红色,内皮细胞纯度达95%以上。结论成功建立了一种操作简单、重复性强、目的细胞纯度高的小鼠脑微血管内皮细胞原代培养方法。
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关键词
脑微血管内皮
细胞
原代培养
Ⅷ因子相关抗原
免疫细胞化学染色法
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职称材料
题名
兔脊髓微血管内皮细胞的体外培养及鉴定
1
作者
李柏霖
池茗
张帆
唐元瑜
机构
福建中医药大学中医学院
福建中医药大学中西医结合学院
福建中医药大学针灸推拿学院
出处
《中国脊柱脊髓杂志》
北大核心
2025年第5期516-521,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81072714)
福建省自然科学基金资助项目(编号:2017J01545)。
文摘
目的:建立一种高效的兔原代脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cells,SCMECs)的体外分离培养方法。方法:选取2周龄日本大耳白兔15只,雌雄不限。在无菌条件下剪开背部皮肤肌肉层,充分暴露脊柱,沿其纵轴方向剪开椎管,获得脊髓组织。剪碎脊髓,用牛血清白蛋白密度梯度离心去髓鞘杂质、筛网过滤获得脊髓微血管段。采用酶促消化法,予0.1%Ⅱ型胶原酶消化微血管段20min后,将其接种于培养皿中,并置于CO_(2)培养箱内静止培养72h。上述操作每次取5只,重复3次,以第3次培养的目的细胞为观察、鉴定对象。通过倒置相差显微镜观察目的细胞生长情况及其形态特征、免疫细胞化学染色法检测细胞第Ⅷ因子相关抗原表达情况,鉴定所培养的目的细胞。结果:接种后的脊髓微血管段镜下呈短棍样或分支状;微血管段培养24h后有短梭形细胞从其周围迁移爬出,呈“出芽式”生长;48h后“岛屿状”的细胞集落形成,增殖迅速;72h后细胞铺满皿底,呈典型的单层、“铺路石样”、镶嵌式排列生长。免疫细胞化学染色显示,99%以上的细胞胞质呈现棕红色,Ⅷ因子相关抗原表达为阳性,苏木素衬染胞核显示为蓝色。结论:酶促消化法可以成功分离培养出活性好、纯度高的日本大耳白兔脊髓微血管内皮细胞。
关键词
脊髓微血管内皮
细胞
酶促消化法
Ⅷ因子相关抗原
免疫细胞化学染色法
日本大耳白兔
Keywords
Microvesselsendelial cells of spinal cord
Enzymatic digestion method
FactorⅧrelated antigen
Immunocytochemistry
Japanese large ear white rabbit
分类号
R-332 [医药卫生]
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职称材料
题名
重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响
2
作者
廖洪映
熊利华
陈波
张惠忠
华平
殷香保
祝曙光
傅玉如
机构
中山大学附属第二医院心胸外科
中山大学附属第二医院医学研究中心
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期421-423,427,共4页
基金
卫生部科研基金资助项目(981093)
文摘
【目的】探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用。【方法】体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化。【结果】转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P<0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P<0.01),未见典型的凋亡小体。【结论】腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复。
关键词
心肌
细胞
凋亡
BCL-XL基因
HOECHST33342
重组
免疫细胞化学染色法
心肌
细胞
表达
细胞
凋亡指数
抗凋亡作用
TUNEL法
绿色荧光蛋白
显微镜下观察
体外培养
抗凋亡基因
腺病毒感染
正常对照组
显著性差异
腺病毒介导
SD大鼠
Keywords
cardiac myocytes
gene, bcl-xL
apoptosis
recombinant adenovirus
分类号
R542.2 [医药卫生—心血管疾病]
R456 [医药卫生—治疗学]
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职称材料
题名
小鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定
被引量：
3
3
作者
刘昭德
马华根
唐元瑜
机构
福建中医药大学中西医结合学院
福建中医药大学中医学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期325-329,共5页
基金
国家自然科学基金(81072714)
福建省自然科学基金(2017J01545)。
文摘
目的探索和建立一种纯度高、操作简单且重复性强的小鼠脑微血管内皮细胞原代培养方法。方法通过剪碎、过细胞筛网等物理方法,结合白蛋白密度梯度离心及化学酶消化法,并以严格控制1 g/LⅡ型胶原蛋白酶消化作用时间15~20 min为首要,从2~3周龄ICR小鼠脑组织中分离培养出小鼠脑微血管内皮细胞。通过细胞形态学观察和免疫细胞化学染色检测Ⅷ因子相关抗原鉴定所培养的细胞。结果接种24 h,贴壁的血管段周围爬出多角形或短梭状细胞,并逐渐扩散成团簇状;7 d后细胞融合,呈典型的单层、"铺路石样"镶嵌式排列。Ⅷ因子相关抗原细胞免疫化学染色鉴定为阳性,胞质呈棕红色,内皮细胞纯度达95%以上。结论成功建立了一种操作简单、重复性强、目的细胞纯度高的小鼠脑微血管内皮细胞原代培养方法。
关键词
脑微血管内皮
细胞
原代培养
Ⅷ因子相关抗原
免疫细胞化学染色法
Keywords
brain microvascular endothelial cells
primary culture
factorⅧ-associated antigen
immunocytochemistry
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
兔脊髓微血管内皮细胞的体外培养及鉴定
李柏霖
池茗
张帆
唐元瑜
《中国脊柱脊髓杂志》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响
廖洪映
熊利华
陈波
张惠忠
华平
殷香保
祝曙光
傅玉如
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
小鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定
刘昭德
马华根
唐元瑜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
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职称材料
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