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一种低成本、低本底的免疫细胞化学反应方法 被引量:1
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作者 吴燕 于顺 +1 位作者 丁爱石 范明 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期184-186,T035,共4页
为了探讨一种适合培养细胞的低本底、低成本免疫细胞化学方法 ,本研究将低浓度的 Triton X-10 0加入抗体稀释液和洗液中 ,观察了其对 ABC反应时的抗体和 ABC的使用浓度和反应效果的影响。结果证明 ,在抗体稀释液和洗液中加入 0 .1%Trito... 为了探讨一种适合培养细胞的低本底、低成本免疫细胞化学方法 ,本研究将低浓度的 Triton X-10 0加入抗体稀释液和洗液中 ,观察了其对 ABC反应时的抗体和 ABC的使用浓度和反应效果的影响。结果证明 ,在抗体稀释液和洗液中加入 0 .1%Triton X-10 0可以增强细胞对抗体的通透性 ,在不减弱阳性信号的状况下使 -抗的使用浓度明显降低 ,使生物素化二抗和 ABC的使用浓度达到 1/ 10 0 0~ 1/ 40 0 0 ,并大大减弱染色本底。本研究结果提示 ,在这一稀释度明显低于目前试剂盒建议的使用浓度。在充分显示阳性信号的前提下 ,使抗体的使用浓度和量大幅度减少 。 展开更多
关键词 免疫细胞化学反应方法 TRITONX-100 抗体 培养细胞 大鼠
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LPS对人脐静脉内皮细胞增殖和ESM-1表达的影响 被引量:1
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作者 卜丽佳 左莉 +4 位作者 任传利 张素梅 周青 桂淑玉 汪渊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第1期7-9,共3页
目的探讨LPS对人脐静脉内皮细胞(ECV304)的生长和内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1,ESM-1)表达的影响.方法在体外,用1 ml/L和5 ml/L的LPS在不同时间作用于ECV304,观察细胞形态的变化,用MTT法和免疫细胞化学... 目的探讨LPS对人脐静脉内皮细胞(ECV304)的生长和内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1,ESM-1)表达的影响.方法在体外,用1 ml/L和5 ml/L的LPS在不同时间作用于ECV304,观察细胞形态的变化,用MTT法和免疫细胞化学方法对细胞增殖和ESM-1、ERK、p-ERK在细胞中的表达.结果 LPS作用于ECV304 24 h后,细胞形态发生变化,梭形明显,排列紊乱.短时间内(0.5、1 h)LPS对ECV304有增殖作用.LPS可快速促进ESM-1的表达,在0.5、1 h时表达量较高.LPS作用后,ERK的表达无明显变化,但在一段时间(0.5~4 h)内ERK的磷酸化明显增加.结论 LPS对ECV304中ESM-1的表达有促进作用.推测ESM-1可能作为一种细胞因子与LPS在炎症反应中发挥着作用. 展开更多
关键词 LPS 表达量 ERK 人脐静脉内皮细胞 ECV304 细胞形态 增殖作用 磷酸化 免疫细胞化学方法 变化
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NRF4转染对横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子表达的影响
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作者 李光辉 王东林 +2 位作者 陈正堂 李德志 万瑛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期876-877,F004,共3页
为观察MRF4转染对人横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子MyoD表达的影响,利用脂质体法将MRF4转染人横纹肌肉瘤RD细胞,原位杂交检测MRF4、MyoD mRNA的表达,观察细胞形态、生长速度变化,并采用免疫细胞化学方法检测横纹肌肌球蛋白重链及... 为观察MRF4转染对人横纹肌肉瘤RD细胞分化及生肌调节因子MyoD表达的影响,利用脂质体法将MRF4转染人横纹肌肉瘤RD细胞,原位杂交检测MRF4、MyoD mRNA的表达,观察细胞形态、生长速度变化,并采用免疫细胞化学方法检测横纹肌肌球蛋白重链及肌动蛋白α-actin表达。结果显示,转染后RD细胞形态向高分化方向变化,生长受抑;MRF4、MyoD表达明显增加;细胞肌球蛋白重链和肌动蛋白α-actin表达显著增强。提示MRF具有促进RD细胞分化的作用,并可激活另一生肌调节因子MyoD的表达。 展开更多
关键词 细胞分化 MRF4 横纹肌肉瘤 肌形成调节因子 原位杂交 免疫细胞化学方法
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大鼠谷氨酰胺合成酶RNA干扰表达载体的构建及其影响星形胶质细胞黏附的初探 被引量:1
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作者 刘春兴 张滨 邹健 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1397-1401,共5页
目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-... 目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-G细胞,以GFP为指标鉴定其有效性;体外合成该siRNA插入序列,将其定向克隆至真核表达载体pRNATH1.l/Neo中并转染至大鼠星形胶质细胞中,以免疫细胞化学方法鉴定GS的表达;通过免疫化学法对actin特异性染色分析GSRNA干扰后对星形胶质细胞黏附的影响。结果:GS siRNA能有效抑制GS-EGFP在Hela-G细胞中的表达;DNA测序证实合成并被克隆入真核表达载体pRNAT HI.1/Neo的siRNA插入序列完全正确,GS siRNA表达载体可特异性抑制星形胶质细胞中GS的表达;GS RNA干扰导致细胞黏附力显著降低。结论:成功构建大鼠GS siRNA真核表达载体,初步表明GS影响星形胶质细胞的黏附,为后期研究GS在中枢神经系统损伤后反应性星形胶质细胞中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 反应性星形胶质细胞 谷氨酰胺合成酶 真核表达载体 RNA干扰 细胞黏附 SIRNA表达载体 大鼠 免疫细胞化学方法
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慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达
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作者 周艳玲 刘能保 张敏海 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期317-317,共1页
为探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义,将成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周... 为探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义,将成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周。实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩。运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Westernblot和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化。 展开更多
关键词 慢性复合应激 大鼠海马 Morris水迷宫测试 WESTERNBLOT 免疫细胞化学方法 RT-PCR技术 新生神经元 mRNA水平
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