小反刍兽疫诊断技术研究进展 被引量：1

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作者 张石豪 张忠湛 +2 位作者 刘笑扬 印春生 赵传芳 《中兽医医药杂志》 2025年第4期42-46,共5页

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种以发热、口炎、肠炎为特征,严重危害家养和野生小型反刍动物的高度接触性传染病。目前,我国的PPR疫情整体平稳,但由周边国家传入疫情的风险持续存在。快速、准确的诊断技术对于及时... 小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种以发热、口炎、肠炎为特征,严重危害家养和野生小型反刍动物的高度接触性传染病。目前,我国的PPR疫情整体平稳,但由周边国家传入疫情的风险持续存在。快速、准确的诊断技术对于及时发现并阻断疫情传播至关重要。目前广泛使用的小反刍兽疫诊断方法可分为病原学检测和血清学检测。病原学检测主要包括病毒分离、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、环介导等温扩增(RT-LAMP)、重组聚合酶扩增(RT-RPA)、重组酶介导的扩增技术(RT-RAA)等。其中病毒分离培养是检测PPRV的金标准,qRT-PCR被认为是PPRV核酸检测的金标准,RT-LAMP、RT-RPA和RT-RAA等恒温扩增技术适用于现场快速诊断。血清学检测包括病毒中和试验(VNT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫层析试纸条、化学发光免疫分析方法(CLIA)和时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)等。其中,VNT是世界动物卫生组织(WOAH)认可的抗体检测金标准;免疫层析试纸条操作简单、检测迅速,适合PPRV的快速检测。此外,RT-PCR、qRT-PCR和竞争ELISA是《小反刍兽疫诊断技术》(GB/T 27982-2011)推荐的主要检测方法。不同检测技术各有优缺点,检测人员可根据实际需求选择合适的诊断技术。根据基层人员的临床需要和疫情监测的需求,未来PPR诊断技术或将朝着操作简单、成本低廉、结果可视化的目标以及更高效率、高灵敏度、强特异性和高通量的方向发展。 展开更多

关键词 小反刍兽疫 诊断 病原学 血清学 反转录荧光定量pcr 环介导等温扩增 酶联免疫吸附试验

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豇豆花叶病毒和黑眼豇豆花叶病毒RT-Realtime PCR及IC-RT-Realtime PCR检测方法研究 被引量：3

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作者 李彬 粟寒 +3 位作者 李艳华 缪爱斌 吴翠萍 安榆林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期105-109,共5页

建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Real... 建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Realtime)PCR检测方法以及双重IC-RT-Realtime PCR检测方法。该单重及双重IC-RT-Real-time PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点,适用于豆类种苗中对CPMV和BlCMV的检测。 展开更多

关键词 豇豆花叶病毒 黑眼豇豆花叶病毒 免疫捕获反转录实时荧光pcr 双重反转录实时荧光pcr

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一种豇豆重花叶病毒IC-RT real-time PCR检测方法的建立 被引量：3

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作者 李彬 粟寒 +2 位作者 吴翠萍 周明华 安榆林 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期491-496,共6页

为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTre... 为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTreal-time PCR方法.结果表明:IC-RTreal-time PCR方法的灵敏度可达500 pg叶组织;该方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便等优点,省去了RNA的提取过程,适用于豇豆等豆类种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测. 展开更多

关键词 豇豆重花叶病毒 免疫捕获反转录 实时荧光pcr

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18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒 被引量：2

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作者 何煜波 陈集双 +2 位作者 陈海敏 冯俊丽 高必达 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2006年第3期103-106,共4页

利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.... 利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化. 展开更多

关键词 实时荧光pcr 黄瓜花叶病毒 反转录-pcr 双夹心酶联免疫反应 半夏

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利用外源RNA作为内参结合qPCR准确检测SF2蛋白RIP富集RNA的效率

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作者 李雨 赵磊 +3 位作者 陈利 周宇荀 李凯 肖君华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期78-82,共5页

利用实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测0.1%甲醛交联RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)富集SF2蛋白相互作用的RNA效率,为研究可变剪接因子SF2相互作用RNA的富集效率提供准确... 利用实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测0.1%甲醛交联RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)富集SF2蛋白相互作用的RNA效率,为研究可变剪接因子SF2相互作用RNA的富集效率提供准确的质检方案。采用RIP技术获取He La细胞中SF2蛋白相互作用的RNA,等比例加入外源酿酒酵母(BY4741)RNA,并以其β-actin作为内参基因,利用q PCR检测RIP富集SF2蛋白相互作用RNA的效率。结果显示,0.1%甲醛交联RIP技术特异性捕获得到SF2蛋白-RNA复合物;q PCR技术检测阳性基因PABP、Srsf1在SF2抗体捕获的产物和Ig G抗体的产物中相应RNA的浓度差异均在60倍以上。利用q PCR技术,以外源酿酒酵母(BY4741)RNA作为内参,能快速、准确定量检测RNA的富集效率。 展开更多

关键词 甲醛交联免疫共沉淀 内参基因 RNA富集 反转录实时荧光定量pcr

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警惕牛免疫缺陷病在我国蔓延

6

作者 魏民 《畜牧兽医科技信息》 1996年第5期7-8,共2页

天津动植物检疫局秦贞奎等和南开大学耿运淇等,用蛋白印迹法以TrepE—P²⁶融合蛋白做抗原,对我国近年来进口奶牛的514份血清和另外两个市的部分奶牛场进口牛的后代采集963份血清进行了检测。结果表明,进口牛阳性... 天津动植物检疫局秦贞奎等和南开大学耿运淇等,用蛋白印迹法以TrepE—P²⁶融合蛋白做抗原,对我国近年来进口奶牛的514份血清和另外两个市的部分奶牛场进口牛的后代采集963份血清进行了检测。结果表明,进口牛阳性的13头,阳性率为2.53％;进口牛后代阳性的34头,阳性率为3.53％,上述结果,用蛋白印迹法和反转录酶序列的PCR反应及其产物的夹缝杂交所确认。 展开更多

关键词 免疫缺陷病 融合蛋白 蛋白印迹法 阳性率 奶牛场 动植物检疫 pcr反应 反转录酶 南开大学 抗原

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不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测

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作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-17,共7页

为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感... 为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。 展开更多

关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 排毒规律 反转录pcr(RT-pcr) 实时荧光定量pcr(RT-qpcr) 间接免疫荧光试验(IFA)

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高粱红条病病原的分子鉴定 被引量：5

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作者 蒋军喜 周雪平 石银鹿 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期255-259,共5页

从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物 ,命名为 GL- SX。根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白 (CP)基因 C-端和复制酶 (NIb)基因 C-端的保守序列设计引物 ,对 GL - SX进行免疫捕获反转录 PCR (IC- RT- PCR)扩增 ,获得一... 从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物 ,命名为 GL- SX。根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白 (CP)基因 C-端和复制酶 (NIb)基因 C-端的保守序列设计引物 ,对 GL - SX进行免疫捕获反转录 PCR (IC- RT- PCR)扩增 ,获得一条长约 1.1kb的扩增片段 ,扩增片段克隆后测定序列 ,该序列含 10 87个核苷酸 (nt) ,编码 36 2氨基酸 (aa) ,取其中的近全长 CP氨基酸序列 (2 96 aa)与甘蔗花叶病毒 (Sugarcane mosaic virus,SCMV)、玉米矮花叶病毒 (Maize dwarf mosaic virus,MDMV)、高粱花叶病毒 (Sorghum mosaic virus,Sr MV)和约翰逊草花叶病毒 (Johnsongrass mosaicvirus,JGMV)等 4种病毒的对应序列进行同源性比较 ,结果与 SCMV的同源性最高 (95 .3% ) ,而与Sr MV、MDMV和 JGMV等 3种病毒的同源性相对较低 ,依次为 6 9.3%、6 9.1%和 5 5 .4 %。根据Potyvirus属病毒种类划分的标准 ,将 GL - SX鉴定为 SCMV。将 GL- SX的近全长 CP氨基酸序列与SCMV种内各分离物的对应序列进行同源性比较及构建关系树 ,结果显示 GL- SX与 SCMV- MDB具有较远缘的种内亲缘关系 ,而与德国的一个 SCMV玉米分离物 (SCVM- Hoe)及中国的两个玉米分离物(SCMV- ZJ和 SCMV- BJ) 展开更多

关键词 高梁红条病 病原 分子鉴定 免疫捕获反转录pcr 甘蔗花叶病毒

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水稻黑条矮缩病病毒外壳蛋白基因S10的原核表达、多克隆抗体制备及应用 被引量：19

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作者 欧阳元龙 吴建祥 +2 位作者 熊如意 周益军 周雪平 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-30,共6页

用RT-PCR方法从感染水稻黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)水稻中克隆该病毒的外壳蛋白基因S10,然后将此外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a-CP。将重组表达载体转化大肠杆菌... 用RT-PCR方法从感染水稻黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)水稻中克隆该病毒的外壳蛋白基因S10,然后将此外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体PET-32a中构建成重组原核表达载体pET32a-CP。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,Ni+ NTA亲和柱纯化获得分子量约为76kD含硫氧还蛋白的融合蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子制备RBSDV外壳蛋白的多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了可靠、灵敏、特异的检测RBSDV的免疫捕获RT-PCR及Dot-blot ELISA方法,为该水稻病毒病的诊断提供技术支持。 展开更多

关键词 水稻黑条矮缩病病毒 原核表达 多克隆抗体 免疫捕获反转录聚合酶链式反应 斑点酶联免疫吸附测定

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正常和放射复合伤口血管再生中VEGF基因的表达及其意义 被引量：7

10

作者 彭瑞云 高亚兵 +2 位作者 熊呈琦 秦全红 王德文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期410-412,共3页

目的研究ＶＥＧＦ 基因在正常和放射复合伤口愈合中的表达及意义，探讨其在血管再生中的作用。方法将４ ８ 只Ｗｉｓｔａ ｒ 二级大鼠背部皮肤造成圆形伤口后，以２５Ｇｙ ６０ Ｃｏ γ射线局部照射，于伤后２ 、５ 、１０ 、１５ 、２ ... 目的研究ＶＥＧＦ 基因在正常和放射复合伤口愈合中的表达及意义，探讨其在血管再生中的作用。方法将４ ８ 只Ｗｉｓｔａ ｒ 二级大鼠背部皮肤造成圆形伤口后，以２５Ｇｙ ６０ Ｃｏ γ射线局部照射，于伤后２ 、５ 、１０ 、１５ 、２ １ 和２８ｄ 活杀取材，采用免疫组织化学、原位杂交和原位ＰＣ Ｒ 等方法，研究ＶＥＧＦ 基因的表达及意义。结果单纯创伤组于伤后２ｄ，新生血管内皮细胞浆内ＶＥＧＦ 的表达呈强阳性；５ ｄ 时毛细血管数明显增多，其内皮细胞胞浆内ＶＥＧＦ 表达呈阳性；而于１０ｄ后，ＶＥＧＦ 的表达逐渐减少。创伤＋照射组则于伤后５ｄ，ＶＥＧＦ 的表达在血管内皮细胞胞浆内呈弱阳性，１０ ｄ 时阳性，１５ ｄ 后则呈弱阳性。原位杂交显示，ＶＥＧＦｍＲＮＡ 于单纯创伤组伤后２ ～５ ｄ 及创伤＋照射组伤后５ ～１０ｄ，血管内皮细胞浆内阳性。原位反转录ＰＣ Ｒ 则显示，ＶＥＧＦｍＲＮ Ａ 于单纯创伤组伤后２ ～１５ｄ 及创伤＋照射组伤后５ ～２８ｄ，呈阳性反应。结论内源性ＶＥＧＦ 基因的表达参与创伤愈合中血管再生过程。辐射使血管内皮细胞中ＶＥＧＦ 的表达减少。原位反转录ＰＣ Ｒ 方法较原位杂交能客观地反映内源性ＶＥＧＦ 基因的表达情况。 展开更多

关键词 伤口愈合 血管再生 VEGF 免疫组织化学 原位反转录pcr

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保定地区一种新辣椒病毒病的鉴定 被引量：15

11

作者 夏惠娟 李志勇 +1 位作者 郭京泽 李兴红 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期65-67,86,共4页

从保定东郊温室大棚中典型花叶症状的甜椒病株上得到1个病毒分离物（BD），经枯斑二三生烟分离纯化3次后，并保存在茄门甜椒上。通过酶联免疫方法、鉴别寄主反应、电镜观察测定等，确定保定分离物是辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle ... 从保定东郊温室大棚中典型花叶症状的甜椒病株上得到1个病毒分离物（BD），经枯斑二三生烟分离纯化3次后，并保存在茄门甜椒上。通过酶联免疫方法、鉴别寄主反应、电镜观察测定等，确定保定分离物是辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus，PMMoV）。用Trizol提取病叶总RNA，反转录为cDNA，通过2对特异性引物，分别扩增出病毒外壳蛋白基因片段和与病毒复制相关蛋白基因片段。保定分离物的病毒外壳蛋白基因，与5个PMMoV分离物核甘酸同源性为94．5％～100％，而与3个TMV分离物核苷酸同源性为65．4％～67．7％，从而进一步验证了保定分离物为PMMOV。 展开更多

关键词 辣椒轻斑驳病毒 双抗体夹心酶联免疫吸附反应 反转录pcr 辣椒

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建兰花叶病毒的分子生物学检测 被引量：8

12

作者 高焕利 杨翠云 +1 位作者 于翠 马青 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期289-292,296,共5页

根据建兰花叶病毒外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,采用IC-RT-PCR方法和质粒梯度稀释的方法,研究建兰花叶病毒的分子检测方法和灵敏度。结果表明,从21个建兰花叶病毒的病株样品中均能扩增出与预期大小相同的DNA条带,序列测定和序列... 根据建兰花叶病毒外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,采用IC-RT-PCR方法和质粒梯度稀释的方法,研究建兰花叶病毒的分子检测方法和灵敏度。结果表明,从21个建兰花叶病毒的病株样品中均能扩增出与预期大小相同的DNA条带,序列测定和序列同源性分析表明所测定的序列均为CyMV外壳蛋白基因的部分序列,序列同源性均达到89%以上;灵敏度检测结果表明:可检测的最低病毒含量为2.72×10-7μg/mL。 展开更多

关键词 建兰花叶病毒(CyMV) 免疫捕获反转录聚合酶链式反应 灵敏度检测

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人脑胶质瘤PTEN基因mRNA和蛋白的表达及其相关性分析 被引量：1

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作者 孟喜君 刘勇 +1 位作者 王茂德 谢万福 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期596-598,共3页

目的探讨PTEN mRNA和蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及临床意义,并分析其相关性。方法分别采用反转录PCR(RT-PCR)和免疫组化(I HC)方法检测PTEN在正常脑组织及不同组织学分级的人脑胶质瘤组织中的表达情况。结果Kruskal-wallis H检验显示,P... 目的探讨PTEN mRNA和蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及临床意义,并分析其相关性。方法分别采用反转录PCR(RT-PCR)和免疫组化(I HC)方法检测PTEN在正常脑组织及不同组织学分级的人脑胶质瘤组织中的表达情况。结果Kruskal-wallis H检验显示,PTEN在脑胶质瘤组织中的表达与正常脑组织相比差异有统计学意义(P<0.01),且随着胶质瘤恶性程度的增高,PTEN表达强度逐渐下降。结论PTEN表达的缺失可能是脑胶质瘤发生、发展过程中极其重要的环节,PTEN可能是脑胶质瘤发生以及其预后判断的重要生物学指标。 展开更多

关键词 胶质瘤 PTEN 反转录pcr 免疫组织化学

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上海地区宠物犬中戊型肝炎病毒流行病学调查 被引量：7

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作者 刘俊峰 华修国 +3 位作者 张文 李培锋 杨志彪 沈权 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第14期5895-5896,5941,共3页

[目的]为探讨宠物犬在戊型肝炎病毒(HEV)流行环节中的作用提供依据。[方法]以散养宠物犬为研究对象,从上海地区及其周边地区随机采集70份血清样品,通过双抗原夹心ELISA试验检测抗HEV抗体,分析不同品种和不同性别宠物犬中血清抗HEV抗体... [目的]为探讨宠物犬在戊型肝炎病毒(HEV)流行环节中的作用提供依据。[方法]以散养宠物犬为研究对象,从上海地区及其周边地区随机采集70份血清样品,通过双抗原夹心ELISA试验检测抗HEV抗体,分析不同品种和不同性别宠物犬中血清抗HEV抗体阳性率。利用反转录巢式PCR检测血清中病毒核酸。[结果]在70份宠物犬血清样品中,15份样品中抗HEV抗体呈阳性,阳性率为21.4%。上海地区宠物犬阳性率为27.5%,高于上海周边地区。在供试的宠物犬品种中,杜宾犬的HEV抗体阳性率较高(33.3%),其他品种宠物犬为11.1%～25.0%。雌性宠物犬中HEV阳性率为34.4%,显著高于雄性宠物犬。在各种宠物犬中未检测到HEV核酸颗粒。[结论]宠物犬对HEV敏感,在HE流行环节中具有不容忽视的作用。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 反转录巢式pcr 双抗原夹心酶联免疫试验

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烟草悬凝物诱导永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的研究

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作者 谢俊豪 吴庆琛 +4 位作者 张诚 李强 朱茂祥 杨陟华 潘秀颉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期49-51,共3页

目的:探讨人支气管上皮细胞(BEP-2D)恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的变化。方法:选取正常BEP-2D细胞及经烟草悬凝物处理后的第15代(P-15)、25代(P-25)、38代(P-38)BEP-2D细胞共4组细胞株作为研究对象,采用半定量反转录PCR(Retro... 目的:探讨人支气管上皮细胞(BEP-2D)恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的变化。方法:选取正常BEP-2D细胞及经烟草悬凝物处理后的第15代(P-15)、25代(P-25)、38代(P-38)BEP-2D细胞共4组细胞株作为研究对象,采用半定量反转录PCR(Retro-translation PCR,RT-PCR)检测各组细胞株中survivin基因变化,免疫组织化检测各组中survivin蛋白的表达。结果:1.survivin mRNA在正常细胞BEP-2D中的表达强度为0.08,在转化的肺癌细胞P-15、P-25和P-38中分别为0.56、0.80和0.81。2.survivin蛋白在正常BEP-2D细胞株中表达阴性,在转化的3组细胞中表达阳性,且survivin蛋白在正常细胞与转化细胞株中的表达存在明显差异,其中在P-15具有明显差异(P<0.05)。结论:survivin基因及蛋白的表达水平可作为早期肺癌的一个检测指标。 展开更多

关键词 烟草悬凝物 永生化人支气管上皮细胞 survivin基因及蛋白 免疫组化 半定量反转录pcr

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