免疫磁捕获-实时荧光PCR快速检测鸡肉中沙门氏菌 被引量：19

1

作者 张东方 袁飞 +3 位作者 王娉 胡玥 陈颖 葛毅强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期142-147,共6页

对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃... 对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃振荡孵育1.5 h,制备得到抗沙门氏菌免疫磁珠,与市售沙门氏菌免疫磁珠试剂盒(Dynal产品)捕获效率相当。免疫磁捕获-实时荧光PCR检测方法检测限为104 CFU/mL左右,能在16 h内检测出鸡肉中104 CFU/mL的沙门氏菌,可用于食品中沙门氏菌的快速检测。 展开更多

关键词 沙门氏菌 免疫磁捕获法 实时荧光pcr 检测

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应用反转录PCR和实时荧光定量PCR技术判定现场物证生物属性 被引量：3

2

作者 许炎 张晨 +5 位作者 徐庆文 黄江平 刘亚楠 邹凯南 平原 周怀谷 《法医学杂志》 CAS CSCD 2013年第4期259-262,共4页

目的探寻分子生物学方法判定刑事案件现场物证的生物属性的可行性。方法取30份现场生物检材,其中血液(斑)、唾液(斑)、精液(斑)各10份,分别进行常规检验法和分子生物学方法,通过DNA-RNA共提取技术,将其中的mRNA运用反转录PCR(reverse tr... 目的探寻分子生物学方法判定刑事案件现场物证的生物属性的可行性。方法取30份现场生物检材,其中血液(斑)、唾液(斑)、精液(斑)各10份,分别进行常规检验法和分子生物学方法,通过DNA-RNA共提取技术,将其中的mRNA运用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术反转录成cDNA,根据3种生物检材不同的目标基因设计3对特异性引物,进行实时荧光定量PCR扩增,通过熔解曲线测定不同的熔解温度(Tm)和不同长度的扩增片段来区分生物检材。结果血液(斑)的Tm值为(84.5±0.2)℃,片段长度177 bp;唾液(斑)的Tm值为(76.9±0.3)℃,片段长度134 bp;精液(斑)的Tm值为(88.5±0.2)℃,片段长度294 bp。结论与常规检验法比较,联合应用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术判定检材的生物属性特异性强、灵敏度高、结果稳定可靠,可应用于日常法医物证检验。 展开更多

关键词 法医遗传学 反转录pcr 实时荧光定量pcr 血液 唾液 精液

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人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-PCR定量检测 被引量：7

3

作者 郭颖 刘军 +2 位作者 薛采芳 吴静 宋天保 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期618-620,共3页

目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA。同时定... 目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA。同时定量测定人 β 肌动蛋白 (hBA)的mRNA作为内对照。用梯度稀释的克隆的人 β 肌动蛋白基因制作标准曲线。结果 :标准曲线的相关系数为 1.0 0。实时荧光反转录PCR方法的平均变异系数为 7.1%。HepG2细胞hTERTmRNA与hBAmRNA的比值为 (1.3± 0 .3)× 10 -4。结论 :建立了可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。 展开更多

关键词 RNA 端粒酶催化亚单位 实时荧光pcr 反转录pcr HepG2细胞 定量测定 Β-肌动蛋白 BA 稀释 特异引物

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苏太猪肌内脂肪沉积相关基因SRC-1的差异显示反转录PCR鉴定 被引量：1

4

作者 薛春阳 汪秀星 +4 位作者 王晓娜 刘红林 徐银学 程占军 陈杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期126-129,共4页

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed ... 采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed sequence tags),即EST序列,通过GenBank比对发现其中3条为已知序列。为进一步验证这3个已知基因与肌内脂肪之间的关系,从90个个体中选取肌内脂肪最高和最低各15个个体进行实时定量PCR检测。结果表明,细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1)mRNA表达水平与肌内脂肪含量存在负相关关系(r=-0.38,P<0.05)。提示:SRC-1蛋白有可能参与了肌内脂肪沉积的调节。 展开更多

关键词 差异显示反转录pcr 肌内脂肪 实时荧光定量pcr 细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1) 苏太猪

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基于单细胞转录组测序技术筛选蟾蜍耳后腺免疫修复基因

5

作者 郭媛媛 陈晶 +2 位作者 陈文潇 洪永健 胡晶红 《山东农业科学》 北大核心 2024年第11期133-140,共8页

中华大蟾蜍是我国传统药源动物,是名贵中药材蟾酥的基原物种之一。为筛选中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因,本试验采用Illumina测序平台对成年中华大蟾蜍耳后腺组织样本进行单细胞转录组测序(scRNA-seq),完成scRNA-seq文库构建后进行细胞... 中华大蟾蜍是我国传统药源动物,是名贵中药材蟾酥的基原物种之一。为筛选中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因,本试验采用Illumina测序平台对成年中华大蟾蜍耳后腺组织样本进行单细胞转录组测序(scRNA-seq),完成scRNA-seq文库构建后进行细胞亚群分类,对细胞亚群中上调表达基因和免疫修复相关基因进行分析,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对候选基因进行初步筛选与验证。结果表明,蟾蜍耳后腺组织中用于文库构建和双端测序的细胞数量为8414个,每个细胞的平均读数和中位基因数为46326和734,可用于进一步分析的高质量细胞数为7687个。聚类分析得到12个细胞亚群,并推测Cluster 10是来源于结缔组织的浆细胞。通过GO和KEGG分析对Cluster 10中的217个上调表达基因进行分析,鉴定出多个参与机体免疫的生物过程和通路,包括淋巴细胞活化、淋巴细胞分化及白细胞活化等生物过程和细胞受体信号通路、Fc epsilon RI信号通路及趋化因子信号通路等免疫相关通路。从Cluster 10的差异基因中筛选出MYO1F基因和CYBB基因为中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因,并通过qRT-PCR对两基因进行验证,推测对免疫修复具有正向调节作用。本研究结果可为后续挖掘蟾蜍耳后腺免疫修复基因、研究蟾蜍耳后腺采酥后的修复机制提供理论依据,为蟾蜍耳后腺单细胞组学研究提供参考信息。 展开更多

关键词 单细胞转录组测序 中华大蟾蜍 耳后腺 免疫修复基因 实时荧光定量pcr

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小反刍兽疫诊断技术研究进展 被引量：1

6

作者 张石豪 张忠湛 +2 位作者 刘笑扬 印春生 赵传芳 《中兽医医药杂志》 2025年第4期42-46,共5页

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种以发热、口炎、肠炎为特征,严重危害家养和野生小型反刍动物的高度接触性传染病。目前,我国的PPR疫情整体平稳,但由周边国家传入疫情的风险持续存在。快速、准确的诊断技术对于及时... 小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种以发热、口炎、肠炎为特征,严重危害家养和野生小型反刍动物的高度接触性传染病。目前,我国的PPR疫情整体平稳,但由周边国家传入疫情的风险持续存在。快速、准确的诊断技术对于及时发现并阻断疫情传播至关重要。目前广泛使用的小反刍兽疫诊断方法可分为病原学检测和血清学检测。病原学检测主要包括病毒分离、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、环介导等温扩增(RT-LAMP)、重组聚合酶扩增(RT-RPA)、重组酶介导的扩增技术(RT-RAA)等。其中病毒分离培养是检测PPRV的金标准,qRT-PCR被认为是PPRV核酸检测的金标准,RT-LAMP、RT-RPA和RT-RAA等恒温扩增技术适用于现场快速诊断。血清学检测包括病毒中和试验(VNT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫层析试纸条、化学发光免疫分析方法(CLIA)和时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)等。其中,VNT是世界动物卫生组织(WOAH)认可的抗体检测金标准;免疫层析试纸条操作简单、检测迅速,适合PPRV的快速检测。此外,RT-PCR、qRT-PCR和竞争ELISA是《小反刍兽疫诊断技术》(GB/T 27982-2011)推荐的主要检测方法。不同检测技术各有优缺点,检测人员可根据实际需求选择合适的诊断技术。根据基层人员的临床需要和疫情监测的需求,未来PPR诊断技术或将朝着操作简单、成本低廉、结果可视化的目标以及更高效率、高灵敏度、强特异性和高通量的方向发展。 展开更多

关键词 小反刍兽疫 诊断 病原学 血清学 反转录荧光定量pcr 环介导等温扩增 酶联免疫吸附试验

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转录介导的扩增技术与real-time RT-PCR在人类免疫缺陷病毒检测中的应用

7

作者 吴大先 陶淑慧 +3 位作者 刘水平 周杰斌 谭德明 侯周华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期776-782,共7页

目的:利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification,TMA)扩增HIV RNA,探讨TMA技术扩增HIV RNA的敏感性及其与实时荧光定量反转录聚合酶链反应的比较。方法:利用Taq Man探针、特异性引物、鼠白血病反转录酶、T7-RNA聚... 目的:利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification,TMA)扩增HIV RNA,探讨TMA技术扩增HIV RNA的敏感性及其与实时荧光定量反转录聚合酶链反应的比较。方法:利用Taq Man探针、特异性引物、鼠白血病反转录酶、T7-RNA聚合酶及PCR底物等建立TMA扩增体系。通过扩增一组10倍梯度稀释的HIV RNA转录标准品,评价TMA体系的灵敏性。收集60例HIV感染患者的血浆,同时采用TMA试剂与Cobas Amplicor HIV-1 Monitor 1.5版试剂进行检测,比较两种方法的阳性检出率,并利用线性回归和Bland-Altman法分析两种技术的相关性和一致性。结果:成功建立了TMA扩增体系,这种技术可以检测低至10 copies/m L的HIV转录标准品。60份HIV感染者血浆样本中,TMA及Cobas均检测到阳性46份,均阴性12份,TMA检测阴性而Cobas检测阳性样本2份,检测一致率为96.7%。两种技术阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。对其中46份TMA检测和Cobas检测均有定量结果的血浆进行线性回归分析,两种技术有非常好的相关性(r=0.997,P<0.001)。Bland-Altman分析显示两种检测方法定量Lg差值平均值为0.02,44份(95.7%)样本在95%的一致性界限内。结论:TMA技术具有高灵敏性潜能。TMA与real-time RT-PCR检测血浆中HIV RNA具有非常好的相关性与一致性。 展开更多

关键词 转录介导的扩增技术 人类免疫缺陷病毒 实时荧光定量反转录聚合酶链反应 线性回归

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樱桃病毒A实时荧光定量PCR检测技术的建立与应用 被引量：1

8

作者 刘欢 刘格 李锐 《湖北农业科学》 2023年第7期163-169,共7页

在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特... 在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特异性强的引物(CVA-dF2、CVA-dR2),基于SYBR Green I荧光染料建立反转录实时荧光定量PCR检测CVA的方法。该方法重复性好、灵敏度高,无需借助内参基因即可准确检测目的病毒载量,绝对定量标准曲线斜率为-3.5746,决定系数R2为0.9986,扩增效率为0.9044,比常规RT-PCR检测灵敏度高10倍。该方法的建立为CVA定量研究提供了有力工具,可用于果树中CVA批量检测或低丰度病毒样品检测。 展开更多

关键词 樱桃病毒A(CVA) 反转录实时荧光定量pcr 快速检测

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豇豆花叶病毒和黑眼豇豆花叶病毒RT-Realtime PCR及IC-RT-Realtime PCR检测方法研究 被引量：3

9

作者 李彬 粟寒 +3 位作者 李艳华 缪爱斌 吴翠萍 安榆林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期105-109,共5页

建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Real... 建立了豇豆两种种传病毒豇豆花叶病毒(CPMV)和黑眼豇豆花叶病毒(BlCMV)RT-Realtime PCR检测方法以及双重RT-Realtime PCR检测方法。在此基础上,根据免疫学抗原抗体特异性吸附的特点,建立了CPMV和BlCMV免疫捕获反转录荧光定量(IC-RT-Realtime)PCR检测方法以及双重IC-RT-Realtime PCR检测方法。该单重及双重IC-RT-Real-time PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点,适用于豆类种苗中对CPMV和BlCMV的检测。 展开更多

关键词 豇豆花叶病毒 黑眼豇豆花叶病毒 免疫捕获反转录实时荧光pcr 双重反转录实时荧光pcr

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一种豇豆重花叶病毒IC-RT real-time PCR检测方法的建立 被引量：3

10

作者 李彬 粟寒 +2 位作者 吴翠萍 周明华 安榆林 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期491-496,共6页

为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTre... 为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeasevere mosaic virus,CPSMV)免疫捕获-反转录-实时荧光(IC-RTreal-time)PCR分子检测方法,利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株,先建立CPSMVRTreal-time PCR检测方法;在此基础上,建立用于CPSMV检测的IC-RTreal-time PCR方法.结果表明:IC-RTreal-time PCR方法的灵敏度可达500 pg叶组织;该方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便等优点,省去了RNA的提取过程,适用于豇豆等豆类种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测. 展开更多

关键词 豇豆重花叶病毒 免疫捕获反转录 实时荧光pcr

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18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒 被引量：2

11

作者 何煜波 陈集双 +2 位作者 陈海敏 冯俊丽 高必达 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2006年第3期103-106,共4页

利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.... 利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化. 展开更多

关键词 实时荧光pcr 黄瓜花叶病毒 反转录-pcr 双夹心酶联免疫反应 半夏

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嗜酸乳杆菌在初始弱酸碱条件下对HT-29细胞免疫因子的调节作用 被引量：7

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作者 张秋月 王刚 +4 位作者 陈坤朋 潘道东 曾小群 吴振 郭宇星 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第19期191-197,共7页

为探究嗜酸乳杆菌对人体肠道细胞的免疫调节作用,将pH 5.5和pH 7.5条件下培养的具有不同黏附特性的嗜酸乳杆菌与人结肠癌细胞HT-29共同培养,测定其免疫因子的变化。通过反转录实时荧光定量聚合酶链式反应检测了热休克蛋白70(heat shock ... 为探究嗜酸乳杆菌对人体肠道细胞的免疫调节作用,将pH 5.5和pH 7.5条件下培养的具有不同黏附特性的嗜酸乳杆菌与人结肠癌细胞HT-29共同培养,测定其免疫因子的变化。通过反转录实时荧光定量聚合酶链式反应检测了热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)、白细胞介素(interleukin,IL)-8、IL-10、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR-4)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因的相对表达量,采用酶联免疫吸附测定了免疫因子IL-8、IL-10和TNF-α蛋白的表达情况。结果表明,HT-29细胞与两种pH值条件下的嗜酸乳杆菌共同培养后,在转录水平上,较空白对照组均呈现出Hsp70和TNF-α基因表达的极显著上调,IL-8、NF-κB和TLR-4基因表达的极显著下调(P<0.01)。pH 7.5组与pH 5.5组对比,Hsp70、IL-10和TNF-α的基因表达显著上调,NF-κB和TLR-4的基因表达显著下调(P<0.05);在两种pH值条件下,HT-29细胞的TNF-α质量浓度极显著高于空白对照组,而IL-8的质量浓度极显著降低,并且pH 7.5组的IL-10质量浓度极显著高于pH 5.5组(P<0.01)。综上,弱酸、弱碱性肠道条件下的嗜酸乳杆菌能促进肠道细胞免疫,且pH 7.5的弱碱性肠道环境与pH 5.5的弱酸性肠道环境相比,更能显著增强嗜酸乳杆菌对肠道的免疫效应,维护肠道健康。 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌 HT-29细胞 免疫因子 反转录实时荧光定量聚合酶链式反应 酶联免疫吸附测定

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利用外源RNA作为内参结合qPCR准确检测SF2蛋白RIP富集RNA的效率

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作者 李雨 赵磊 +3 位作者 陈利 周宇荀 李凯 肖君华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期78-82,共5页

利用实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测0.1%甲醛交联RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)富集SF2蛋白相互作用的RNA效率,为研究可变剪接因子SF2相互作用RNA的富集效率提供准确... 利用实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测0.1%甲醛交联RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)富集SF2蛋白相互作用的RNA效率,为研究可变剪接因子SF2相互作用RNA的富集效率提供准确的质检方案。采用RIP技术获取He La细胞中SF2蛋白相互作用的RNA,等比例加入外源酿酒酵母(BY4741)RNA,并以其β-actin作为内参基因,利用q PCR检测RIP富集SF2蛋白相互作用RNA的效率。结果显示,0.1%甲醛交联RIP技术特异性捕获得到SF2蛋白-RNA复合物;q PCR技术检测阳性基因PABP、Srsf1在SF2抗体捕获的产物和Ig G抗体的产物中相应RNA的浓度差异均在60倍以上。利用q PCR技术,以外源酿酒酵母(BY4741)RNA作为内参,能快速、准确定量检测RNA的富集效率。 展开更多

关键词 甲醛交联免疫共沉淀 内参基因 RNA富集 反转录实时荧光定量pcr

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不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测

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作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-17,共7页

为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感... 为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。 展开更多

关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 排毒规律 反转录pcr(RT-pcr) 实时荧光定量pcr(RT-qpcr) 间接免疫荧光试验(IFA)

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高粱红条病病原的分子鉴定 被引量：5

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作者 蒋军喜 周雪平 石银鹿 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期255-259,共5页

从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物 ,命名为 GL- SX。根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白 (CP)基因 C-端和复制酶 (NIb)基因 C-端的保守序列设计引物 ,对 GL - SX进行免疫捕获反转录 PCR (IC- RT- PCR)扩增 ,获得一... 从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物 ,命名为 GL- SX。根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白 (CP)基因 C-端和复制酶 (NIb)基因 C-端的保守序列设计引物 ,对 GL - SX进行免疫捕获反转录 PCR (IC- RT- PCR)扩增 ,获得一条长约 1.1kb的扩增片段 ,扩增片段克隆后测定序列 ,该序列含 10 87个核苷酸 (nt) ,编码 36 2氨基酸 (aa) ,取其中的近全长 CP氨基酸序列 (2 96 aa)与甘蔗花叶病毒 (Sugarcane mosaic virus,SCMV)、玉米矮花叶病毒 (Maize dwarf mosaic virus,MDMV)、高粱花叶病毒 (Sorghum mosaic virus,Sr MV)和约翰逊草花叶病毒 (Johnsongrass mosaicvirus,JGMV)等 4种病毒的对应序列进行同源性比较 ,结果与 SCMV的同源性最高 (95 .3% ) ,而与Sr MV、MDMV和 JGMV等 3种病毒的同源性相对较低 ,依次为 6 9.3%、6 9.1%和 5 5 .4 %。根据Potyvirus属病毒种类划分的标准 ,将 GL - SX鉴定为 SCMV。将 GL- SX的近全长 CP氨基酸序列与SCMV种内各分离物的对应序列进行同源性比较及构建关系树 ,结果显示 GL- SX与 SCMV- MDB具有较远缘的种内亲缘关系 ,而与德国的一个 SCMV玉米分离物 (SCVM- Hoe)及中国的两个玉米分离物(SCMV- ZJ和 SCMV- BJ) 展开更多

关键词 高梁红条病 病原 分子鉴定 免疫捕获反转录pcr 甘蔗花叶病毒

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米蛾β-actin基因cDNA片段的克隆及表达量检测

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作者 丛斌 张明珠 +4 位作者 胡志凤 段立佳 王晓静 张统书 董辉 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期24-28,共5页

为克隆米蛾[Corcyra cephalonica(Stainton)]β-actin基因cDNA片段,建立米蛾β-actin基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,并评估其在实时荧光定量研究中作为内参基因的可靠性,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得米蛾β-actin基因cDNA片段... 为克隆米蛾[Corcyra cephalonica(Stainton)]β-actin基因cDNA片段,建立米蛾β-actin基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,并评估其在实时荧光定量研究中作为内参基因的可靠性,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得米蛾β-actin基因cDNA片段,采用SYBR GreenⅠ染料法建立qRT-PCR方法,检测在米蛾卵、幼虫、蛹和成虫4个虫态中β-actin基因的表达量。获得了长为822bp的米蛾β-actin基因片段(Gen Bank accession:KJ599569),编码273个氨基酸残基;荧光定量标准曲线的Ct值检测范围为13~28,扩增效率为90.1%,相关系数R^2=0.992,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为(84±0.5)℃,符合定量要求;实时荧光定量结果表明,β-actin基因在米蛾不同发育历期中的表达水平无显著性差异(p>0.05)。成功建立了米蛾β-actin基因qRT-PCR方法 ,β-actin基因可以作为米蛾基因表达定量研究中的可靠内参基因。研究结果为β-actin作内参基因进行米蛾功能基因表达差异研究奠定了分子基础。 展开更多

关键词 米蛾 Β-ACTIN基因 反转录pcr 实时荧光定量pcr

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‘砀山酥梨’褐皮芽变中两个ERF基因的克隆与表达分析 被引量：2

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作者 王孟东 杨金宇 +2 位作者 黄海娜 朱立武 衡伟 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期379-385,共7页

为了解梨(Pyrus bretschneideri)中ERF基因的功能,采用3′RACE和PCR技术从‘砀山酥梨’中克隆了两个ERF基因,并对其表达进行了分析。克隆的两个ERF基因都具有典型的AP2/ERF结构域,属于ERF基因家族,分别命名为Pb ERF2和Pb ERF4,Gen Bank... 为了解梨(Pyrus bretschneideri)中ERF基因的功能,采用3′RACE和PCR技术从‘砀山酥梨’中克隆了两个ERF基因,并对其表达进行了分析。克隆的两个ERF基因都具有典型的AP2/ERF结构域,属于ERF基因家族,分别命名为Pb ERF2和Pb ERF4,Gen Bank登录号分别为KJ623716和KJ623718。系统进化分析表明,Pb ERF2与枇杷ERF1,Pb ERF4与黄瓜ERF1的亲缘关系较近。表达分析表明,Pb ERF2和Pb ERF4在叶片中几乎不表达,果皮中的表达量高于果肉;‘锈酥’果皮3个发育时期的Pb ERF2和Pb ERF4表达量均显著高于‘砀山酥梨’,且均呈现先上升后下降的趋势。这为深入研究梨ERF基因家族的作用机理提供了理论依据。 展开更多

关键词 梨 ERF基因 实时荧光定量反转录pcr

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Ghrelin在马鹿器官组织中的表达

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作者 张召议 王彩云 杨银凤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期29-31,34,共4页

为研究Ghrelin在马鹿体内可能表达的器官,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测马鹿的舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝、胰... 为研究Ghrelin在马鹿体内可能表达的器官,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测马鹿的舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝、胰、颌下腺、腮腺、气管、肺、肾、输尿管、膀胱、卵巢、输卵管、子宫、阴道、大脑、下丘脑、垂体、松果体、甲状腺、肾上腺、心肌、心内膜、脾、淋巴结和骨骼肌中Ghrelin表达情况。结果显示,Ghrelin在皱胃内的表达量明显高于其他器官(P<0.05);胰、子宫、卵巢、十二指肠和食管次之,与其余30种器官的表达量相比差异也显著(P<0.05);其余器官内的表达量相对较少。结论:Ghrelin在所检测的36种器官内均有表达。 展开更多

关键词 GHRELIN 马鹿 反转录-聚合酶链式反应 实时荧光定量pcr

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