免疫捕捉real-time PCR对蚜虫中CMV检测体系的建立与应用

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作者 宋丽云 杨金广 +6 位作者 李锡宏 宋玉川 张长华 战徊旭 申莉莉 钱玉梅 王凤龙 《中国烟草科学》 CSCD 2013年第3期105-109,共5页

由黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)引起的病毒病是烟草上最主要的病害之一,高虫口密度的带毒蚜虫的迁入是烟草上CMV病害发生的主要致病因子。本研究结合当前CMV的两个检测体系——ELISA和real-time RT-PCR,通过CMV抗血清与带... 由黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)引起的病毒病是烟草上最主要的病害之一,高虫口密度的带毒蚜虫的迁入是烟草上CMV病害发生的主要致病因子。本研究结合当前CMV的两个检测体系——ELISA和real-time RT-PCR,通过CMV抗血清与带毒蚜虫研磨液中的病毒粒体结合反应,病毒复合体粘附在PCR管壁上,然后直接进行反转录反应,随后进行real-time PCR检测,建立了免疫捕捉real-time RT-PCR(Immunocapture real-time RT-PCR)检测单头蚜虫体内CMV的实时定量检测技术,与普通real-time RT-PCR和ELISA相比,灵敏性和特异性显著提高。该方法无需RNA提取等步骤,可以有效地减少样品操作过程的污染和蛋白、多糖以及酚类物质等杂质的影响,能够对微量CMV病毒粒体进行准确、快速、特异和灵敏的定量检测,对烟草病毒病的预测预报、无毒种苗的生产和病害防治都具有重要的科学意义。 展开更多

关键词 免疫捕捉real-time PCR 黄瓜花叶病毒(CMV) 蚜虫

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免疫捕捉-通用引物PCR检测食品中沙门氏菌 被引量：5

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作者 张体银 黄晓蓉 +5 位作者 郑晶 邵碧英 黄嫦娇 陈彬 林杰 汤敏英 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第12期233-236,共4页

利用免疫吸附富集结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IC-UPPCR)检测食品中沙门氏菌。采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,该IC-UPPCR检测沙门氏菌的灵敏度最低,能检测到2×102CFU/ml,检测... 利用免疫吸附富集结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IC-UPPCR)检测食品中沙门氏菌。采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,该IC-UPPCR检测沙门氏菌的灵敏度最低,能检测到2×102CFU/ml,检测沙门氏菌属和非沙门氏菌属标准株的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。结果表明该方法具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,并可满足大批样品沙门氏菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等领域。 展开更多

关键词 免疫捕捉 通用引物 PCR 沙门氏菌 食品

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检测HBVDNA/Ig-双特异性循环免疫复合物的免疫捕捉法PCR 被引量：7

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作者 周裕林 彭宣宪 +3 位作者 柳珑 肖军生 岑岭 杨天赐 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期71-72,75,共3页

目的:建立一种免疫捕捉法PCR技术,研究血清免疫复合物中不同Ig类型抗体结合HBV的情况,并初步探讨其意义。方法:以羊抗人μ、γ、α链的IgG为捕捉抗体,再利用PCR扩增捕捉物中的HBVDNA。结果:成功地建立了检测HBVDNA/IgM、IgG和IgATCIC的... 目的:建立一种免疫捕捉法PCR技术,研究血清免疫复合物中不同Ig类型抗体结合HBV的情况,并初步探讨其意义。方法:以羊抗人μ、γ、α链的IgG为捕捉抗体,再利用PCR扩增捕捉物中的HBVDNA。结果:成功地建立了检测HBVDNA/IgM、IgG和IgATCIC的免疫捕捉法PCR技术。该技术特异性强、敏感性高、重复性好,可以显著提高HBVDNA的检出率。同时发现,结合HBV的抗体的Ig类型组合有明显差异,三者均阳性最高。结论:说明乙肝患者血清免疫复合物中有较多的病毒颗粒。研究HBVDNA/IgTCIC对乙肝发病机理的深入阐明可能具有重要意义。 展开更多

关键词 免疫捕捉法PCR HBVDNA 乙型肝炎 TCIC

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免疫捕捉PCR和经典PCR方法检测水稻细菌性谷枯病菌灵敏性比较 被引量：3

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作者 罗金燕 陈磊 +2 位作者 秦萌 赵玉强 余慧 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期371-377,共7页

将免疫吸附富集(ISE)和经典PCR结合以提高水稻细菌性谷枯病的检测效率,并且利用多克隆抗体技术成功地获得了4种抗血清,即抗Burkholderia glumae全菌体血清ASBg14,ASBg32,ASBg26和ASBg04,ODD法测定该4种抗血清的效价均达到1∶32以上,利... 将免疫吸附富集(ISE)和经典PCR结合以提高水稻细菌性谷枯病的检测效率,并且利用多克隆抗体技术成功地获得了4种抗血清,即抗Burkholderia glumae全菌体血清ASBg14,ASBg32,ASBg26和ASBg04,ODD法测定该4种抗血清的效价均达到1∶32以上,利用凝聚法测定的所有抗血清的效价也均达到了1∶5 120以上,通过两种方法结合测定效价均显示为合格抗体。通过对4种抗血清的专化性进行研究,结果显示ASBg14和ASBg32专化性较高,抗血清ASBg26和ASBg04专化性不是很理想。用直接PCR技术和免疫捕捉PCR技术检测谷枯病菌,结果表明,所有谷枯病菌都能产生500 bp左右的特异性片段,非谷枯病菌的8个菌株均无特异性片段产生。两种检测方法的灵敏度比较发现,直接PCR技术能检测到1×105cfu·mL-1左右的悬浮液,免疫捕捉PCR技术能检测到103cfu·mL-1左右悬浮液,免疫捕捉PCR比直接PCR灵敏性提高102倍。检测人工接种的病稻种实验中,直接PCR技术能检测到2粒及以上带菌种子制得浸悬液,而免疫捕捉PCR技术仅1粒带菌种子即可。 展开更多

关键词 免疫捕捉 水稻 细菌性谷枯病

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免疫捕捉PCR和直接PCR技术检测单核细胞增生性李斯特菌比较研究 被引量：3

5

作者 刘雅莉 刘箐 +6 位作者 刘芳 韩舜愈 王婧 夏俊芳 汪小波 樊学军 田绿波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第20期243-248,共6页

将免疫学技术与分子生物学技术相结合,建立了免疫捕捉PCR(IC-PCR),并与传统的直接PCR(Direct-PCR)进行比较。结果显示:纯菌液中IC-PCR检测灵敏度(104CFU/mL)是Direct-PCR灵敏度(105CFU/mL)的10倍;模拟带菌实验结果表明:IC-PCR最低可检测... 将免疫学技术与分子生物学技术相结合,建立了免疫捕捉PCR(IC-PCR),并与传统的直接PCR(Direct-PCR)进行比较。结果显示:纯菌液中IC-PCR检测灵敏度(104CFU/mL)是Direct-PCR灵敏度(105CFU/mL)的10倍;模拟带菌实验结果表明:IC-PCR最低可检测到5×101个细菌/PCR反应体系(即104CFU/mL),检测限比Direct-PCR(5×103个细菌/PCR反应体系即106CFU/mL)高100倍;特异性实验、干扰实验结果表明IC-PCR可特异检测单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monaytogenes,LM),而和18株其他常见食源性致病菌无交叉反应。IC-PCR具有快速、经济、灵敏、特异等优点,是一种适合食品安全监管部门、食品企业的LM快速检测方法。 展开更多

关键词 单核细胞增生性李斯特菌 免疫捕捉PCR 直接PCR

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免疫捕捉PCR法检测西瓜种子带细菌性果斑病菌 被引量：7

6

作者 徐福寿 王笑 +2 位作者 谢关林 苏婷 余山红 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期215-218,共4页

为提高免疫捕捉PCR法检测瓜种携带西瓜细菌性果斑病菌的灵敏度并明确浙江省主要市售西瓜种子的带菌情况,以有效阻止该检疫性病害的扩散和蔓延。利用5种缓冲液配制浸提液并用免疫捕捉PCR法对国内市售的23批瓜种的18个品种进行了实际检测... 为提高免疫捕捉PCR法检测瓜种携带西瓜细菌性果斑病菌的灵敏度并明确浙江省主要市售西瓜种子的带菌情况,以有效阻止该检疫性病害的扩散和蔓延。利用5种缓冲液配制浸提液并用免疫捕捉PCR法对国内市售的23批瓜种的18个品种进行了实际检测。结果表明,3-N-吗啡啉乙磺酸(MOPS)缓冲液最适宜于作少量瓜种的免疫捕捉PCR法检测的浸提液,来自病区的浙蜜4号、早佳84-24和寿山王3个品种的种子检测到西瓜果斑病菌,病菌主要附着在种皮上。有效阻止病区种子流入无病区及防治病种交互感染健种是该病检疫的关键。 展开更多

关键词 西瓜 细菌性果斑病 种子 免疫捕捉PCR 检测

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捕捉胁迫对暗纹东方鲀肝脏非特异性免疫指标的影响 被引量：5

7

作者 狄瑜 徐奕 +1 位作者 李姗敏 闻海波 《浙江海洋学院学报（自然科学版）》 CAS 2015年第4期314-317,322,共5页

测定分析了暗纹东方鲀在持续、定量的捕捉胁迫条件下肝脏中非特异性免疫指标的变化。结果显示:暗纹东方鲀肝脏溶菌酶和AKP活力在处理的第1 d显著高于对照组水平(P<0.05),在第2 d仍维持较高水平,第3 d酶活力显著降低,并最终恢复至对... 测定分析了暗纹东方鲀在持续、定量的捕捉胁迫条件下肝脏中非特异性免疫指标的变化。结果显示:暗纹东方鲀肝脏溶菌酶和AKP活力在处理的第1 d显著高于对照组水平(P<0.05),在第2 d仍维持较高水平,第3 d酶活力显著降低,并最终恢复至对照组水平(P>0.05);肝脏中抗氧化酶SOD活性与溶菌酶、AKP变化趋势相似,而CAT活性在胁迫第1 d和第2 d逐步升高,至第3 d达到高峰并显著高于前两天和对照组(P<0.05),第4 d显著下降并恢复至对照组水平(P>0.05)。研究结果表明:暗纹东方鲀在适度的捕捉胁迫下,肝脏的非特异性免疫功能在初期虽受到了显著影响,但在后期能重新建立动态平衡,这可能是鱼体对特定强度操作胁迫一种主动适应。本结果将为暗纹东方鲀的康养殖管理提供一定的科学依据和指导。 展开更多

关键词 暗纹东方鲀 捕捉胁迫 非特异性免疫

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褪黑素受体在未妊娠和妊娠牦牛子宫表达的研究 被引量：5

8

作者 霍生东 袁其建 +7 位作者 卢建雄 臧荣鑫 杨具田 张涛杰 阿依木古丽 刘俊林 马忠仁 龙瑞军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期239-244,共6页

旨在研究褪黑素对妊娠牦牛子宫的调控作用,采用real-time PCR法和免疫组织化学S-P法,对未妊娠和妊娠不同时期牦牛子宫中褪黑素受体(MT1)mRNA和褪黑素受体(MT1)蛋白的表达进行研究。结果表明:牦牛未妊娠和妊娠的不同时期,牦牛子宫基质细... 旨在研究褪黑素对妊娠牦牛子宫的调控作用,采用real-time PCR法和免疫组织化学S-P法,对未妊娠和妊娠不同时期牦牛子宫中褪黑素受体(MT1)mRNA和褪黑素受体(MT1)蛋白的表达进行研究。结果表明:牦牛未妊娠和妊娠的不同时期,牦牛子宫基质细胞(SC)和肌层平滑肌细胞(MM)中均有MT1蛋白表达(P>0.05);血管内皮细胞(EBV)和血管平滑肌细胞(VSM)中的MT1蛋白表达,在妊娠28~35d差异不显著,随妊娠时间的增加,MT1蛋白表达增加(P<0.05);腺上皮细胞(GE)中的MT1蛋白,在妊娠初期(妊娠28~35d)差异不显著,妊娠50~60d时,差异显著(P<0.05),妊娠90~100d时,差异极显著(P<0.01)。而在腔上皮细胞(SE)中,MT1蛋白表达量在妊娠28~35d比未妊娠时低(P<0.05),而这种趋势随妊娠时间的增加继续降低(P<0.01)。未妊娠牦牛子宫中MT1mRNA表达量显著高于妊娠牦牛(P<0.01)。综上表明,在妊娠期,牦牛子宫对褪黑素的需求量降低,褪黑素主要作用于牦牛GE,调节子宫腺功能,使牦牛子宫产生适应妊娠的生理反应。 展开更多

关键词 牦牛 褪黑素受体 妊娠期 子宫 免疫组织化学 real-time PCR

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TC/IC-RT-PCR检测黄瓜绿斑驳花叶病毒 被引量：6

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作者 沈建国 林双庆 +4 位作者 蔡伟 李海明 王念武 翁瑞泉 黄可辉 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第1期13-17,共5页

根据GenBank上登录的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)外壳蛋白基因保守序列,设计特异性引物,利用试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR)和免疫捕捉RT-PCR(IC-RT-PCR)技术对黄瓜绿斑驳花叶病毒进行检测.结果表明,TC-RT-PCR和IC-RT-PCR均具有良好的特异性... 根据GenBank上登录的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)外壳蛋白基因保守序列,设计特异性引物,利用试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR)和免疫捕捉RT-PCR(IC-RT-PCR)技术对黄瓜绿斑驳花叶病毒进行检测.结果表明,TC-RT-PCR和IC-RT-PCR均具有良好的特异性,检测灵敏度分别比DAS-ELISA高10和100倍;通过对一批进境黄瓜样品的检测,验证了2种检测技术的实际应用效果.因此,本研究建立的TC-RT-PCR和IC-RT-PCR检测技术,可有效应用于CGMMV的快速检测. 展开更多

关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 试管捕捉RT-PCR 免疫捕捉RT-PCR

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香蕉束顶病毒PCR检测技术研究 被引量：21

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作者 肖火根 胡晋生 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期5-8,共4页

建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ），并报道了ＢＢＴＶ免疫捕捉ＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）和直接结合ＰＣＲ（ＤＢ－ＰＣＲ）检测方法ＩＣ－ＰＣＲ和ＤＢ－ＰＣＲ分别能从４μ... 建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ），并报道了ＢＢＴＶ免疫捕捉ＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）和直接结合ＰＣＲ（ＤＢ－ＰＣＲ）检测方法ＩＣ－ＰＣＲ和ＤＢ－ＰＣＲ分别能从４μｇ和０． 展开更多

关键词 香蕉 束顶病毒 免疫捕捉PCR 直接结合PCR

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大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR检测方法的建立 被引量：4

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作者 尹传宝 陈俊 +4 位作者 朱琦 毛君婷 程振涛 周碧君 文明 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期135-138,共4页

为探索减毒胞内侵袭菌介导的粘膜免疫对宿主动物胃肠道微生态的影响,以大肠杆菌与葡萄球菌16S rRNA基因拷贝数为研究对象,采用实时定量技术(Real-time PCR)对2种细菌进行定量检测,建立大肠杆菌与葡萄球菌数量快速检测方法。结果表明:扩... 为探索减毒胞内侵袭菌介导的粘膜免疫对宿主动物胃肠道微生态的影响,以大肠杆菌与葡萄球菌16S rRNA基因拷贝数为研究对象,采用实时定量技术(Real-time PCR)对2种细菌进行定量检测,建立大肠杆菌与葡萄球菌数量快速检测方法。结果表明:扩增出的2种细菌核苷酸序列与GenBank上已知目的菌种同源性为100%,构建的2条标准曲线相关系数均接近1,误差较小,熔解曲线显示均成单一峰值。成功构建了大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR标准曲线,可为进一步研究减毒沙门氏菌介导的粘膜免疫奠定基础。 展开更多

关键词 粘膜免疫 大肠杆菌 葡萄球菌 real-time PCR 标准曲线

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p53、bax和bcl-2基因在SO_2染毒大鼠肝中的表达 被引量：3

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作者 白巨利 孟紫强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期343-348,共6页

为了进一步探讨SO2的毒理学作用机制,运用荧光实时定量RT-PCR和免疫组化技术研究SO2吸入对大鼠肝细胞中p53、bax和bcl-2三种细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达的影响.结果显示,肝中p53和baxmRNA水平呈剂量依赖性增加,在SO2浓度为28·0... 为了进一步探讨SO2的毒理学作用机制,运用荧光实时定量RT-PCR和免疫组化技术研究SO2吸入对大鼠肝细胞中p53、bax和bcl-2三种细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达的影响.结果显示,肝中p53和baxmRNA水平呈剂量依赖性增加,在SO2浓度为28·00和56·00mg/m3时显著增加(p53mRNA在28mg/m3为1·30倍,在56mg/m3为3·43倍;baxmRNA在28mg/m3为1·63倍,在56mg/m3为2·17倍);而bcl-2mRNA水平显著降低(在28mg/m3为0·63倍,在56mg/m3为0·45倍).免疫组化实验结果表明,吸入SO2后,大鼠肝中p53和bax蛋白表达水平呈剂量依赖性增加,而bcl-2蛋白表达水平呈剂量依赖性降低.结果表明,SO2可以改变凋亡相关基因的表达,诱导大鼠肝组织细胞凋亡,这可能与一些凋亡相关疾病的发生有关. 展开更多

关键词 二氧化硫 肝 real-time RT-PCR 免疫组化 P53 BAX bcl-2

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HPLC-MS/MS法与MEIA法在监测器官移植患者他克莫司全血浓度中的比较 被引量：4

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作者 李鹏飞 刘丽宏 +2 位作者 马萍 丁春雷 童卫杭 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第1期80-83,共4页

目的:比较HPLC-MS/MS法与MEIA法在监测器官移植患者他克莫司全血浓度中的应用。方法:建立和确证可行的HPLC-MS/MS法,并与ME-IA法分别测定他克莫司相同样本的浓度,对测试结果进行统计分析,评价两种方法。结果:HPLC-MS/MS法测定他克莫司... 目的:比较HPLC-MS/MS法与MEIA法在监测器官移植患者他克莫司全血浓度中的应用。方法:建立和确证可行的HPLC-MS/MS法,并与ME-IA法分别测定他克莫司相同样本的浓度,对测试结果进行统计分析,评价两种方法。结果:HPLC-MS/MS法测定他克莫司平均浓度为(4.86±0.46)ng/mL,MEIA法测定浓度平均为(5.52±0.43)ng/mL,两种方法测定结果相关系数r平均为0.8771,两种方法相关性较强。LC-MS/MS法测定浓度值/MEIA法测定浓度值平均值为(90.3±5.3)%。结论:HPLC-MS/MS法测定浓度为他物在体内的准确浓度,更适用于日常治疗药物监测(TDM)工作。 展开更多

关键词 高效液相色谱-质谱联用法 微粒子捕捉酶免疫发光技术 器官移植 他克莫司

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人食管鳞癌组织中RIZ1基因表达水平的研究 被引量：1

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作者 钟荣荣 张鹏 +4 位作者 梁冬春 董尚文 王元国 崔元涛 王硕 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期1346-1348,1357,共4页

目的:研究RIZ1基因mRNA及蛋白在人食管鳞癌中的表达。方法:以48例人食管鳞癌组织、相应癌旁及正常组织为研究对象,Real-time PCR法检测RIZ1基因mRNA表达情况;55例癌组织及相应正常组织采用免疫组织化学法检测RIZ1蛋白的表达情况。结果:... 目的:研究RIZ1基因mRNA及蛋白在人食管鳞癌中的表达。方法:以48例人食管鳞癌组织、相应癌旁及正常组织为研究对象,Real-time PCR法检测RIZ1基因mRNA表达情况;55例癌组织及相应正常组织采用免疫组织化学法检测RIZ1蛋白的表达情况。结果:统计结果显示人食管鳞癌组织中RIZ1 mRNA的表达量显著低于正常食管组织(P<0.01),癌旁组织中的表达量也显著低于正常食管组织(P<0.01),但癌组织与癌旁组织的表达量无显著性差异(P=0.067)。RIZ1蛋白在癌组织中阳性表达率为29.1%(16/55),在正常食管组织中阳性表达率为76.4%(42/55),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:人食管鳞癌组织中RIZ1基因不仅在mRNA转录水平,而且在蛋白表达水平明显减低。提示RIZ1表达降低可能与食管鳞癌的发生有关,RIZ1在食管鳞癌的发生过程中起到抑制作用。RIZI可能是食管鳞癌的潜在抑制基因。 展开更多

关键词 RIZ1基因 抑癌基因 食管鳞癌 real-time PCR 免疫组织化学法

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犬乳腺肿瘤中MUC1的表达及临床意义

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作者 刁洪秀 李艺 +1 位作者 林德贵 张迪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1511-1516,共6页

为了检测MUC1在乳腺肿瘤的侵袭、转移及病理分级中的作用,本研究通过real-time PCR检测了47例犬乳腺肿瘤组织(20例良性,27例恶性)和3例健康犬乳腺组织中MUC1基因的转录情况,通过IHC检测MUC1在犬乳腺组织中的表达情况,并分析二者与肿瘤... 为了检测MUC1在乳腺肿瘤的侵袭、转移及病理分级中的作用,本研究通过real-time PCR检测了47例犬乳腺肿瘤组织(20例良性,27例恶性)和3例健康犬乳腺组织中MUC1基因的转录情况,通过IHC检测MUC1在犬乳腺组织中的表达情况,并分析二者与肿瘤恶性程度分级的关系。结果发现:MUC1基因和MUC1在犬乳腺肿瘤组织中高表达,且在不同的恶性分级中差异显著(P<0.05)。研究显示MUC1基因和MUC1可作为犬乳腺肿瘤诊断和恶性程度评估的重要指标之一。 展开更多

关键词 MUC1 犬乳腺肿瘤 real-time PCR 免疫组织化学

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EMMPRIN在小鼠磨牙牙胚形态发生过程中的表达

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作者 谢明 焦婷 +3 位作者 陈玉琴 胥春 李静 张富强 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1183-1188,共6页

目的研究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子EMMPRIN(basigin/CD147)在小鼠磨牙牙胚发育各阶段的表达,探讨其可能的生物学作用。方法选择不同胎龄(E11、E13、E14、E15、E16、E18)和出生后1 d(P1)小鼠作为实验对象。Real-Time PCR定量检测小... 目的研究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子EMMPRIN(basigin/CD147)在小鼠磨牙牙胚发育各阶段的表达,探讨其可能的生物学作用。方法选择不同胎龄(E11、E13、E14、E15、E16、E18)和出生后1 d(P1)小鼠作为实验对象。Real-Time PCR定量检测小鼠牙胚发育各阶段下颌(E11和E13)及牙胚(E14、E15、E16、E18和P1)组织中EMMPRIN mRNA表达。原位杂交和免疫荧光染色观察EMMPRINmRNA和蛋白在牙胚组织及相应发育阶段的颌面部发育器官中的定位表达。结果 Real-Time PCR结果显示,E13胎鼠下颌标本中EMMPRIN mRNA的表达约为E11胎鼠1.6倍(P<0.01);P1小鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA表达约为E14胎鼠的2倍(P<0.01);EMMPRIN mRNA表达随牙胚组织发育呈现递增趋势。原位杂交和免疫荧光染色观察显示,在E14胎鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA和蛋白表达定位一致,但E15、E16、E18胎鼠EMMPRIN mRNA与蛋白表达定位有所不同;相应发育时段胎鼠下颌骨的Meckel软骨(E14)、视网膜(E15)、大脑血脑屏障(E15)及颚骨骨化中心(E16)中EMMPRIN蛋白表达均呈现强荧光信号。结论 EMMPRIN的表达贯穿于早期牙胚发生和发育的多个阶段,但牙胚发育帽状期和钟状期阶段EMMPRIN mRNA与蛋白表达并不完全一致。EMMPRIN有可能以外分泌或旁分泌方式,通过调控上皮间质的相互作用参与牙胚发育及形态发生。 展开更多

关键词 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 形态发生 牙胚 real-time PCR 原位杂交 免疫荧光染色

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P-糖蛋白在健康猪肝脏、肾脏和肠组织中的分布及其mRNA相对转录水平 被引量：3

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作者 董玲玲 郭荔 +2 位作者 戴小华 孙勇 王丽平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1454-1461,共8页

本研究旨在探讨P-糖蛋白(P-gp)在健康仔猪肝脏、肾脏和肠组织中的分布及mRNA相对转录水平的差异。选用5头60日龄健康三元杂交仔猪,采用免疫组织化学方法对猪肠道、肝脏和肾脏中的P-gp定位;gapdh为看家基因,采用Real-time RT-PCR方法检测... 本研究旨在探讨P-糖蛋白(P-gp)在健康仔猪肝脏、肾脏和肠组织中的分布及mRNA相对转录水平的差异。选用5头60日龄健康三元杂交仔猪,采用免疫组织化学方法对猪肠道、肝脏和肾脏中的P-gp定位;gapdh为看家基因,采用Real-time RT-PCR方法检测mdr1基因在健康猪仔十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝脏和肾脏中的mRNA转录水平。结果表明:P-gp在肝脏主要分布于肝细胞间的胆小管膜;在肾脏主要分布于近端小管和远端小管细胞膜上;在小肠主要位于肠绒毛上皮细胞顶端及小肠腺腔面上皮细胞顶端;在大肠中主要分布于黏膜上皮细胞顶端和大肠腺上皮细胞顶端。mdr1在检测组织中均有转录,其转录量由高到低依次为回肠、结肠、肝脏、空肠、十二指肠、直肠、盲肠和肾脏。其中回肠转录量最高,且与十二指肠、直肠相比差异显著(P=0.017、P=0.014),与盲肠和肾脏相比差异极显著(P=0.005、P=0.001);mdr1在空肠、结肠和肝脏中的相对转录量与肾脏相比差异显著(P=0.046、P=0.018、P=0.030)。结果提示P-gp在健康仔猪肝脏、肾脏和小肠组织中的分布和表达可能对一些口服药物的体内过程产生影响,因此猪临床用药时应充分考虑P-gp介导的药物间相互作用及对口服药物生物利用度的影响。 展开更多

关键词 仔猪 P-GP mdr1 免疫组化 real-time RT-PCR

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产毒性大肠杆菌菌毛抗原F_(41)单克隆抗体的制备及其特异性研究

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作者 李元 吕苹 +1 位作者 吴玉水 汪美先 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第3期22-26,共5页

本文报道以纯化的产毒性大肠杆菌菌毛F_(41)抗原,利用杂交瘤技术获得5株抗F_(41)抗原的单克隆抗体(1F6,2C5,3B6为IgG 1。1 H 5,4E11为IgM)。腹水抗体效价达10^(-6)培养上清抗体效价10^(-3)。通过免疫扩散、免疲印迹法及固相菌体ELISA试... 本文报道以纯化的产毒性大肠杆菌菌毛F_(41)抗原,利用杂交瘤技术获得5株抗F_(41)抗原的单克隆抗体(1F6,2C5,3B6为IgG 1。1 H 5,4E11为IgM)。腹水抗体效价达10^(-6)培养上清抗体效价10^(-3)。通过免疫扩散、免疲印迹法及固相菌体ELISA试验证实,5株单克隆抗体均为针对ETEC菌毛F_(41)抗原的特异性抗体;红血球凝集抑制及肠上皮细胞粘附阻断试验证明1F6、2C5、3B6具有生物学活性,1H5与4E11无生物学活性,这可能(1)建立ELISA捕捉法,从粪便中直接检测F_(41)抗原以及用玻板凝集试验鉴定临床分离菌株。(2)用于F_(41)抗原性的分析及ETEC基因工程疫苗的监控手段。(3)为ETEC·F_(41)菌的致病性研究及被动免疫预防急性腹泻提供依据。 展开更多

关键词 产毒性大肠杆菌 单克隆抗体 特异性研究 菌毛抗原 ELISA捕捉法 肠上皮细胞粘附 制备 ETEC 临床分离菌株 基因工程疫苗 抗体效价 杂交瘤技术 免疫印迹法 特异性抗体 红血球凝集 生物学活性 致病性研究 IgG1 培养上清 免疫扩散

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HIF-1α和miR-210在宫颈鳞癌中的表达及其相关性 被引量：6

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作者 楼梦 贾英 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期604-607,共4页

目的:探讨宫颈癌组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor-1α)和Micro RNA 210(mi R-210)之间的关系,为宫颈癌的早期发现寻找参考指标。方法:采用免疫组化En Vision法和real-time PCR分别检测52例宫颈鳞癌及20例正常宫颈上皮组... 目的:探讨宫颈癌组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor-1α)和Micro RNA 210(mi R-210)之间的关系,为宫颈癌的早期发现寻找参考指标。方法:采用免疫组化En Vision法和real-time PCR分别检测52例宫颈鳞癌及20例正常宫颈上皮组织中HIF-1α和mi R-210的表达情况,用Spearman秩相关检验分析癌组织中HIF-1α和mi R-210之间的相关性。结果:宫颈鳞癌组织细胞大部分胞核表达HIF-1α,少部分胞核和胞浆同时表达,HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达率为73.1%(38/52),正常宫颈组织细胞中无表达。mi R-210在宫颈癌组织中的表达水平较正常宫颈组织显著上调,正常宫颈组织mi R-210的表达水平为1.16±0.76,宫颈鳞癌组织中其表达水平为5.04±1.28(P=0.000);在52例宫颈癌组织中,HIF-1α蛋白表达水平与mi R-210表达呈正相关(r=0.43,P=0.001)。HIF-1α蛋白在正常宫颈组织中均无阳性表达,与mi R-210无相关性。在所有72例样本中进行相关性分析,发现两者的表达呈正相关(r=0.67,P=0.000)。说明随着HIF-1α蛋白表达的增加,mi R-210则随着增加。结论:HIF-1α和mi R-210在宫颈鳞癌组织中均呈高表达,且两者有一定的相关性。推测HIF-1α和mi R-210与宫颈癌的发生发展相关,有助于进一步揭示宫颈癌的发病机制。 展开更多

关键词 宫颈癌 缺氧诱导因子-1Α microRNA210 免疫组化 real-time PCR

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胰腺癌缺失基因DPC4在牙龈癌中的表达 被引量：4

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作者 张强 刘继刚 +2 位作者 杨国海 刘江 刘昊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第4期598-600,共3页

应用免疫组织化学技术和Real-timePCR法检测33例牙龈癌(高分化15例,中分化10例,低分化8例)和8例正常牙龈组织中DPC4蛋白和mRNA的表达情况。结果显示,牙龈癌组织DPC4阳性细胞百分比显著低于正常牙龈组织,高分化、中分化、低分化牙龈癌和... 应用免疫组织化学技术和Real-timePCR法检测33例牙龈癌(高分化15例,中分化10例,低分化8例)和8例正常牙龈组织中DPC4蛋白和mRNA的表达情况。结果显示,牙龈癌组织DPC4阳性细胞百分比显著低于正常牙龈组织,高分化、中分化、低分化牙龈癌和牙龈组织的DPC4蛋白相对表达、mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。提示牙龈癌DPC4表达降低,可能与牙龈癌的发生与发展有关。 展开更多

关键词 胰腺癌缺失基因4 牙龈癌 免疫组织化学 real-time PCR

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