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抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立 被引量:7
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作者 李妍 宁云山 +3 位作者 李莉 彭丹丹 董文其 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期435-438,共4页
目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-... 目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测.结果筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG1,亲和常数(κ)介于1×10-8~2.82×10-10.以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%.结论建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒. 展开更多
关键词 疟原虫 恶性 谷氨酸脱氢酶 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法
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快速检测牛奶中泰乐菌素残留的荧光微球免疫层析方法的建立 被引量:1
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作者 王旗 管笛 +3 位作者 武会娟 裴星瑶 彭涛 江海洋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第10期71-73,I0002,共4页
本研究旨在研制一种快速检测牛奶中泰乐菌素残留的荧光微球免疫层析试纸条。将包被抗原(0.80 mg/mL)和羊抗鼠IgG(1.01 mg/mL)喷涂在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质检线。对制备荧光微球抗体免疫复合物(免疫探针)的工艺参数做了一系... 本研究旨在研制一种快速检测牛奶中泰乐菌素残留的荧光微球免疫层析试纸条。将包被抗原(0.80 mg/mL)和羊抗鼠IgG(1.01 mg/mL)喷涂在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质检线。对制备荧光微球抗体免疫复合物(免疫探针)的工艺参数做了一系列的优化,同时比较了不同标记方法对标记效率及稳定性的影响。结果表明,在pH值为6.0的最佳缓冲体系条件下,催化剂碳化二亚胺(EDC)用量为5μg,抗体100倍稀释添加20μL,检测时间低于25 min,检测限为25μg/L。本试验研制的荧光微球免疫层析试纸条具有简便快速、特异性良好、样本无需前处理等特点,可用于基层奶站和现场快速筛选。 展开更多
关键词 荧光微球 泰乐菌素 免疫层析方法 试纸条
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荧光微球免疫层析方法定量检测水产品中4种硝基呋喃代谢物 被引量:12
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作者 吴烁 张彪 +3 位作者 张万利 邵静梅 刘飘雪 生威 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第20期299-304,共6页
采用荧光微球标记抗体作为信号探针,建立荧光微球免疫层析检测方法(fluorescent microsphere immunochromatographic assays,FMICA),并应用于水产品中4种硝基呋喃类兽药代谢物残留量的快速定量检测。结果表明:呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃... 采用荧光微球标记抗体作为信号探针,建立荧光微球免疫层析检测方法(fluorescent microsphere immunochromatographic assays,FMICA),并应用于水产品中4种硝基呋喃类兽药代谢物残留量的快速定量检测。结果表明:呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃西林代谢物FMICA试纸条的检出限分别为0.004(以1-氨基-乙内酰脲衍生物计算)、0.01(以5-吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算)、0.008(以3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算)、0.009(以氨基脲衍生物计算)μg/L;检测线性范围分别为0.005~5、0.01~10、0.01~10、0.01~10μg/L;最佳检测时间为10 min,方法特异性良好。水产样品经衍生化处理后,经检测硝基呋喃代谢物的加标回收率在75.88%~104.81%之间,变异系数均小于15%。FMICA方法操作简单、快速、成本低,适用于水产品中硝基呋喃类兽药代谢物快速定量检测。 展开更多
关键词 硝基呋喃 荧光微球 定量检测 免疫层析方法 水产品
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基于Me-MLiverpool重组蛋白的新孢子虫胶体金免疫层析检测方法的建立
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作者 任宏琪 乔军 +5 位作者 孟庆玲 张国武 张艳玲 贡莎莎 王熙凤 才学鹏 《动物医学进展》 北大核心 2020年第11期1-6,共6页
根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因。将该基因克隆至pET-30a(+)质粒中构建重组蛋白质粒p... 根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因。将该基因克隆至pET-30a(+)质粒中构建重组蛋白质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool原核表达载体,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化及SDS-PAGE和Western blot验证。以0.75 mg/mL的SPA做金标抗原,用纯化后浓度为1 mg/mL的重组蛋白和牛IgG分别做检测线和质控线,建立了检测新孢子虫抗体的胶体金免疫层析检测方法(CGIA)。重组质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool双酶切验证结果显示,在636 bp的位置有条带,说明重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小为39.32 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可与新孢子虫阳性血清特异性识别,表明重组蛋白有较强的反应原性;特异性试验结果显示,新孢子虫CGIA与弓形虫、肝片吸虫、包虫阳性血清不发生交叉反应;敏感性分析显示,GICA可检测出的Nc阳性血清最大稀释倍数为1∶512;对92份牛血清样品进行检测,与商品化的新孢子虫ELISA检测试剂盒检测结果一致,表明建立的GICA准确性较高。综上所述,研究建立的基于新孢子虫Nc-livepoor基因胶体金免疫层析检测试纸条具有较高的灵敏性和特异性,可为新孢子虫病的诊断提供技术支撑。 展开更多
关键词 新孢子虫 Nc-livepoor 原核表达 胶体金免疫层析检测方法
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应用抗SjP38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系 被引量:7
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作者 吴锦雅 杨培良 +2 位作者 周晓红 李华 陈晓光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期538-541,共4页
目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法。方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数。按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高... 目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法。方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数。按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合。胶体金标记4株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、4、5、6周的鼠血样进行检测。结果8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L^2.82×10-10mol/L。根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为最佳配对组合。标记1A6、6G12、9H6与9G7这4株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:4时,检测效果最佳。对rSjP38的最低检测量为12.5ng/ml。抗检测感染3、4、5、6周小鼠血清,阳性率分别为40%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性。结论通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 P38 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法
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牛病毒性腹泻病毒1型E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法的建立
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作者 刘鑫欢 张纹纹 +8 位作者 程子龙 金前跃 郭志睿 郭大伟 龙云凤 杨蕾蕾 刘茂军 白娟 李文良 《南京农业大学学报》 2025年第5期1100-1107,共8页
[目的]本研究旨在使用金-银纳米颗粒标记纯化的牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)重组E2蛋白,建立基于金-银纳米颗粒的E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法。[方法]对金-银纳米颗粒标记条件进行优化,选取2 mg·mL^(-1)的金黄色葡萄球菌A蛋白(... [目的]本研究旨在使用金-银纳米颗粒标记纯化的牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)重组E2蛋白,建立基于金-银纳米颗粒的E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法。[方法]对金-银纳米颗粒标记条件进行优化,选取2 mg·mL^(-1)的金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A,SPA)和BVDV-1单克隆抗体1E2B3包被于硝酸纤维素(NC)膜上,分别作为检测线(test line,T线)和质控线(control line,C线),对反应条件进行优化后建立侧流免疫层析检测方法。[结果]金-银纳米颗粒最佳标记条件:以pH7.4的硼酸-硼砂缓冲液作为金-银纳米颗粒的溶剂;最佳标记蛋白浓度为10μg·mL^(-1)。优化后的侧流免疫层析检测方法的反应条件:2 mg·mL^(-1)的SPA作为T线,0.6 mg·mL^(-1)的1E2B3作为C线,待检血清稀释度为1∶50。特异性试验结果表明建立的金-银纳米颗粒免疫层析试纸条不与猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛支原体和布鲁氏菌阳性血清发生交叉反应。敏感性试验结果显示,将BVDV阳性血清(中和抗体效价为1∶2048)稀释512倍时金-银纳米颗粒免疫层析试纸条仍可检出。使用金-银纳米颗粒免疫层析试纸条检测125份牛血清,并与中和试验结果比较,两者阴性血清符合率为100%,阳性血清符合率为96.04%,总体符合率为96.80%。[结论]本试验基于金-银纳米颗粒建立的免疫层析抗体检测方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便快捷的特点,为快速检测BVDV-1抗体提供了有力的技术支撑。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 抗体 金-银纳米颗粒 侧流免疫层析方法
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犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究 被引量:39
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作者 王中力 宋晓晖 +1 位作者 陈西召 陈国胜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期62-66,共5页
建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条。用本试验研制的CPV试... 建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条。用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品,其结果与HA结果相比对,HA效价在1∶40以上,试纸条均能检测到为阳性。CPV试纸条与犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应。且试纸条保存6个月后,其检测结果重复性为100%。试验证明,本研究建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可在临床上广泛应用,也可用于CPV的流行病学调查。 展开更多
关键词 免疫层析方法 胶体金 犬细小病毒 试纸条 抗原检测
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食品中转基因成分检测方法的研究进展 被引量:17
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作者 陈颖 葛毅强 +1 位作者 苏宁 徐宝梁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期82-86,共5页
随着各国政府和有关食品监督机构对转基因食品检测的日益重视 ,转基因食品检测方法的研究进展十分迅速。这篇文章就目前国内外常用的 2种转基因食品检测方法进行了概述。
关键词 食品 转基因成分 检测方法 PCR方法 ELISA法 免疫层析试纸条方法
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寄生虫学
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《中国医学文摘(基础医学)》 CSCD 2005年第5期287-292,共6页
关键词 恶性疟原虫海南株 寄生虫学 EBA-175Ⅱ区 胶体金免疫层析方法 单克隆抗体 基因检测 PFCRT IFN-Γ 伯氏疟原虫
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