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空气净化器降低室内尘螨过敏原含量及其免疫反应性的实验研究 被引量：11
1
作者 马忠校 刘晓宇 +3 位作者 杨小猛 王媛媛 吴莹莹 刘志刚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期133-137,共5页
目的检测开启空气净化器前后室内空气中粉尘螨主要过敏原的含量,探讨粉尘螨经空气净化器不同作用时间后对其抗原免疫反应性的影响。方法实验分组采样:(1)不开空调和空气净化器;(2)开空调、不开空气净化器;(3)同时开空调和空气净化器;(4... 目的检测开启空气净化器前后室内空气中粉尘螨主要过敏原的含量,探讨粉尘螨经空气净化器不同作用时间后对其抗原免疫反应性的影响。方法实验分组采样:(1)不开空调和空气净化器;(2)开空调、不开空气净化器;(3)同时开空调和空气净化器;(4)开空气净化器、不开空调。用粉尘采样器分别采集室内空气中尘螨过敏原Der f1和Der f2,运用ELISA方法检测4种环境条件下空气中Der f1、Der f2的含量;通过ELISA和免疫印迹方法检测空气净化器作用不同时间(24h、48h和72h)后粉尘螨过敏原免疫反应性的变化。结果 20个取样房间在开空调之后室内尘螨过敏原的含量都会增高,而在使用空气净化器后,不管是在空调开启或者关闭的情况下室内空气中Der f1和Der f2都会降低(P<0.01);粉尘螨在空气净化器等离子和静电高压场强作用下,死亡的粉尘螨其免疫反应性均较活螨显著降低(P<0.01),免疫组化显示其免疫反应性有所降低。结论本实验使用空气净化器能够显著降低室内空气中的尘螨过敏原Der f1、Der f2的浓度,并且通过空气净化器作用后,死亡的粉尘螨免疫反应性显著降低,提示使用空气净化器对过敏性疾病(如哮喘和过敏性鼻炎)具有重要的预防和干预作用。 展开更多
关键词 粉尘螨 空气净化器 过敏原 Der f检测 免疫反应性
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广州管圆线虫半乳凝素基因的克隆表达、蛋白纯化及免疫反应性研究 被引量：12
2
作者 郝丽 吴焜 +1 位作者 陈晓光 王琼 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期584-587,共4页
目的构建在E.coli中高效表达广州管圆线虫半乳凝素蛋白的重组表达质粒,并对重组蛋白纯化条件进行优化及免疫反应性鉴定。方法根据本室构建的广州管圆线虫幼虫cDNA文库EST测序结果,筛选出有诊断潜能的半乳凝素基因,经过PCR扩增其cDNA全... 目的构建在E.coli中高效表达广州管圆线虫半乳凝素蛋白的重组表达质粒,并对重组蛋白纯化条件进行优化及免疫反应性鉴定。方法根据本室构建的广州管圆线虫幼虫cDNA文库EST测序结果,筛选出有诊断潜能的半乳凝素基因,经过PCR扩增其cDNA全长序列后克隆入pET32a(+)载体进行诱导表达,包涵体经洗涤、变性、逐步透析复性,浓缩后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹。结果本研究首次克隆出广州管圆线虫半乳凝素蛋白基因全长cDNA序列(GenBank收录编号为DQ384534)。成功构建重组质粒pET32a(+)-AcGAL,通过IPTG诱导得到以包涵体形式表达的重组融合蛋白,Western-blot结果显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性。结论克隆表达了广州管圆线虫半乳凝素基因,为广州管圆线虫病诊断研究奠定了基础。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 克隆 表达 纯化 免疫反应性
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致弱尾蚴免疫血清与日本血吸虫不同发育阶段抗原免疫反应性的研究 被引量：11
3
作者 吕志跃 汪世平 +9 位作者 彭先楚 刘立鹏 李文凯 徐绍锐 周松华 余俊龙 戴橄 姜孝新 肖小芹 曾少华 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期197-201,共5页
目的　通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同 ,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原 ,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子。方法　分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗... 目的　通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同 ,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原 ,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子。方法　分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗原 ;采用ELISA分别测定正常尾蚴感染兔血清、紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清抗原的抗体水平 ;通过SDS PAGE电泳和免疫印迹技术 ,分析正常尾蚴感染血清与紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清对不同发育阶段的免疫反应性。结果与结论　SDS-PAGE结果显示未成熟虫卵抗原、成熟虫卵抗原、尾蚴抗原、雄性成虫抗原、雌性成虫抗原蛋白之间互有异同。间接ELISA试验显示致弱尾蚴免疫血清同样能诱导宿主产生高滴度的抗体水平。致弱尾蚴免疫血清共筛选出 2 3种具免疫学活性的抗原分子 ,分子量分别为 :2 4 .5kDa、2 8kDa、36kDa、4 3kDa、4 4kDa、4 8kDa、5 4kDa、5 8.5kDa、6 0kDa、6 2kDa、6 6kDa、6 8kDa、70kDa、75kDa、79kDa、85kDa、87kDa、91kDa、95kDa、97kDa、10 5kDa、10 8kDa、110kDa。其中未成熟虫卵和成熟虫卵抗原各占 11种 ,尾蚴抗原分子 4种 ,雄性成虫抗原分子 3种 ,雌性成虫抗原分子 6种 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 致弱尾蚴 期抗原 免疫反应性
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截短形式弓形虫SAG1抗原在大肠杆菌中的可溶性高效表达、纯化及免疫反应性鉴定 被引量：14
4
作者 言慧 李华 +2 位作者 周晓红 吴昆 陈晓光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第4期412-414,共3页
目的在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫SAG1基因的截短片段,并进行纯化及免疫反应性鉴定。方法利用NcoⅠ、HindⅢ双酶切,从本室建立的pET-30a(+)-SAG1重组质粒中获取SAG1基因的截短片段,并将目的片段连接到经同样双酶切的质粒pET... 目的在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫SAG1基因的截短片段,并进行纯化及免疫反应性鉴定。方法利用NcoⅠ、HindⅢ双酶切,从本室建立的pET-30a(+)-SAG1重组质粒中获取SAG1基因的截短片段,并将目的片段连接到经同样双酶切的质粒pET32a中,构建表达重组质粒pET-32a(+)-trSAG1。将重组质粒转入E.coliBL21中并进行诱导表达。表达蛋白经Ni-NTA agarose纯化后, Western-blotting分析其免疫反应性。结果成功构建重组质粒pET-32a(+)-trSAG1 ,通过IPTG诱导得到了以可溶性形式表达的重组SAG1蛋白,相对分子质量40 000,Western-blotting结果显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性,ELISA试验表明重组SAG1蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别。结论在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达了弓形虫SAG1基因的截短片段,表达蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别,有望成为一种有价值的诊断抗原。 展开更多
关键词 弓形虫 SAG1抗原 大肠杆菌 可溶性 表达 纯化 免疫反应性鉴定
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抗p21Ras单克隆抗体KGH-R1在大肠良恶性病变中的免疫反应性比较 被引量：5
5
作者 陈昊宾 刘杜先 +5 位作者 王丽 陈玥 宋蜀伶 杨丽琳 郝岩 杨举伦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1206-1209,共4页
目的:评价抗p21Ras单克隆抗体(mAb)KGH-R1在大肠良恶性病变及正常黏膜组织中的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法:用本实验室制备的广谱抗p21 ras mAb KGH-R1对正常大肠黏膜、大肠炎息肉、大肠低级别上皮内瘤变、大肠高级别... 目的:评价抗p21Ras单克隆抗体(mAb)KGH-R1在大肠良恶性病变及正常黏膜组织中的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法:用本实验室制备的广谱抗p21 ras mAb KGH-R1对正常大肠黏膜、大肠炎息肉、大肠低级别上皮内瘤变、大肠高级别上皮内瘤变、浸润性大肠癌及癌旁病变组织进行免疫组化染色,计算各样本的阳性细胞百分率和组织学评分(HSCORE)分值,比较各组免疫反应性的差异。结果:mAb KGH-R1与64.89%(61/94)的浸润性大肠癌发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞数为97.28%,平均HSCORE评分178.98分;与60.24%(50/83)的高级别上皮内瘤变组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞数为95.08%,平均HSCORE评分156.38分;与64.58%(31/48)的低级别上皮内瘤变组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞数为82.52%,平均HSCORE评分103.03分;与39.97%(29/73)的炎性息肉组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率17.78%,平均HSCORE评分18.66分。虽然mAb KGH-R1也与46.67%(21/45)的正常大肠黏膜上皮发生免疫反应,但阳性样本的平均阳性细胞数为2.64%,平均HSCORE评分为2.64分。大肠癌与癌旁高级别上皮内瘤变组织比较,mAb KGH-R1反应阳性细胞数和HSCORE评分无统计学意义,但高于癌旁低级别上皮内瘤变组织。20/85例(23.53%)癌旁正常黏膜组织与mAb KGH-R1呈微弱阳性反应。结论:mAb KGH-R1与大肠癌具有较强的免疫反应性,有开发为治疗性抗体的可能。 展开更多
关键词 大肠癌 P21RAS MAB KGH-R1 免疫组织化学 免疫反应性
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甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达及免疫反应性分析 被引量：6
6
作者 马全刚 潘志明 +5 位作者 游猛 黄金林 耿士忠 李晓波 顾健 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期923-925,948,共4页
目的构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析。方法人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后... 目的构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析。方法人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性。结果获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的蛋白表达条带,Western blot结果显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性。结论成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法的建立提供了生物材料。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 血凝素 原核表达 免疫反应性
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LAIR基因的克隆、原核表达及免疫反应性鉴定 被引量：5
7
作者 谢鑫 欧阳为明 +4 位作者 薛江楠 张新海 刘飞 庄然 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期118-120,123,共4页
目的 :克隆和表达淋巴细胞相关免疫球蛋白样受体 (leuko cyte associatedimmunoglobulin likereceptor ,LAIR ) ,鉴定抗LAIR 1单克隆抗体 (mAb)与LAIR 2分子的免疫反应性。方法 :利用RT PCR ,从人外周血单个核细胞 (PBMC)及白血病细胞系... 目的 :克隆和表达淋巴细胞相关免疫球蛋白样受体 (leuko cyte associatedimmunoglobulin likereceptor ,LAIR ) ,鉴定抗LAIR 1单克隆抗体 (mAb)与LAIR 2分子的免疫反应性。方法 :利用RT PCR ,从人外周血单个核细胞 (PBMC)及白血病细胞系Jurkat和HL 6 0中克隆了LAIRcDNA。将LAIR 1的胞膜外区基因及LAIR 2cDNA ,克隆入GST融合蛋白表达载体pGEX 4T 3中。以其转化E .coliBL2 1菌株后 ,在IPTG诱导下进行表达 ,表达产物用谷胱甘肽交联的Sepharose 4B纯化。用间接ELISA法 ,鉴定抗LAIR 1mAb对表达蛋白的免疫反应性。结果 :克隆并表达了LAIR 1和LAIR 2cDNA。同时克隆了 5种新的LAIR 1异型 ,其中从HL 6 0细胞克隆的 2种包含LAIR 1开放读框 (ORF) ,从Ju rkat细胞中克隆的 3种为LAIR 1cDNA片段。mAb鉴定表明LAIR 1与LAIR 2的免疫反应性不同。结论 :LAIR基因的转录、转录后的加工及表达 ,可能与个体和疾病状态有关。LAIR 1和LAIR 展开更多
关键词 淋巴细胞相关免疫球蛋白样受体 单克隆抗体 免疫反应性 RT-PCR 基因转录
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华支睾吸虫的一个μ型GST基因的表达、纯化与免疫反应性鉴定 被引量：4
8
作者 伍忠銮 余新炳 +3 位作者 吴德 徐劲 吴忠道 胡旭初 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期105-109,共5页
【目的】扩增华支睾吸虫一个μ型谷胱甘肽移酶(mu-classglutathionetransferaseofClonorchissinen-sis,CsGSTM)基因,明确是否存在内含子,进行原核表达,纯化其表达产物,鉴定免疫反应性。【方法】用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增... 【目的】扩增华支睾吸虫一个μ型谷胱甘肽移酶(mu-classglutathionetransferaseofClonorchissinen-sis,CsGSTM)基因,明确是否存在内含子,进行原核表达,纯化其表达产物,鉴定免疫反应性。【方法】用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增出目的基因,测序,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,按照Ni-NTAagarose说明书纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdode-cylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)、薄层色谱(thin-layerchromatography,TLC)和免疫印迹(Westernblotting)分析。【结果】CsGSTM基因全长657bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a(+)-CsGSTM在大肠杆菌中得到了有效表达,Mr,pET-30a(+)-CsGSTM=31×103。重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度为98%,重组蛋白在纯化前后均有免疫反应性。【结论】CsGSTM基因没有内含子,在大肠杆菌中能有效表达,纯化前后的重组蛋白都具有免疫反应性。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 μ型GST基因 纯化 免疫反应性 鉴定 CDNA文库 PCR
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弓形虫致密颗粒蛋白基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价 被引量：6
9
作者 郑斌 余南 +3 位作者 李卓雅 郑焕钦 何蔼 詹希美 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期119-121,114,共4页
目的将克隆入pGEX-4T-1的致密颗粒蛋白基因进行表达并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法将重组表达质粒pGEX-4T-1/GRA7转入大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导进行SDS变性蛋白质电泳,分别以Anti-GSTAntibody、免抗弓形虫阳性血清和人抗弓形... 目的将克隆入pGEX-4T-1的致密颗粒蛋白基因进行表达并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法将重组表达质粒pGEX-4T-1/GRA7转入大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导进行SDS变性蛋白质电泳,分别以Anti-GSTAntibody、免抗弓形虫阳性血清和人抗弓形虫阳性血清为一抗进行WesternBlot分析。用GSTrapFFHiTrapaffinitycolumns纯化重组蛋白,以此蛋白作为包被抗原,BLISA法检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果SDS变性蛋白质电泳显示在43KDa～66KDa蛋白条带之间有特异蛋白的表达,蛋白分子量大小与理论值相符。WesternBlot分析表明该重组蛋白为GST融合蛋白,且该蛋白能被人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清所识别。ELISA结果表明该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清特异结合,而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫致密颗粒蛋白基因在大肠埃希菌中得到表达;该重组蛋白具有良好的免疫反应性。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 致密颗粒蛋白7 基因表达 免疫反应性 酶联免疫吸附试验
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枫蓼肠胃康颗粒对细胞免疫反应性结肠炎中SOD、MDA的影响 被引量：6
10
作者 符健 邝少轶 +1 位作者 李佩琼 邢桂兰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期110-112,共3页
目的　观察枫蓼肠胃康颗粒对细胞免疫反应性结肠炎大鼠血中超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)的作用。方法　将雄性Wistar大鼠分成 6组 ,用三硝基苯磺酸和ethanol混和液灌肠法 ,建立大鼠细胞免疫反应性结肠炎动物模型 ,在 1、3、7、2... 目的　观察枫蓼肠胃康颗粒对细胞免疫反应性结肠炎大鼠血中超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)的作用。方法　将雄性Wistar大鼠分成 6组 ,用三硝基苯磺酸和ethanol混和液灌肠法 ,建立大鼠细胞免疫反应性结肠炎动物模型 ,在 1、3、7、2 1d分别处死大鼠。对肠壁形态进行观察 ,并测定大鼠血中SOD活力及MDA含量。结果　高剂量组的肠壁损伤分值在 7、2 1d较造模组降低 (P <0 0 5 ) ;造模组大鼠SOD活力d 3和d 7低于高剂量给药组 (P <0 0 5 ) ,MDA含量d 7、2 1高于各给药组 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。 展开更多
关键词 枫蓼肠胃康颗粒 细胞免疫反应性结肠炎 氧自由基 丙二醛
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融合基因Aβ-HBcAg的原核表达及表达蛋白的免疫反应性和免疫原性分析 被引量：6
11
作者 胡海涛 冯改丰 +2 位作者 董炜疆 王全颖 杨广笑 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期220-222,共3页
目的　研究 β 淀粉样肽 (β amyloidpeptide,Aβ)与乙型肝炎核心抗原 (HBcAg)融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,检测融合蛋白的免疫反应性及免疫原性。方法　将重组质粒pBV2 2 0 /Aβ HBcAg转化大肠杆菌DH5α,温控表达 ,超声破碎细菌 ,通... 目的　研究 β 淀粉样肽 (β amyloidpeptide,Aβ)与乙型肝炎核心抗原 (HBcAg)融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,检测融合蛋白的免疫反应性及免疫原性。方法　将重组质粒pBV2 2 0 /Aβ HBcAg转化大肠杆菌DH5α,温控表达 ,超声破碎细菌 ,通过SDS PAGE、考马斯亮蓝染色和ELISA等方法 ,观察Aβ HBcAg的表达及融合蛋白的免疫反应性 ;用融合蛋白免疫Balb/c小鼠 ,ELISA法检测血清中的抗 Aβ抗体和抗 HBc抗体滴度。结果　融合蛋白以包涵体的形式存在于沉淀中 ,表达量为菌体沉淀的 5 % ,融合蛋白既有Aβ的免疫反应性 ,又有HBcAg的免疫反应性。Balb/c小鼠经过 3次免疫后 ,血清中的抗体滴度很低 ,继续强化免疫 2次后 ,血清中抗 Aβ抗体滴度、抗 HBc抗体滴度分别上升为 1∶80 0和1∶32 0 0。结论　融合基因Aβ HBcAg可在大肠杆菌DH5α中表达 ,表达蛋白有一定的免疫反应性和免疫原性 ,但表达量较低 ,免疫反应性和免疫原性较弱。提示融合基因Aβ HBcAg的表达量和融合蛋白免疫原性的提高尚需进一步研究。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Β淀粉样肽 HBcAg免疫反应性 免疫原性
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绵羊肺炎支原体P109蛋白质分子特征、原核表达及其免疫反应性 被引量：8
12
作者 谢珊珊 黄金 杨发龙 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期824-828,共5页
为了研究绵羊肺炎支原体P109蛋白质的结构与功能,本试验对p109基因进行生物信息学分析,并对其部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,采用Western-blot方法对其免疫反应性进行分析。结果显示,P109基因与猪肺炎支原体黏附相关基因mh... 为了研究绵羊肺炎支原体P109蛋白质的结构与功能,本试验对p109基因进行生物信息学分析,并对其部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,采用Western-blot方法对其免疫反应性进行分析。结果显示,P109基因与猪肺炎支原体黏附相关基因mhp384高度同源。重组蛋白质在大肠杆菌Rosetta(DE3)工程菌中成功获得表达,以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白质与山羊抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P109蛋白质是绵羊肺炎支原体的免疫原之一。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 P109蛋白质 原核表达 免疫反应性
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具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定 被引量：4
13
作者 杨培梁 陈晓光 +4 位作者 王元占 李华 周晓红 吴焜 言慧 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期528-530,544,共4页
目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠... 目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性。结果该基因在原核表达系统中经诱导,得到了Mr31000的可溶性融合表达产物。经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上。免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别。结论弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 弓形虫 多表位 大肠杆菌 蛋白表达 免疫反应性
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H9N2亚型禽流感病毒HA基因的原核表达及其免疫反应性分析 被引量：2
14
作者 易华山 侯顺利 +3 位作者 独军政 常惠芸 丛国正 胡永浩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1249-1251,1254,共4页
目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化E.coliBL21(DE3)感受态细... 目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达7h。结果成功构建了表达载体pET-HA,该载体能高效表达HA蛋白,相对分子质量约62kDa,在约62kDa处出现一条明显的特异性蛋白条带。结论成功表达了禽流感病毒HA蛋白,该蛋白纯化产物能与H9亚型的AIV鸡血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 禽流感 血凝素 H9N2 原核表达 免疫反应性
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猪带绦虫腺苷酸激酶的克隆及其重组蛋白免疫反应性的评价 被引量：2
15
作者 戴佳琳 黄江 +3 位作者 廖兴江 申萍香 周灵贵 刘玉江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期534-536,共3页
为原核表达猪带绦虫腺苷酸激酶(ADK),对其免疫性进行初步研究,本研究以猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中ADK同源基因重组质粒为模板,通过PCR扩增并将其亚克隆于原核表达载体pET28a(+),构建了pET-Ts-ADK重组质粒,经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAG... 为原核表达猪带绦虫腺苷酸激酶(ADK),对其免疫性进行初步研究,本研究以猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中ADK同源基因重组质粒为模板,通过PCR扩增并将其亚克隆于原核表达载体pET28a(+),构建了pET-Ts-ADK重组质粒,经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE鉴定,表明重组蛋白约30ku。经His-镍蛋白纯化柱纯化后western blot试验表明该重组蛋白可被猪带绦虫、亚洲带绦虫及牛带绦虫患者血清识别,表明猪带绦虫ADK基因在原核表达系统中表达获得的蛋白具有免疫反应性。 展开更多
关键词 猪带绦虫 腺苷酸激酶 基因克隆 免疫反应性
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人淋巴细胞免疫反应性生长激素mRNA的扩增与鉴定 被引量：2
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作者 刘军喜 郑德先 +1 位作者 邓洁英 史轶蘩 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期370-374,共5页
用正常人淋巴细胞，总ＲＮＡ与人垂体生长激素特异性探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，得到一条弱的杂交带，其位置与人垂体生长激素分泌瘤总ＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交带近乎一致。根据人垂体生长激素ｃＤＮＡ顺序设计合成寡核苷酸引... 用正常人淋巴细胞，总ＲＮＡ与人垂体生长激素特异性探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，得到一条弱的杂交带，其位置与人垂体生长激素分泌瘤总ＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交带近乎一致。根据人垂体生长激素ｃＤＮＡ顺序设计合成寡核苷酸引物，用逆转录。聚合酶链反应相结合的方法，从正常人外周血淋巴细胞．总ＲＮＡ中扩增出的ｃＤ－ＮＡ与人垂体生长激素ｃＤＮＡ大小相似，证实正常人淋巴细胞有免疫反应性生长激素ｍＲＮＡ的表达。 展开更多
关键词 免疫反应性 生长激素 MRNA 淋巴细胞 扩增 鉴定
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肺腺癌和正常肺组织中抗p21^(ras)单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3的免疫反应性比较 被引量：2
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作者 高静 张代军 +4 位作者 宋蜀伶 甄时建 陈玥 王丽 杨举伦 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期627-630,共4页
目的比较抗p21ras的单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3在肺腺癌和正常肺组织中的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法用本实验室制备的广谱抗p21ras单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3对30例肺腺癌和30例正常肺组织进行免疫组... 目的比较抗p21ras的单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3在肺腺癌和正常肺组织中的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法用本实验室制备的广谱抗p21ras单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3对30例肺腺癌和30例正常肺组织进行免疫组化SP法染色,计算各样本的阳性细胞百分率和HSCORE分值,比较两组间的免疫反应性差异。结果单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3与肺腺癌发生免疫反应的百分率分别为83.33%(25/30)、93.33%(28/30)、63.33%(19/30);阳性样本的平均阳性细胞百分数均为100%;平均HSCORE评分分别为127.50分、280.25分、158.50分。与正常肺组织发生免疫反应的百分率分别为26.67%(8/30)、16.67%(5/30)、33.33%(10/30);阳性样本的平均阳性细胞百分数分别为7.75%、7.50%、8.05%;平均HSCORE评分分别为7.75分、7.50分、8.05分。单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3与肺腺癌免疫反应阳性样本的平均阳性细胞百分数比较,3者之间差异无统计学意义(P>0.05);3者阳性样本的平均HSCORE分值比较:KGH-R2比KGH-R1、KGH-R3有更强的免疫反应性(P<0.05)。结论 KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3单克隆抗体与肺腺癌组织的免疫反应性强于正常肺组织,其中KGH-R2免疫反应性最强,可进一步开发为肺腺癌的治疗性抗体。 展开更多
关键词 肺肿瘤 腺癌 P21RAS 单克隆抗体 KGH-R1 KGH-R2 KGH-R3 免疫反应性
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辣椒素对大鼠面部皮肤CGRP免疫反应性神经影响的实验研究 被引量：2
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作者 丁继固 茹立强 +1 位作者 殷光甫 曹福利 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期20-22,共3页
目的:研究辣椒素(CAP)对大鼠面部皮肤降钙素基因相关肽(CGRP)免疫反应性神经纤维(IRF)的影响,探讨CAP治疗三叉神经的镇痛机制。方法:把CAP配成30mM浓度溶液备用,按用量分成四组(A组20μl、B组30μl、C组50μl和D组100μl),分别皮下注射... 目的:研究辣椒素(CAP)对大鼠面部皮肤降钙素基因相关肽(CGRP)免疫反应性神经纤维(IRF)的影响,探讨CAP治疗三叉神经的镇痛机制。方法:把CAP配成30mM浓度溶液备用,按用量分成四组(A组20μl、B组30μl、C组50μl和D组100μl),分别皮下注射大鼠三叉神经眶下支,24h取材,切片,免疫组化染色,镜检,计算机图像分析。结果:经方差分析,除CGRP平均光度的对照组和A组,无显著性差异外(P>0.05),其它各组之间,有非常显著性差异(P<0.01)。并且随着用药量的增加其差值也更大。结论:CAP对大鼠面部皮肤CGRP免疫反应性神经有明显的影响,CGRP参与口面部的痛与镇痛。 展开更多
关键词 辣椒素 大鼠 皮肤 降钙素基因相关肽 免疫反应性神经纤维
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β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表达蛋白的免疫反应性分析 被引量：2
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作者 倪琼琼 丁月霞 +1 位作者 刘金来 余步云 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期351-356,共6页
【目的】了解广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌(BHS)中htra同源基因的分布并初步探讨其表达蛋白在BHS中的免疫反应性。【方法】运用PCR扩增从患儿分离的44株BHS的htra基因并测序,测序结果与NCBI中已知基因序列进行同源性比对;将测序正确... 【目的】了解广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌(BHS)中htra同源基因的分布并初步探讨其表达蛋白在BHS中的免疫反应性。【方法】运用PCR扩增从患儿分离的44株BHS的htra基因并测序,测序结果与NCBI中已知基因序列进行同源性比对;将测序正确的A组链球菌(GAS)htra基因克隆至原核表达质粒pGEX4T-1,并在E.coli BL21中表达,应用Western blot,以抗GST Rabbit mAb鉴定重组融合蛋白表达,以BHS免疫小鼠抗血清检测目的蛋白的免疫反应性。【结果】44株BHS的htra基因与已知GAS htra基因的一致性均达99%;Western blot显示,HtrA融合蛋白可与抗GST Rabbit mAb以及GAS免疫小鼠血清特异性结合,而非A组链球菌及对照组免疫血清则呈阴性结果。【结论】从患儿分离的BHS均携带与GAS相同的htra基因,这与基因库中已知的B组链球菌(GBS)、C组链球菌(GCS)htra序列不符;GAS感染动物后可产生抗HtrA蛋白抗体,可以认为HtrA为GAS的显性免疫原,而尚不能认为非A组链球菌中HtrA为其显性免疫原。 展开更多
关键词 Β溶血性链球菌 htra基因 克隆表达 免疫反应性
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间日疟原虫和恶性疟原虫可溶性抗原免疫反应性比较 被引量：2
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作者 胡守锋 陶志勇 夏惠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期988-990,共3页
目的分析和比较间日疟原虫(Plasmodiumvivax,P.v)和恶性疟原虫(P.falciparum,P.f)可溶性抗原与间日疟感染者混合血清和单克隆抗体(McAb)M26-32免疫反应性的差别,以期寻找潜在的疟疾诊断抗原。方法取P.v感染者血样,用Plasmodipur滤器分... 目的分析和比较间日疟原虫(Plasmodiumvivax,P.v)和恶性疟原虫(P.falciparum,P.f)可溶性抗原与间日疟感染者混合血清和单克隆抗体(McAb)M26-32免疫反应性的差别,以期寻找潜在的疟疾诊断抗原。方法取P.v感染者血样,用Plasmodipur滤器分离去除白细胞,经60%Percoll浓集其中的感染红细胞(i RBC)。分别制备P.v、P.f和正常红细胞(nRBC)可溶性抗原,应用P.v感染者、正常对照混合血清和M26-32单抗与相应的抗原进行免疫印迹分析。结果免疫印迹分析表明,P.v感染者能特异性识别26k、33、49、115kDaP.v抗原;100、102、110、150、175kDaP.f抗原;能够交叉识别的条带有:31、59、63、70、120kDa。M26-32单抗能识别P.f、P.v抗原中31kDa等抗原条带。结论P.v感染者能特异识别间日疟抗原组份,并能交叉识别P.f抗原,其中31kDa抗原组分具有较强的免疫原性,同时能被M26-32单抗识别,其作为P.v特异性诊断抗原的价值有待于进一步研究。 展开更多
关键词 间日疟原虫 恶性疟原虫 免疫反应性 单克隆抗体
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