免疫调节性寡聚脱氧核苷酸筛选方法的建立、优化和应用 被引量：2

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作者 胡大利 张雪松 +4 位作者 王华颖 孙然 任继玲 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1017-1020,共4页

目的:建立一套合理而便捷的实验体系,为开发新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)提供筛选方法。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(PBMC)作为研究对象,分别以细胞的增殖程度和刺... 目的:建立一套合理而便捷的实验体系,为开发新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)提供筛选方法。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(PBMC)作为研究对象,分别以细胞的增殖程度和刺激上清的抗病毒活性作为检测指标,优化各项实验条件,综合评定寡聚脱氧核苷酸的免疫调节活性。结果:成功建立了由阳性免疫调节性ODNA151抑制CpG ODN诱导的人PBMC增殖及抗病毒活性的筛选方法。结论:免疫调节性ODN筛选方法的成功建立,为下一步研究开发新型免疫调节性ODN奠定了基础。 展开更多

关键词 免疫调节 寡聚脱氧核苷酸 CPG ODN 人外周血单个核细胞

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一种以病毒作为刺激剂的抑制性寡聚脱氧核苷酸筛选方法的建立

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作者 孙然 胡大利 +5 位作者 杨光 王学菊 孙陆果 常雅萍 王丽颖 于永利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期733-736,共4页

目的:研究人工合成的寡聚脱氧核苷酸(ODN)对人体抗病毒免疫反应的抑制作用,为开发具有免疫调节功能的新型ODN提供筛选平台。方法:将热灭活的人单纯疱疹病毒I型(HSV-1)和流感病毒PR8株(PR8-Flu)作为刺激物,同时以已知的免疫抑制性ODNIRS... 目的:研究人工合成的寡聚脱氧核苷酸(ODN)对人体抗病毒免疫反应的抑制作用,为开发具有免疫调节功能的新型ODN提供筛选平台。方法:将热灭活的人单纯疱疹病毒I型(HSV-1)和流感病毒PR8株(PR8-Flu)作为刺激物,同时以已知的免疫抑制性ODNIRS954作为抑制物,用生物学检测方法分析病毒与ODN共同作用的人外周血单个核细胞(PBMC)培养上清的抗病毒活性,并优化各项实验条件。结果:IRS954能显著抑制HSV-1和PR8-Flu诱导的人PBMC的抗病毒活性。在该实验条件下,自行设计的ODN显示出不同的免疫抑制活性。结论:具有一定序列特点的ODN能够抑制由DNA或RNA病毒诱导的人体抗病毒免疫,该实验方法为研究开发新型免疫调节性ODN奠定了基础。 展开更多

关键词 寡聚脱氧核苷酸 人单纯疱疹病毒 流感病毒 免疫抑制 人外周血单个核细胞

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寡聚脱氧核苷酸对鸡免疫增强作用的研究进展

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作者 高晨 李秀萍 +1 位作者 郭昌春 于可响 《家禽科学》 2008年第3期44-46,共3页

新型免疫佐剂CpG寡聚脱氧核苷酸（CpGODN）的发现源于人类对癌症治疗的探究。早在19世纪九十年代。人们就观察到注射全菌制剂的癌症病人的肿瘤可以显著消除。最初认为脂多糖是细菌制剂中的活性成份。随后对结核分枝杆菌的研究证实，在... 新型免疫佐剂CpG寡聚脱氧核苷酸（CpGODN）的发现源于人类对癌症治疗的探究。早在19世纪九十年代。人们就观察到注射全菌制剂的癌症病人的肿瘤可以显著消除。最初认为脂多糖是细菌制剂中的活性成份。随后对结核分枝杆菌的研究证实，在鼠体内细菌DNA是抗肿瘤活性的主要介导物，其证据是BCG经DNA酶预处理后，细菌DNA的抗肿瘤能力就彻底消失。 展开更多

关键词 寡聚脱氧核苷酸 免疫增强作用 抗肿瘤活性 细菌DNA 结核分枝杆菌 细菌制剂 癌症治疗 免疫佐剂

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新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸的序列设计和筛选分析 被引量：2

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作者 张雪松 胡大利 +4 位作者 孙然 杨光 王华颖 王丽颖 于永利 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期389-392,共4页

目的:探讨免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)设计原则和筛选方法,为研究和开发新型免疫调节性ODN提供参考。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(hPBMC)作为研究对象,以3H-TdR掺入法... 目的:探讨免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)设计原则和筛选方法,为研究和开发新型免疫调节性ODN提供参考。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(hPBMC)作为研究对象,以3H-TdR掺入法检测CpG ODN诱导的细胞增殖水平,对自行设计的ODN的免疫调节活性进行筛选分析。结果:通过对两批免疫调节性ODN的设计和筛选,得到具有较强免疫抑制活性的ODN 667B,与CpG BW006组相比,其抑制率达到66.3%(P<0.01),并具有浓度相关性。结论:总结出免疫调节性ODN的设计原则,同时证明筛选方法可以用于免疫调节性ODN的筛选,为进一步研究开发新型免疫调节性ODN奠定了基础。 展开更多

关键词 免疫调节 寡聚脱氧核苷酸 CPG ODN 人外周血单个核细胞

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CpG寡聚脱氧核苷酸抑制肾癌细胞增殖及肿瘤生长的体内外实验研究

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作者 马斌斌 周佩军 +2 位作者 徐达 王祥慧 邵琨 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期763-768,共6页

目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982(ODN1982)干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响。24... 目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982(ODN1982)干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响。24只BALB/c裸鼠皮下接种Caki-1细胞建立荷瘤裸鼠模型,4d后根据每周1次的治疗方式随机分为对照组(PBS)、ODN1982组(50μg ODN1982)、小剂量CpG ODN1826组(25μgCpG ODN1826)和大剂量CpG ODN1826组(50μgCpG ODN1826),每组6只。于建模后35d处死动物,比较各组荷瘤裸鼠的肿瘤体积、质量及肿瘤组织学改变;体外分离各组荷瘤裸鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测不同靶标比例(脾淋巴细胞:Caki-1细胞或脾淋巴细胞:小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞)的荷瘤裸鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 ODN1982对Caki-1细胞的体外增殖活性无显著影响;500μg/mLCpG ODN1826干预可显著抑制Caki-1细胞增殖。至实验终止时点,小剂量和大剂量CpG ODN1826组荷瘤裸鼠的肿瘤体积显著小于ODN1982组和对照组(P<0.05);各组间肿瘤质量比较差异均具有统计学意义(P<0.05);组织学观察显示,小剂量和大剂量CpG ODN1826组肿瘤组织较多炎性细胞浸润。当靶标比例为50:1时,大剂量CpG ODN1826组裸鼠脾淋巴细胞对Caki-1细胞和YAC-1细胞的杀伤活性分别为(9.74±1.16)%和(79.65±5.23)%,显著高于对照组的(7.67±0.22)%和(10.12±3.03)%及ODN1982组的(7.66±0.93)%和(27.60±9.83)%(P<0.05)。结论 CpG ODN对体外肾癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤组织生长均具有明显抑制作用,其机制可能与CpG ODN增强荷瘤裸鼠的固有免疫应答有关。 展开更多

关键词 CPG寡聚脱氧核苷酸 肾癌 固有免疫

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局部应用Cp G寡聚脱氧核苷酸联合OX40单抗治疗肝细胞癌小鼠模型的效果分析

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作者 马士朝 张超群 孙殿兴 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第9期1985-1989,共5页

目的探讨局部应用CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合OX40单抗方案对肝细胞癌的疗效,以及对远处同源肿瘤的治疗效果。方法在BALB/c雄性小鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对... 目的探讨局部应用CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合OX40单抗方案对肝细胞癌的疗效,以及对远处同源肿瘤的治疗效果。方法在BALB/c雄性小鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对照组、CpG组、CpG+OX40组,每组10只,并在左下肢瘤内注射药物。选取10只同批正常小鼠作为正常对照组。计算荷瘤体积,ELISA法检测血清IL-12和IFNγ浓度,流式细胞术检测脾脏CD8^+T淋巴细胞比例,比较3组小鼠治疗后的生存情况。计量资料多组间比较采用重复测量设计资料的方差分析和单因素方差分析,进一步两两组间比较采用LSD-t检验;采用log-rank检验分析3组小鼠(不包含正常组)生存率,并绘制生存曲线。结果给予治疗后,模型对照组荷瘤呈进行性增长,血清IL-12和IFNγ水平、脾脏CD8^+T淋巴细胞比例较正常对照组均减低(P值均<0.05)。与模型对照组相比,CpG组和CpG+OX40组干预荷瘤体积均缩小(P值均<0.05);CpG+OX40组远处荷瘤体积比CpG组和模型对照组增长减慢(P值均<0.05),但CpG组远处荷瘤体积与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组相比,两实验组血清中IL-12和IFNγ水平及脾脏CD8^+T淋巴细胞比例均升高(P值均<0.05),且CpG+OX40组高于CpG组(P值均<0.05)。CpG+OX40组小鼠生存率均高于模型对照组和CpG组(P值均<0.05),CpG组与模型对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OX40单抗联合CpG-ODN可使治疗处肝脏肿瘤缩小,并有效减缓远处肿瘤增长,延长小鼠生存时间。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 OX40 CPG寡聚脱氧核苷酸 免疫疗法 小鼠 近交BALB C 动物实验

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CpG寡核苷酸联合Texo对小鼠结肠癌的治疗作用 被引量：1

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作者 刘允刚 张群 陈龙邦 《医学研究生学报》 CAS 2010年第3期228-232,共5页

目的肿瘤细胞分泌的外泌体(tumor-derived exosomes,Texo)是目前肿瘤免疫治疗领域的一个热点。文中主要观察小鼠结肠癌细胞CT-26分泌的Texo联合包含有未甲基化的CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对小鼠... 目的肿瘤细胞分泌的外泌体(tumor-derived exosomes,Texo)是目前肿瘤免疫治疗领域的一个热点。文中主要观察小鼠结肠癌细胞CT-26分泌的Texo联合包含有未甲基化的CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对小鼠结肠癌细胞CT-26移植瘤的治疗作用。方法使用差速离心法分离和提取CT-26细胞分泌的Texo,紫外分光光度计进行蛋白定量,透射电镜观察Texo的形态。用Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo(联合组)和等渗盐水(对照组)免疫BALB/c小鼠,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定T细胞对CT-26细胞的体外杀伤活性。建立CT-26小鼠结肠癌皮下移植瘤模型,1周后皮下注射Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo以及等渗盐水,观察它们对皮下移植瘤生长的抑制作用。结果CT-26细胞分泌的Texo为直径30～100 nm的膜囊泡。CpG ODN1826+Texo联合免疫小鼠的T细胞体外对CT-26细胞的杀伤作用与单药组和对照组相比均明显增强(P<0.05)。动物实验表明,Texo和CpG单药组的抑瘤作用与对照组相比有明显差异(P<0.05),而联合组能更显著地抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论与CpG ODN和Texo单药相比,二者联合用药能有效的抑制小鼠结肠癌皮下移植瘤的生长。 展开更多

关键词 外泌体 CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸 结肠癌 免疫治疗 佐剂

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CpG序列免疫激活特性及其应用前景 被引量：3

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作者 张玲华 田兴山 +1 位作者 邝哲师 张宝玲 《中国畜牧兽医》 CAS 2003年第3期38-40,共3页

Cp G序列是一些在动物体内具有强烈的免疫激活功能的寡聚脱氧核苷酸。作者探讨了 Cp G序列在动物体内免疫激活作用机理 ,简述了 Cp G应用研究的进展 ,并概述了 Cp G序列的应用前景。

关键词 CPG序列 免疫激活作用 应用前景 寡聚脱氧核苷酸 作用机理 结构 免疫佐剂

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趋化因子SLC和免疫佐剂CpG-ODN联合应用对小鼠移植黑素瘤的疗效 被引量：1

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作者 许相范 许振柱 +3 位作者 唐丽华 李安娜 徐显辉 柳春宝 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-29,共5页

目的:探讨次级淋巴组织趋化因子(seccondary lymphoid tissue chemokine,SLC)和CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)联合应用对小鼠移植黑素瘤的治疗效果及其可能机制。方法:制备SLC-Fc融合蛋白,体外检测SLC-Fc对小鼠... 目的:探讨次级淋巴组织趋化因子(seccondary lymphoid tissue chemokine,SLC)和CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)联合应用对小鼠移植黑素瘤的治疗效果及其可能机制。方法:制备SLC-Fc融合蛋白,体外检测SLC-Fc对小鼠淋巴细胞的趋化效应。建立小鼠黑素瘤移植模型,随机分生理盐水对照组、CpG-ODN组、SLC-Fc组以及SLC-Fc+CpG-ODN组共4组。观察治疗后各组小鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤组织中淋巴细胞的种类和浸润情况。结果:成功制备SLC-Fc蛋白,SLC-Fc对小鼠淋巴细胞具有剂量依赖性(0.03、0.3和3μg/L)趋化作用。瘤内注射SLC-Fc和(或)CpG-ODN明显抑制肿瘤的生长,联合治疗组瘤体明显小于对照组(P<0.01),并且小鼠存活时间也明显延长。联合治疗组瘤体内CD4+、CD8+T淋巴细胞和CD11c+树突状细胞较对照组显著增多(P<0.05,P<0.01),并且其肿瘤引流淋巴结也明显增大。结论:SLC和CpG-ODN联合应用对小鼠移植黑素瘤有抑制作用,其机制与趋化CD4+T、CD8+T细胞和促进DCs增殖有关。 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 CPG寡聚脱氧核苷酸 黑素瘤 抗肿瘤免疫

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CpG ODN协同小鼠肝癌细胞裂解物对小鼠原位移植性肝癌的抑制作用研究 被引量：1

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作者 孙鹏 李欢欢 +2 位作者 王卫芳 窦瑶 周晓晶(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期2842-2845,共4页

目的:研究CpG ODN与小鼠肝癌细胞(H22)裂解物(TCL)联用对小鼠原位移植性肝癌的抑制作用及机制初探。方法:制备H22细胞裂解物和建立BALB/c小鼠原位移植性肝癌模型。将模型鼠随机分为四组PBS、TCL、CpG ODN和CpG ODN+TCL,观察各组小鼠肿... 目的:研究CpG ODN与小鼠肝癌细胞(H22)裂解物(TCL)联用对小鼠原位移植性肝癌的抑制作用及机制初探。方法:制备H22细胞裂解物和建立BALB/c小鼠原位移植性肝癌模型。将模型鼠随机分为四组PBS、TCL、CpG ODN和CpG ODN+TCL,观察各组小鼠肿瘤生长情况及小鼠的生存期。采用细胞毒性淋巴细胞(CTL)杀伤实验观察各组小鼠淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤情况。用ELISA方法检测CpG ODN协助TCL诱导Th1型细胞因子分泌水平。结果:与其他组相比CpG ODN+TCL明显抑制了肿瘤生长、延长了荷瘤鼠的生存期(P<0.05)。体内外实验显示,CpG ODN能协同TCL刺激小鼠产生Th1型细胞因子和诱导CTL反应。结论:以CpG ODN为佐剂的TCL具有抑制小鼠原位移植性肝癌的作用,且这种作用可能由于CpG ODN协同TCL诱导小鼠产生的Th1型细胞因子和CTL反应实现的。 展开更多

关键词 肿瘤细胞裂解物 免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸 肝癌 Th1型免疫反应

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3类CpG ODNs正调节猪IP-10基因的表达研究

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作者 Arshud Dar 晋大鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期173-173,共1页

CpG ODN诱导不同物种先天性免疫反应的分析结果表明,诱导细胞因子(CK)分布的种类和水平存在明显的异同。试验对3类CpG ODNs(A、B、C类)如何激活猪先天性免疫生物标记及猪免疫细胞在体内外培养(含CpGODNs)中的先天性免疫反应动力学进行... CpG ODN诱导不同物种先天性免疫反应的分析结果表明,诱导细胞因子(CK)分布的种类和水平存在明显的异同。试验对3类CpG ODNs(A、B、C类)如何激活猪先天性免疫生物标记及猪免疫细胞在体内外培养(含CpGODNs)中的先天性免疫反应动力学进行了研究。利用实时定量PCR(SYBR Green)分析了细胞因子和趋化因子基因的mRNA表达水平。结果发现,A-类CpG ODN可显著诱发IFN-γ、IL-12(P40)、IL-6、IL-4、TNF-αmRNA的瞬间表达;C-类CpG ODN可显著诱发IFN-γ、IFN-α、IL-12 mRNA的表达,并使IL-4(Th-2型)mRNA降至最低表达水平,GCODNs可刺激使一些细胞因子的表达水平降至最低;B-classGpC ODN7909能显著影响IL-12(P35)mRNA表达水平。值得注意的是,12 h时3类CpG ODNs刺激均可显著诱导IP-10的mRNA表达。体内外试验结果表明,IP-10可作为CpG ODNs诱发猪免疫活性的生物标记。 展开更多

关键词 猪PBMC CPG寡聚脱氧核苷酸 先天性免疫反应 细胞因子 基因表达 QRT-PCR

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