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酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
1
作者
徐灿
张震宇
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期99-104,共6页
以酿酒酵母基因组DNA为模板，根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因（ray1）序列和表达载体特性设计特异性引物，PCR扩增得到4074bp的DNA片段，将PCR产物和原核表达载体pET28a（＋）同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达载体进行...
以酿酒酵母基因组DNA为模板，根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因（ray1）序列和表达载体特性设计特异性引物，PCR扩增得到4074bp的DNA片段，将PCR产物和原核表达载体pET28a（＋）同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达载体进行连接，构建成重组质粒pET28a．rav1。再将pET28a．rav1转化到BL21（DE3）感受态细胞中。经IPTG16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Rav1p。诱导后的菌体进行超声波破碎，然后用GEheahhcare公司的AKTA蛋白纯化仪和HisTrapHP1mL亲和层析柱纯化目的蛋白。SDS—PAGE电泳分析和Westernblot分析显示在155kD有明显的条带，成功实现了Rav1p在大肠杆菌中的表达纯化。
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关键词
酿酒酵母RAVE复合物Ravlp
克隆
原核
表达
蛋白
纯化
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职称材料
玉米赤霉烯酮降解酶基因mbZHD的原核表达及其降解毒素初步研究
被引量：
5
2
作者
柴成梁
常晓娇
+2 位作者
王楠希
伍松陵
孙长坡
《中国粮油学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期29-33,38,共6页
玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是由镰刀菌属产生的次生代谢物,是极易污染粮食作物的真菌毒素之一。ZEN具有强烈的雌激素样效应及致癌性,给人类和动物的健康造成巨大威胁。本研究在NCBI数据库中进行同源比对,获得了一些ZHD101降解酶的...
玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是由镰刀菌属产生的次生代谢物,是极易污染粮食作物的真菌毒素之一。ZEN具有强烈的雌激素样效应及致癌性,给人类和动物的健康造成巨大威胁。本研究在NCBI数据库中进行同源比对,获得了一些ZHD101降解酶的同源基因,其中,1个来源于真菌——杨盘二孢菌(Marssonina brunnea)的蛋白序列与ZHD101具有32%的同源性,基因大小为861 bp。通过化学合成方法得到该全长基因,通过构建E.coli原核表达系统进行蛋白表达,蛋白经亲和色谱纯化后对ZEN分子进行降解活性验证,HPLC结果表明,该蛋白在6 h内对10μg ZEN分子的降解率为98%,酶活为200 U/m L,从而获得了1个新的ZEN降解酶基因。
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关键词
玉米赤霉烯酮ZEN降解酶基因
克隆蛋白表达纯化
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职称材料
题名
酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
1
作者
徐灿
张震宇
机构
江南大学生物工程学院、江南大学工业生物技术教育部重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期99-104,共6页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金，国家自然科学基金，工业生物技术教育部重点实验室主任基金
文摘
以酿酒酵母基因组DNA为模板，根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因（ray1）序列和表达载体特性设计特异性引物，PCR扩增得到4074bp的DNA片段，将PCR产物和原核表达载体pET28a（＋）同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达载体进行连接，构建成重组质粒pET28a．rav1。再将pET28a．rav1转化到BL21（DE3）感受态细胞中。经IPTG16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Rav1p。诱导后的菌体进行超声波破碎，然后用GEheahhcare公司的AKTA蛋白纯化仪和HisTrapHP1mL亲和层析柱纯化目的蛋白。SDS—PAGE电泳分析和Westernblot分析显示在155kD有明显的条带，成功实现了Rav1p在大肠杆菌中的表达纯化。
关键词
酿酒酵母RAVE复合物Ravlp
克隆
原核
表达
蛋白
纯化
Keywords
Saccharomyces cerevisiae RAVE complex Ravlp Clone Prokaryotic expression Protein purification
分类号
Q492.4 [生物学—生理学]
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职称材料
题名
玉米赤霉烯酮降解酶基因mbZHD的原核表达及其降解毒素初步研究
被引量：
5
2
作者
柴成梁
常晓娇
王楠希
伍松陵
孙长坡
机构
国家粮食局科学研究院
出处
《中国粮油学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期29-33,38,共6页
基金
国家科技支撑计划(2015BAK43B01)
公益性行业(粮食)科研专项(201513006)
文摘
玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是由镰刀菌属产生的次生代谢物,是极易污染粮食作物的真菌毒素之一。ZEN具有强烈的雌激素样效应及致癌性,给人类和动物的健康造成巨大威胁。本研究在NCBI数据库中进行同源比对,获得了一些ZHD101降解酶的同源基因,其中,1个来源于真菌——杨盘二孢菌(Marssonina brunnea)的蛋白序列与ZHD101具有32%的同源性,基因大小为861 bp。通过化学合成方法得到该全长基因,通过构建E.coli原核表达系统进行蛋白表达,蛋白经亲和色谱纯化后对ZEN分子进行降解活性验证,HPLC结果表明,该蛋白在6 h内对10μg ZEN分子的降解率为98%,酶活为200 U/m L,从而获得了1个新的ZEN降解酶基因。
关键词
玉米赤霉烯酮ZEN降解酶基因
克隆蛋白表达纯化
Keywords
zearalenone, ZEN - degradation enzyme, gene cloning, protein expression and purification
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
徐灿
张震宇
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
玉米赤霉烯酮降解酶基因mbZHD的原核表达及其降解毒素初步研究
柴成梁
常晓娇
王楠希
伍松陵
孙长坡
《中国粮油学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017
5
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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