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成人动脉和心脏cDNA文库的构建及新全长cDNAs的克隆 被引量:17
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作者 魏英杰 丁金凤 +8 位作者 赵勇 王新日 刘玉清 许有元 熊辉 周严 惠汝太 高润霖 强伯勤 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期369-371,共3页
目的 :构建成人动脉和心脏互补脱氧核糖核酸 (c DNA)文库 ,克隆多个新的全长互补脱氧核糖核酸 (c DNAs)。  方法 :应用成人动脉和心脏组织 ,采用 Stratagene的建库试剂盒构建 c DNA文库。将随机克隆 5 '端表达序列标签序列与 Gen ... 目的 :构建成人动脉和心脏互补脱氧核糖核酸 (c DNA)文库 ,克隆多个新的全长互补脱氧核糖核酸 (c DNAs)。  方法 :应用成人动脉和心脏组织 ,采用 Stratagene的建库试剂盒构建 c DNA文库。将随机克隆 5 '端表达序列标签序列与 Gen Bank/ EMBL/ DDBJ数据库进行同源性比较 ,新的全长 c DNAs采用步移法完成全序列测定获得。  结果 :所建动脉 c DNA文库包含 2 .4× 10 6个独立重组克隆 ,插入片段平均长度为 2 .0 kb;心脏 c DNA文库包含 1.0× 10 6个独立重组克隆 ,平均长度为 1.8kb。首批得到了 8条新的全长 c DNAs,已在 Gen Bank登记注册。  结论 :构建符合要求的 c DNA文库是克隆新的全长 c DNAs的一条快速有效的途径。 展开更多
关键词 动脉 心脏 基因文库 CDNA CDNAS 克隆
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16S rDNA克隆文库方法分析好氧颗粒污泥细菌组成 被引量:33
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作者 李建婷 纪树兰 +3 位作者 刘志培 秦振平 刘缨 杨媛媛 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1218-1223,共6页
采用构建16SrDNA克隆文库方法对好氧颗粒污泥的细菌种群多样性进行研究.随机测定了82个克隆子序列(700 bp),Blast比对结果表明,好氧颗粒污泥中微生物群落具有高度多样性,可分为7个主要类群,其中,β变形菌(β-Proteobacteria)类群和鞘脂... 采用构建16SrDNA克隆文库方法对好氧颗粒污泥的细菌种群多样性进行研究.随机测定了82个克隆子序列(700 bp),Blast比对结果表明,好氧颗粒污泥中微生物群落具有高度多样性,可分为7个主要类群,其中,β变形菌(β-Proteobacteria)类群和鞘脂杆菌(Sphingobacteria)类群在文库中所占比例最大,分别为34.16%和30.50%;其次是Candidate division TM7类群、黄杆菌(Flavobacteria)类群和γ变形菌(γ-Proteobacteria)类群,分别为9.76%,7.32%和7.32%;放线菌(Actinobacteria)类群和α变形菌(α-Proteobacteria)类群所占比例相对较小,分别为4.88%和1.22%.序列分析结果表明,好氧颗粒污泥中不仅含有对好氧颗粒污泥形成和稳定运行具有重要作用的食酸菌属(Acidovorax)细菌、假单胞菌(Pseudomonas)等细菌,还含有对CODCr和氨氮具有很好去除能力的Micropruina glycogenica,丛毛单胞菌科(Comamonadaceae)等细菌. 展开更多
关键词 好氧颗粒污泥 16SrDNA克隆文库 细菌组成
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棉花抗黄萎病相关基因筛选与亚克隆文库构建 被引量:12
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作者 王文生 王省芬 +1 位作者 马峙英 张桂寅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期147-150,共4页
以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针,利用杂交方法,对优质、抗病海岛棉品种Pima90—53BAC文库进行筛选。从30336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆,分别为127K13,128D14,169J3和178C5。用Sau3A... 以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针,利用杂交方法,对优质、抗病海岛棉品种Pima90—53BAC文库进行筛选。从30336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆,分别为127K13,128D14,169J3和178C5。用Sau3AI对其中的169J3克隆进行酶切,回收2—4kb的DNA片段并连接到载体pUCI18BamHI—BAP上,构建了含有该基因片段的亚克隆文库,共含有4224个克隆。经电泳检测,插入片段在1.3kb,平均为2kb。该亚克隆文库的构建为克隆PR8基因奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 BAC 克隆文库 基因克隆
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免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库基因的亚克隆与鉴定 被引量:8
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作者 沈际佳 蒋作君 +3 位作者 汪渊 周青 余新炳 吴忠道 《安徽医科大学学报》 CAS 1999年第3期164-166,共3页
目的亚克隆免疫筛选日本血吸虫cDNA文库得到的基因。方法在体外将血吸虫cDNA文库基因的PCR产物和pGEMT载体连接,转染大肠杆菌XL1Blue,经抗生素及呈色底物Xgal粗筛,再用限制性内切酶及PCR方法进... 目的亚克隆免疫筛选日本血吸虫cDNA文库得到的基因。方法在体外将血吸虫cDNA文库基因的PCR产物和pGEMT载体连接,转染大肠杆菌XL1Blue,经抗生素及呈色底物Xgal粗筛,再用限制性内切酶及PCR方法进一步鉴定。结果成功地将文库中4个大小不同的日本血吸虫基因片段连接到载体中,获得4个重组子。结论为可能编码保护性抗原的血吸虫基因测序和将其亚克隆入真核表达质粒奠定基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因 文库 克隆 cDNA 克隆
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兔单个植入前克隆胚胎cDNA文库的构建 被引量:7
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作者 郁卫东 杨立新 +2 位作者 李文雍 刘桂生 陈清轩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期162-165,共4页
人与小鼠和牛在正常胚胎植入前发育过程中基因活化的研究已经取得了长足的进展 ,但是还没有对同期克隆胚胎相关研究的报道 .利用单个家兔植入前移核重构胚胎成功地构建了MⅡ卵母细胞及发育至 4 、8 细胞期的胚胎和囊胚的特异性cDNA文... 人与小鼠和牛在正常胚胎植入前发育过程中基因活化的研究已经取得了长足的进展 ,但是还没有对同期克隆胚胎相关研究的报道 .利用单个家兔植入前移核重构胚胎成功地构建了MⅡ卵母细胞及发育至 4 、8 细胞期的胚胎和囊胚的特异性cDNA文库 .并用 β肌动蛋白和LAPTM4α证实这类文库是可靠的 .以 8 细胞期移核重构胚cDNA文库为例 ,随机挑取克隆进行测序分析 :其中 2 3的基因EST片段可以在GenBank或EST库中找到同源序列 ,约 1 3的EST片段属于未知的新片段 ,表明这是一类重要的新兴基因资源库 (期特异性EST库 ) .这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法 ,解决了胚胎研究材料受限的问题 ,在时间上更加精确 ,更符合胚胎发育的规律 ,也能够更加准确地反映出一些克隆胚胎的异常表型 ,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎再程序化基因表达的一种有效手段 . 展开更多
关键词 基因活化 克隆 胚胎 CDNA文库
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干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片SSH文库构建及CkWRKY1基因克隆 被引量:20
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作者 杨杞 张涛 +6 位作者 王颖 李高 尹佳佳 韩晓敏 齐力旺 李国婧 王瑞刚 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第7期62-68,共7页
为研究柠条锦鸡儿抗旱的分子机制,挖掘干旱响应相关基因,成功构建干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片的抑制性差减杂交(SSH)文库,获得1286条高质量的EST序列,平均长度475bp,拼接得到Unigenes645条。对这些Unigenes进行Blast比对注释后发现很多抗... 为研究柠条锦鸡儿抗旱的分子机制,挖掘干旱响应相关基因,成功构建干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片的抑制性差减杂交(SSH)文库,获得1286条高质量的EST序列,平均长度475bp,拼接得到Unigenes645条。对这些Unigenes进行Blast比对注释后发现很多抗旱相关基因,例如LEA蛋白、DHN蛋白编码基因,MYB、bZIP、WRKY、NAC和bHLH转录因子等。通过RACE技术克隆其中1个WRKY转录因子的cDNA全长,命名为CkWRKY1,GenBank登录号为JX987095。CkWRKY1编码330个氨基酸的蛋白质,氨基酸序列中有1个"WRKYGQK"的WRKY转录因子家族保守序列,属于第Ⅱ类WRKY转录因子。利用实时荧光定量PCR技术检测发现,CkWRKY1基因在干旱处理后mRNA的表达水平明显上升,预示该转录因子可能与柠条锦鸡儿抗旱的分子机制相关。 展开更多
关键词 柠条锦鸡儿 干旱胁迫 抑制性差减杂交(SSH)文库 WRKY 基因克隆
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保护性免疫血清及单克隆抗体筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 被引量:25
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作者 沈际佳 蒋作君 +2 位作者 余新炳 汪学龙 吴忠道 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期31-33,共3页
目的 为寻找有效的抗日本血吸虫感染疫苗候选抗原分子。方法 用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,再用同法免疫鼠脾细胞制备的单克隆抗体对所获阳性克隆进行再筛选 ,并对免疫筛选的阳性克隆的cDNA插入片段进... 目的 为寻找有效的抗日本血吸虫感染疫苗候选抗原分子。方法 用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,再用同法免疫鼠脾细胞制备的单克隆抗体对所获阳性克隆进行再筛选 ,并对免疫筛选的阳性克隆的cDNA插入片段进行PCR扩增。结果 兔免疫血清确定 12个阳性克隆 ,其中 6个克隆与 2株以上的单抗呈阳性反应 :PCR扩增cDNA插入片段大小约 40 0bp~ 1 4kb左右。结论 已筛选到与致弱尾蚴免疫兔血清及同法免疫制备单抗产生特异反应的阳性克隆 ,获得一批编码可能具有保护性作用的日本血吸虫抗原的基因片段。 展开更多
关键词 日本血吸虫 CDNA文库 克隆抗体
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石斑鱼卵巢cDNA文库构建及脂肪酸结合蛋白克隆 被引量:10
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作者 张勇 张为民 +2 位作者 李欣 田静 林浩然 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期66-69,共4页
应用SMARTTM技术构建了斜带石斑鱼Epinephelus coioides卵巢cDNA文库.所构建的cDNA文库滴度为4.5×106pfu/mL,重组率为99%,扩增后文库的滴度为1.2×1010 pfu/mL.把phagemid转化为质粒后,随机挑选60个阳性克隆进行酶切鉴定和测序... 应用SMARTTM技术构建了斜带石斑鱼Epinephelus coioides卵巢cDNA文库.所构建的cDNA文库滴度为4.5×106pfu/mL,重组率为99%,扩增后文库的滴度为1.2×1010 pfu/mL.把phagemid转化为质粒后,随机挑选60个阳性克隆进行酶切鉴定和测序.酶切结果表明:插入片段长度均在500~3 000bp之间.测序结果经过生物信息学分析,发现其中一个克隆为脂肪酸结合蛋白(FABP)基因全长,并与人肝型(L)脂肪酸结合蛋白同源性最高,为70%. 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 卵巢 CDNA文库 脂肪酸结合蛋白 基因克隆 鲈形目 酶切鉴定
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应用16S rDNA克隆文库技术解析四川泡菜发酵过程中的细菌多样性 被引量:9
9
作者 张安 梁会朋 +2 位作者 孟霞 范娟 张文学 《中国调味品》 CAS 北大核心 2017年第2期1-6,共6页
采用构建16SrDNA基因文库的方法,对四川泡菜发酵过程中细菌多样性进行了研究。结果表明:所得到的1190个克隆子分布于17个类群,泡菜发酵1天细菌多样性最高,发酵31天细菌多样性最低。发酵前期的绝对优势菌为Pseudomonas(35.0%),Vibrio(56.... 采用构建16SrDNA基因文库的方法,对四川泡菜发酵过程中细菌多样性进行了研究。结果表明:所得到的1190个克隆子分布于17个类群,泡菜发酵1天细菌多样性最高,发酵31天细菌多样性最低。发酵前期的绝对优势菌为Pseudomonas(35.0%),Vibrio(56.9%),主要优势菌为Lactobacillus(29.5%),Acinetobacter(15.4%),Halomonas(14.3%),Sphingobacterium(12.9%);发酵中期的绝对优势菌为Lactobacillus(94.0%),主要优势菌为Vibrio(12.8%);发酵后期的绝对优势菌为Lactobacillus(50.3%),主要优势菌为Vibrio(19.8%),Halomonas(13.0%),Arcobacter(11.1%),此结果揭示了四川泡菜发酵过程中的细菌多样性,可为四川泡菜的基础研究提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 四川泡菜 16S RDNA 克隆文库 细菌多样性
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16S rDNA克隆文库方法对制药废水处理系统中微生物多样性的研究 被引量:11
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作者 徐成斌 孟雪莲 +4 位作者 马溪平 张利红 李法云 付保荣 惠秀娟 《生态环境学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期1236-1240,共5页
采用分子生物学构建16SrDNA克隆文库的方法对制药废水交替流生物反应器内的微生物群落进行了多样性研究,该反应器对CODcr、氨氮、石油类化合物以及多种特殊污染物均有较高的去除效率。代表序列的BLAST比对结果表明微生物群落具有高度多... 采用分子生物学构建16SrDNA克隆文库的方法对制药废水交替流生物反应器内的微生物群落进行了多样性研究,该反应器对CODcr、氨氮、石油类化合物以及多种特殊污染物均有较高的去除效率。代表序列的BLAST比对结果表明微生物群落具有高度多样性,优势菌群为Proteobacteria,占78.6%。微生物群落分属7个不同纲,优势顺序为Alphaproteobacteria(39.8%),Betaproteobacteria(23.5%),Gammaproteobacteria(14.3%),Chlorobi1(6.3%),Firmicutes(4.1%),Flavobacteria(1.0%),Deltaproteobacteria(1.0%)。使用VectorNTISuite6.0软件对50个OTU的代表序列和NCBI基因库中最相近的已知细菌16SrDNA序列绘制系统进化树,表明克隆子与已知菌之间的基因系统进化关系。 展开更多
关键词 制药废水 微生物多样性 16SrDNA克隆文库
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花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析 被引量:5
11
作者 黄海 张勇 +5 位作者 刘晓春 尹绍武 杨丽萍 朱培 齐兴柱 林浩然 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期214-221,共8页
以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库... 以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素(mGnRH和cGnRH-II)cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRHcDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—22位氨基酸)、mGnRH十肽(23—32位氨基酸)、一个三肽裂解位点(33—35位氨基酸)和56个氨基酸的GnRH相关肽(36—91位氨基酸);花鳗鲡cGnRH-IIcDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—24位氨基酸)、cGnRH-II十肽(25—34位氨基酸)、一个三肽裂解位点(34—36位氨基酸)和50个氨基酸的GnRH相关肽(37—87位氨基酸)。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-IIcDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%—78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低(63%—67%)。采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。 展开更多
关键词 花鳗鲡 CDNA文库 促性腺激素释放激素 克隆 基因表达
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用16S rDNA克隆文库法分析患病刺参幼苗的菌群结构 被引量:4
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作者 王轶南 王俊杰 +4 位作者 王姣姣 刘志敏 于卓 丁君 常亚青 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期205-211,共7页
采用16S rDNA克隆文库法对某刺参养殖场患病刺参Apostichopus japonicus幼苗(体长为3~5 cm)表皮的菌群结构进行分析。结果表明:化皮参苗病灶组织和未明显化皮参苗表皮菌群均由γ-变形菌纲、β-变形菌纲和α-变形菌纲组成,优势菌为γ... 采用16S rDNA克隆文库法对某刺参养殖场患病刺参Apostichopus japonicus幼苗(体长为3~5 cm)表皮的菌群结构进行分析。结果表明:化皮参苗病灶组织和未明显化皮参苗表皮菌群均由γ-变形菌纲、β-变形菌纲和α-变形菌纲组成,优势菌为γ-变形菌纲,主要包括志贺氏菌Shigella sp.、不动杆菌Acinetobacter sp.和假单胞菌Pseudomonas sp.;化皮参苗病灶组织中志贺氏菌、不动杆菌和假单胞菌比例分别为49%、17%和5%,未明显化皮参苗表皮中3类菌的比例分别为20%、26%、9%。将该养殖场育苗池海水作为对照并进行菌群结构分析,结果显示,水中菌群同样由γ-变形菌纲、β-变形菌纲和α-变形菌纲组成,优势菌也为γ-变形菌纲,主要包含弧菌Vibrio sp.(75%)与志贺氏菌(12%)。此外,对化皮参苗病灶处进行细菌分离培养,得到一株优势菌,经16S rDNA初步鉴定为弧菌。研究表明,采用16S rDNA克隆文库法所得结果与传统的病原分离培养法存在差异。 展开更多
关键词 刺参 化皮 菌落结构 16S rDNA克隆文库
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利用SMART技术构建疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库及芋螺毒素新基因的克隆 被引量:4
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作者 李宝珠 高炳淼 +4 位作者 吴勇 于津鹏 吴潇洒 罗素兰 长孙东亭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期484-488,共5页
利用RNA 5'末端移动反转录(switching mechanism at 5'end RNA transcription,SMART)技术构建及鉴定疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库,克隆新型芋螺毒素基因.提取疣缟芋螺毒管总RNA,用RT-PC反转录成单链cDNA(single-stranded cDNA,ss... 利用RNA 5'末端移动反转录(switching mechanism at 5'end RNA transcription,SMART)技术构建及鉴定疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库,克隆新型芋螺毒素基因.提取疣缟芋螺毒管总RNA,用RT-PC反转录成单链cDNA(single-stranded cDNA,ss-cDNA),长距离PCR(long-distance PCR,LD-PCR)扩增合成双链cDNA(double-stranded cDNA,ds-cDNA),依次用蛋白酶K和SfiⅠ酶进行酶切孵育,用CHROMA SPIN-400柱进行分级分离.得到的ds-cDNA与λTripIE×2噬菌体载体体外连接并体外包装,感染大肠杆菌E.coli XL1-blue,测定原始文库滴度和重组率.进行文库扩增,测定扩增文库滴度.用PCR鉴定插入cDNA片段的大小,构建的疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体原始文库滴度为1.47×106pfu/mL,重组率为90.72%,扩增文库的滴度为4.07×108pfu/mL,插入cDNA片段为200~1 200 bp.利用SMART技术成功构建了疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库并克隆出新型芋螺毒素基因,为芋螺毒素基因的筛选和鉴定奠定了基础. 展开更多
关键词 疣缟芋螺 噬菌体 CDNA文库 SMART技术 基因克隆
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嗜麦芽寡养单胞菌D2株基因组文库的构建及部分克隆的分析 被引量:5
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作者 杨丽 闫志勇 +5 位作者 王斌 辛晓妮 宋旭霞 赵巍 钱冬萌 苏洁 《医学研究生学报》 CAS 2010年第4期369-371,共3页
目的自双齿围沙蚕消化道内分离出的嗜麦芽寡养单胞菌D2株经前期研究发现其具有明显胞外分泌可溶性纤溶酶、蛋白酶等活性。文中构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株基因组文库,了解其基因背景。方法用Sau3AⅠ酶切D2株基因组DNA,回收0.2~2kb的DNA片... 目的自双齿围沙蚕消化道内分离出的嗜麦芽寡养单胞菌D2株经前期研究发现其具有明显胞外分泌可溶性纤溶酶、蛋白酶等活性。文中构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株基因组文库,了解其基因背景。方法用Sau3AⅠ酶切D2株基因组DNA,回收0.2~2kb的DNA片段,连接至pMD18-T质粒载体,转化大肠杆菌JM109,在含有Amp的LB平板上筛选重组子,酶切鉴定后建库保存;随机挑取15个酶切鉴定正确的阳性克隆测序,在网络数据库中进行BLASTX分析。结果共得到转化子约1124个,符合建库要求;经测序证实获得了D2株碱性磷酸酶、AMP-依赖性合成酶、荧光素样单加氧酶等蛋白的结构基因序列。结论成功构建了嗜麦芽寡养单胞菌D2株的基因组文库,为进一步了解该菌的背景及筛选其功能基因奠定基础。 展开更多
关键词 嗜麦芽寡养单胞菌 基因组文库 克隆 序列分析
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人源性抗HBsAg抗体Fab段噬菌体呈现文库的构建、筛选及阳性克隆核苷酸序列测定 被引量:6
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作者 高辉 杨安钢 +2 位作者 高磊 任向荣 余宙耀 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期308-311,共4页
目的 :构建一个经HBsAg主动免疫的人lgG1抗体噬菌体展示文库 ,通过特异的淘筛 (panning)获得与HBsAg有较高亲和力的Fab抗体 ,并测定其编码序列。方法 :从一经乙肝疫苗免疫的自愿者的外周血分离淋巴细胞提取RNA ,逆转录合成cDNA。PCR扩... 目的 :构建一个经HBsAg主动免疫的人lgG1抗体噬菌体展示文库 ,通过特异的淘筛 (panning)获得与HBsAg有较高亲和力的Fab抗体 ,并测定其编码序列。方法 :从一经乙肝疫苗免疫的自愿者的外周血分离淋巴细胞提取RNA ,逆转录合成cDNA。PCR扩增重链Fd和κ轻链cDNA。依次将PCR产物克隆进载体pComb3H相应的位点 ,构建成噬菌体呈现库 ,并以HBsAg包被的 96孔板对抗体库进行 3轮淘筛 ,将所获克隆分别与HBsAg进行ELISA反应 ,挑取显色大于对照 2 0倍以上的阳性克隆进行DNA测序。结果 :lgG1的Fd段和κ轻链cDNA得到扩增 ,构建了一实际库容量为 1 8× 10 5 的噬菌体呈现文库。通过特异性淘筛 ,获得与HBsAg有较高新合力的 3株Fab抗体并测定其编码序列。DNA序列测定结果表明 ,3株抗体中两株的Fd段完全一样 ,且 3株的轻链完全一样。结论 :成功构建了一个经HBsAg抗原免疫的人源抗体Fab段噬菌体抗体库 ,筛选得到了 3株特异性抗体的Fab片段。 展开更多
关键词 乙型肝炎抗原 抗体 分子克隆 DNA 噬菌体呈现文库
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长果种黄麻单染色体未克隆DNA文库的构建 被引量:4
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作者 谢小芳 黄代青 吴为人 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1184-1187,共4页
单染色体分离、扩增和克隆技术对植物的遗传研究(尤其对那些遗传研究基础薄弱的植物而言)具有重要的应用价值。本研究用玻璃针显微分离法成功分离出长果种黄麻(Corchorus olitoriusL.)品种闽引一号的单染色体80条。用LAM-PCR或DOP-... 单染色体分离、扩增和克隆技术对植物的遗传研究(尤其对那些遗传研究基础薄弱的植物而言)具有重要的应用价值。本研究用玻璃针显微分离法成功分离出长果种黄麻(Corchorus olitoriusL.)品种闽引一号的单染色体80条。用LAM-PCR或DOP-PCR对单染色体DNA进行两轮扩增,所包含的DNA片段长度分别为250-2000bp和100-600bp。共建立了50个单染色体未克隆文库。Southern杂交表明,获得的扩增片段确实来自黄麻基因组。对单染色体DNA文库应用的有关问题进行了讨论。 展开更多
关键词 黄麻 单染色体 分离 克隆文库
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圈养老年大熊猫肠道菌群16S rDNA克隆文库的建立 被引量:4
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作者 王晓艳 袁听 +6 位作者 廖虹 罗永久 何廷美 王承东 刘小敏 吴虹林 彭广能 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1402-1408,共7页
为了研究老年大熊猫肠道菌群的构成,本试验对3只圈养老年大熊猫粪便细菌构建16SrDNA克隆文库,采用限制性内切酶HinfⅠ、MspⅠ对其进行限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)及测序分析。结果显示,老年... 为了研究老年大熊猫肠道菌群的构成,本试验对3只圈养老年大熊猫粪便细菌构建16SrDNA克隆文库,采用限制性内切酶HinfⅠ、MspⅠ对其进行限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)及测序分析。结果显示,老年大熊猫肠道细菌主要由变形菌门和厚壁菌门组成;变形菌门中又以大肠埃希氏菌属为主,其次为假单胞菌属、志贺氏菌属、气单胞菌属;而厚壁菌门中以链球菌属为主,其次为魏斯氏菌属、梭菌属;此外还发现一定比例的未培养细菌。本试验第一次建立了较丰富的老年大熊猫肠道菌群的克隆文库,为分析比较各年龄层大熊猫的肠道菌群结构的异同提供了参照,也为合理饲喂老年大熊猫,保障老年大熊猫的健康提供重要信息。 展开更多
关键词 圈养 老年大熊猫 肠道菌群 16SrDNA克隆文库
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一种获得大片段克隆的SMART全长cDNA文库构建方法 被引量:6
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作者 董志敏 李英慧 +3 位作者 张宝石 关荣霞 常汝镇 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期223-227,共5页
针对SMART方法中PCR扩增削减了大片段基因所占比例,使文库中很难获得大片段克隆的问题,进行了方法改进。在原始SMART方法的基础上,以大豆叶片为材料,通过琼脂糖凝胶分级分离技术,将PCR扩增后合成的dscDNA分成3个等级,分别与载体... 针对SMART方法中PCR扩增削减了大片段基因所占比例,使文库中很难获得大片段克隆的问题,进行了方法改进。在原始SMART方法的基础上,以大豆叶片为材料,通过琼脂糖凝胶分级分离技术,将PCR扩增后合成的dscDNA分成3个等级,分别与载体连接、转化,构建相应亚库,每个亚库容量在1.0×10^6左右,重组率接近99%。改进方法所建文库的平均全长率53.6%,与改进前的(52.2%)相当。插入片段范围为0.5~3.5kb,最大插入片断长度比改进前的提高1.5kb。该方法提高了SMART方法中大片段克隆的获得率,为大豆功能基因组学研究提供了保障。 展开更多
关键词 改进的SMART法 扩增后cDNA分级分离 全长CDNA文库 大片段克隆
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猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆 被引量:6
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作者 景志忠 郭爱疆 +2 位作者 海岗 宗瑞谦 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期391-396,共6页
研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段1... 研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。 展开更多
关键词 猪带绦虫 六钩蚴 免疫原 cDNA文库 克隆 构建 CDNA表达文库 基因组DNA 发育阶段 质粒表达载体 特异性引物 BLAST 基因家族 快速筛选 库容量 代表性 重组率 转录本
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抗弓形虫单克隆抗体免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库 被引量:4
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作者 吴翔 蒋立平 +3 位作者 舒衡平 蔡力汀 张祖萍 沈杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期288-290,共3页
目的 探讨自制的抗弓形虫单克隆抗体 (McAb)相应抗原的分子结构机制 ,为弓形虫疫苗的研制寻找有效抗原提供依据。方法 用自制的抗弓形虫速殖子的McAb免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库 ,对阳性克隆cDNA插入片段进行PCR鉴定并测序分析。结... 目的 探讨自制的抗弓形虫单克隆抗体 (McAb)相应抗原的分子结构机制 ,为弓形虫疫苗的研制寻找有效抗原提供依据。方法 用自制的抗弓形虫速殖子的McAb免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库 ,对阳性克隆cDNA插入片段进行PCR鉴定并测序分析。结果  2个McAb第一轮分别获得 6个和 3个阳性克隆。分别进行第 2轮筛选 ,选取其中持续阳性最强的2个进行体外剪切 ,提取质粒DNA并进行PCR扩增和序列测定 ,经核苷酸同源性比较 ,可能为 2个新基因 ,其中 7C3-C3筛选的基因命名为WX2 (GenBank登录号为 :AY2 38892 ) ,2B9-G1筛选的基因命名为WX(GenBank登录号为 :AY2 0 8994 ) ,并用蛋白质分析软件对新基因编码的蛋白质结构和功能进行预测。结论 自制的具有一定保护性效果的McAb免疫筛选获得的阳性克隆插入基因片断的表达产物 ,可能具有抵抗弓形虫感染的作用 ,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 弓形虫 克隆抗体 免疫筛选 弓形虫速殖子 CDNA文库
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