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EGF与bFGF单独及联合应用对原代培养的兔角膜缘干细胞克隆形成率的影响 被引量：2
1
作者 崔馨 贺翔鸽 +1 位作者 赵玲 宗兆文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第20期1823-1825,共3页
目的　了解单独及联合应用表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor ,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (b fibrob lastgrowthfactor ,bFGF)对原代培养的兔角膜缘干细胞体外增殖的促进作用。方法　进行兔角膜缘干细胞原代培养 ,用克隆形成率... 目的　了解单独及联合应用表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor ,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (b fibrob lastgrowthfactor ,bFGF)对原代培养的兔角膜缘干细胞体外增殖的促进作用。方法　进行兔角膜缘干细胞原代培养 ,用克隆形成率和蛋白质免疫印迹方法检测单独及联合应用不同质量浓度EGF与bFGF对干细胞增殖力的影响。结果　角膜缘干细胞在本培养条件下能够正常生长。单独应用时 ,质量浓度为 10ng/ml的EGF和 2 0ng/ml的bFGF对干细胞的促增殖作用最强 (P <0 0 1) ,10ng/ml的EGF与 2 0ng/ml的bFGF联合应用可达到最佳的促干细胞增殖作用。蛋白质免疫印迹检测也得到了相符的结果。结论　体外单独及联合应用EGF与bFGF对原代培养的兔角膜缘干细胞的增殖能力有明显的促进作用 ,为提供大量的角膜缘干细胞以治疗眼表疾病提供了实验基础。 展开更多
关键词 角膜缘干细胞 EGF BFGF 克隆形成率 蛋白质免疫印迹
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MiR-886-5p对宫颈鳞状上皮细胞克隆形成和宫颈癌细胞化学药物治疗的影响 被引量：2
2
作者 李晶华 王明 +1 位作者 张瑞 冯力民 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期929-935,共7页
目的探讨microRNA-886-5p(MiR-886-5p)对宫颈鳞状上皮细胞克隆形成及宫颈癌细胞化学药物治疗(以下简称化疗)的影响。方法应用基因芯片技术检测宫颈癌及其癌周组织microRNA的表达,筛选出MiR-886-5p在宫颈癌组织中高表达。生物信息系技术... 目的探讨microRNA-886-5p(MiR-886-5p)对宫颈鳞状上皮细胞克隆形成及宫颈癌细胞化学药物治疗(以下简称化疗)的影响。方法应用基因芯片技术检测宫颈癌及其癌周组织microRNA的表达,筛选出MiR-886-5p在宫颈癌组织中高表达。生物信息系技术分析发现miRNA-886-5p靶向P53通路中多个基因的表达。用MiR-886-5p mimics和带有GFP标签的MiR-886-5p过表达载体稳定转染高危型人乳头瘤病毒(human papilomavirus,HPV16)阳性的永生化人宫颈鳞状上皮细胞H8细胞,应用Western blotting方法检测P53和P14的蛋白表达情况;应用平板克隆形成技术,观察对细胞克隆形成的影响。在宫颈癌Si Ha细胞中,加入化疗药物紫杉醇和VP16后,应用real time RT-PCR技术,检测MiR-886-5p的表达情况。结果过表达MiR-886-5p后,H8细胞的克隆形成率明显高于阴性对照组,并且降调P53通路中P14和P53蛋白的表达。加入化疗药紫杉醇和VP16后,Si Ha细胞中MiR-886-5p表达明显升高。结论 MiR-886-5p与宫颈鳞状细胞增生相关,它降调P14和P53两种蛋白的表达,且与宫颈癌细胞化疗抵抗相关。 展开更多
关键词 宫颈鳞状上皮细胞 宫颈癌 MiR-886-5p 克隆形成 化学治疗
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Rac1-siRNA表达质粒的构建及Rac1对SW480细胞单克隆形成的影响
3
作者 南清振 高蕾 +2 位作者 肖冰 张振书 姜泊 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1339-1342,共4页
目的构建针对Rac1的siRNA表达载体,并观察其对大肠癌SW480细胞中Rac1蛋白表达的抑制作用,同时研究Rac1蛋白表达抑制后细胞在体外软琼脂糖中单克隆形成情况。方法化学合成用于产生针对Rac1的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入... 目的构建针对Rac1的siRNA表达载体,并观察其对大肠癌SW480细胞中Rac1蛋白表达的抑制作用,同时研究Rac1蛋白表达抑制后细胞在体外软琼脂糖中单克隆形成情况。方法化学合成用于产生针对Rac1的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSUPER载体的H1启动子下游。重组载体经限制性酶切和测序。把构建的载体转染大肠癌细胞系SW480,观察其对Rac1蛋白表达的干扰作用,软琼脂糖体外克隆形成实验研究SW480抑制Rac1蛋白表达后的效果。结果限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对Rac1的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA在SW480细胞中能够有效的下调Rac1蛋白的表达。体外软琼脂单克隆形成实验显示,抑制Rac1蛋白表达后,形成的单克隆数目明显减少,直径也明显缩小。结论成功构建了针对Rac1的发卡状RNA表达载体;体外软琼脂单克隆实验表明Rac1蛋白对SW480细胞克隆形成数目及大小有明显影响,说明Rac1蛋白在大肠癌的体外生长过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 RAC1 RNA干扰 软琼脂单克隆形成 SW480细胞
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二氯乙酸对膀胱癌细胞株T24克隆形成、侵袭和迁移的影响 被引量：4
4
作者 谢智彬 付伟金 +3 位作者 陆春宇 赵东 徐艳圳 吴华裕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期16-20,25,共6页
目的探讨二氯乙酸(DCA)对膀胱癌T24细胞株的克隆形成、侵袭和迁移的影响并探讨其相关机制。方法将膀胱癌T24细胞随机分成两组,实验组分别以5、10、20 mmol/L DCA处理,对照组以等量0.1%二甲基亚砜处理;用Giemsa染色检测T24细胞克隆形成,... 目的探讨二氯乙酸(DCA)对膀胱癌T24细胞株的克隆形成、侵袭和迁移的影响并探讨其相关机制。方法将膀胱癌T24细胞随机分成两组,实验组分别以5、10、20 mmol/L DCA处理,对照组以等量0.1%二甲基亚砜处理;用Giemsa染色检测T24细胞克隆形成,细胞划痕以及Transwell实验检测T24细胞的迁移侵袭能力;应用Real time PCR及Western blot检测T24细胞内上皮间质转化(EMT)相关标记物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、Snail及Slug蛋白表达。结果细胞克隆实验显示,与对照组比较,实验组随DCA浓度增加,显著减少T24细胞的克隆形成(P<0.01);细胞划痕实验结果显示实验组随DCA浓度增加及处理时间延长,T24细胞的迁移能力下降(P<0.01);Transwell实验结果示与对照组比较,实验组随DCA浓度增加T24细胞的迁移力降低(P<0.01);经过DCA作用48 h后,Real time PCR结果显示:T24细胞中E-cadherin的m RNA明显高于对照组(P<0.05),而Snail、Slug、vi-mentin和N-cadherin的m RNA表达水平明显低于对照组(P<0.05)。Western blot结果显示:T24细胞中E-cadherin的蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而Snail、Slug、vimentin和N-cadherin的蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论 DCA可抑制膀胱癌T24细胞的克隆形成、侵袭和迁移,其机制可能通过下调核转录因子Snail和Slug的表达,抑制T24细胞发生上皮间质转化。 展开更多
关键词 二氯乙酸 膀胱癌 克隆形成 侵袭 迁移 上皮间质转化
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异丙酚对卵巢癌SKOV3细胞克隆形成、侵袭、EMT和miR-143表达的影响 被引量：7
5
作者 田文珺 刘士佳 +1 位作者 刘晓明 吴越 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2019年第4期607-610,共4页
目的:探讨异丙酚对卵巢癌SKOV3细胞克隆形成、侵袭、EMT和miR-143表达的影响。方法:以0.0、2.5、5.0和10.0μmol/L异丙酚刺激SKOV3细胞48h后,采用软琼脂集落形成实验检测细胞的克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,Wester... 目的:探讨异丙酚对卵巢癌SKOV3细胞克隆形成、侵袭、EMT和miR-143表达的影响。方法:以0.0、2.5、5.0和10.0μmol/L异丙酚刺激SKOV3细胞48h后,采用软琼脂集落形成实验检测细胞的克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,Westernblot检测EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-143的表达。脂质体法转染miR-143抑制剂后,观察下调miR-143表达对异丙酚刺激的SKOV3细胞的影响。结果:异丙酚能够呈浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的克隆形成能力、侵袭能力和Vimentin蛋白的表达,促进E-cadherin蛋白和miR-143的表达(P<0.05)。转染miR-143抑制剂后,异丙酚对SKOV3细胞的上述作用明显逆转(P<0.05)。结论:异丙酚可能通过上调miR-143表达抑制SKOV3细胞克隆形成、侵袭和EMT进程,发挥抑制癌细胞转移的作用。 展开更多
关键词 异丙酚 MIR-143 克隆形成 侵袭 上皮间质转化
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内皮克隆形成细胞的研究进展 被引量：3
6
作者 吴晓欣 周建大 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期564-568,共5页
内皮克隆形成细胞(endothelial colony-forming cells,ECFCs)是一种有别于经典内皮祖细胞的具有强大血管新生功能的晚期内皮祖细胞。ECFCs在心、肺、脑的缺血修复中具有强大的血管生成潜能,在缺血肢体及损伤骨组织的修复中能明显诱导血... 内皮克隆形成细胞(endothelial colony-forming cells,ECFCs)是一种有别于经典内皮祖细胞的具有强大血管新生功能的晚期内皮祖细胞。ECFCs在心、肺、脑的缺血修复中具有强大的血管生成潜能,在缺血肢体及损伤骨组织的修复中能明显诱导血管相关因子的表达并促进血管新生。ECFCs具有强大的肿瘤归巢效应,与肿瘤的发生发展及预后关系密切,可为血管再生研究、肿瘤治疗、组织再生工程等领域提供新的方向。 展开更多
关键词 内皮克隆形成细胞 血管再生 损伤修复 肿瘤 组织工程
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去除IgG的系统性红斑狼疮血小板减少血清对脐带血巨核细胞克隆形成单位生成的影响 被引量：1
7
作者 袁国龙 徐亮 +3 位作者 李志 陈兰芳 宣丹 陆进明 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第10期1163-1167,共5页
目的:研究去除IgG的系统性红斑狼疮(SLE)合并血小板减少患者的血清,对正常脐带血巨核细胞克隆形成单位(CFU-MK)生成的影响。方法:建立正常人脐带血单个核细胞在血小板生成素(TPO)等作用下,向CFU-MK分化的半固体培养体系;亲和层析去除SL... 目的:研究去除IgG的系统性红斑狼疮(SLE)合并血小板减少患者的血清,对正常脐带血巨核细胞克隆形成单位(CFU-MK)生成的影响。方法:建立正常人脐带血单个核细胞在血小板生成素(TPO)等作用下,向CFU-MK分化的半固体培养体系;亲和层析去除SLE血小板减少患者血清中的IgG组分并加入培养体系,研究干预前后CFU-MK集落形成的数量和形态学差异。结果:正常脐带血(n=10)CFU-MK集落数为(69.3±19.4)个/片,多为中～大集落;加入SLE血小板减少患者血清(n=4)后,集落数为(58.5±32.5)个/片,与正常相比变化相近(P>0.05),但其中一例患者减少为29个/片;去除血清IgG组分后(n=4),CFU-MK为(73.0±28.3)个/片,与正常相比变化相近(P>0.05);其中一例加入血清后减少为35个/片,去除IgG后仍为31个/片,CFU-MK生成抑制未解除。形态学上,加患者血清后大集落数由正常对照的(37.4±10.9)个/片显著减少为(9.0±8.8)个/片(P<0.05);去除IgG后,大集落数亦显著减少为(8.3±3.9)个/片(P<0.05)。而加入患者血清或去除IgG后,小集落相对数量比正常对照显著增多(P<0.05)。结论:SLE血小板减少患者血清中可能存在阻碍CFU-MK分化发育的抑制物,这种抑制物可能不依赖于血清IgG组分。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 血小板减少 巨核细胞克隆形成单位
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内皮克隆形成细胞条件培养基对人真皮成纤维细胞生物学作用的影响 被引量：1
8
作者 王布霖 吴燕虹 +2 位作者 王玉芝 郭晓瑞 李勤 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期862-866,共5页
目的:探讨内皮克隆形成细胞条件培养基(ECFCs-CM)对人真皮成纤维细胞(HDFs)生物学作用的影响。方法:从人脐带血中分离内皮克隆形成细胞(ECFCs)并鉴定;采用抗体芯片检测ECFCs-CM中细胞因子表达谱;将ECFCs-CM作用于HDFs,EBM-2作为对照,采... 目的:探讨内皮克隆形成细胞条件培养基(ECFCs-CM)对人真皮成纤维细胞(HDFs)生物学作用的影响。方法:从人脐带血中分离内皮克隆形成细胞(ECFCs)并鉴定;采用抗体芯片检测ECFCs-CM中细胞因子表达谱;将ECFCs-CM作用于HDFs,EBM-2作为对照,采用CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及凋亡情况。结果:原代培养细胞符合ECFCs的特征;ECFCs-CM相对高表达PDGF-BB、EGF等细胞因子;实验组HDFs增殖能力和迁移能力均高于对照组,且在血清饥饿环境下实验组HDFs凋亡率低于对照组。结论:ECFCs-CM可促进HDFs增殖和迁移,并可抑制其在血清饥饿环境下的凋亡。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 内皮克隆形成细胞 条件培养基 成纤维细胞 创面愈合
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ZBTB3表达对胶质母细胞瘤细胞增殖和克隆形成的调控
9
作者 王伟民 赵晨卉 +6 位作者 倪思琦 何庆玲 阮玉婷 吴宁霞 张婧 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第3期297-303,共7页
目的:检查人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)组织和细胞系中ZBTB3的表达,并探讨ZBTB3对GBM细胞增殖和克隆形成的影响及其调控机制。方法:通过GEPIA2数据库分析GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达情况。RT-PCR、qPCR和Western blot检测GBM细胞... 目的:检查人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)组织和细胞系中ZBTB3的表达,并探讨ZBTB3对GBM细胞增殖和克隆形成的影响及其调控机制。方法:通过GEPIA2数据库分析GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达情况。RT-PCR、qPCR和Western blot检测GBM细胞系(U251、U373、U87)中ZBTB3的mRNA和蛋白表达水平,筛选出ZBTB3表达最高的U87细胞。CCK-8和克隆形成实验检测沉默ZBTB3基因对U87细胞增殖和克隆形成的影响。用p38MAPK、AMPK、Akt1抑制剂处理U87细胞后,Western blot检测p38MAPK、AMPK、Akt1的磷酸化水平,RT-PCR、qPCR和Western blot测定ZBTB3的mRNA和蛋白表达水平,CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成。结果:GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达显著高于正常组织。U251、U373和U87细胞中均可见ZBTB3的表达,其中U87细胞表达最高。沉默ZBTB3基因能明显抑制U87细胞的增殖和克隆形成。抑制AMPK既能显著降低U87细胞ZBTB3的表达水平,又可明显减弱U87细胞增殖和克隆形成。结论:GBM组织和细胞系中ZBTB3的表达显著上调,GBM细胞中AMPK活化并上调ZBTB3基因的表达,促进GBM细胞的增殖和克隆形成。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 ZBTB3 AMPK 增殖 克隆形成
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泛素E3连接酶对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成能力的影响 被引量：1
10
作者 纪超 马炬雷 舒鹏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期194-202,共9页
目的明确泛素E3连接酶(DTL)对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成的影响,并探讨其机制。方法提取34例多发性骨髓瘤患者骨髓中CD138+细胞后,以14例健康志愿者骨髓单个核细胞为对照,实时定量PCR检测DTL在mRNA水平的变化,并选取12例骨髓瘤患者... 目的明确泛素E3连接酶(DTL)对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成的影响,并探讨其机制。方法提取34例多发性骨髓瘤患者骨髓中CD138+细胞后,以14例健康志愿者骨髓单个核细胞为对照,实时定量PCR检测DTL在mRNA水平的变化,并选取12例骨髓瘤患者和2例对照,Westernblot检测DTL在蛋白水平的变化。同时,人骨髓瘤细胞系RPMI8226分为对照(CON)与DTL敲低(DTL-shRNA)组,感染10感染复数CON与DTL-shRNA病毒48h,使用流式细胞仪确认慢病毒的感染效率、实时定量基因扩增荧光检测系统和Westernblot确认在mRNA和蛋白水平的敲低效率,使用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞在随后的0、24、48、72、96h的细胞数量变化,将CON与DTL-shRNA细胞培养于半固体培养基中,10d后倒置相差显微镜观察大于50个细胞的克隆数量,并使用膜联蛋白V/碘化丙啶双染法检测凋亡的变化,碘化丙啶染色检测细胞周期的变化。使用Westernblot检测核因子-κB(NF-κB)通路中P65和抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的改变、凝胶迁移实验检测NF-κB转录活性的变化。结果健康志愿者骨髓单个核细胞与骨髓瘤患者CD138+细胞中,DTL的表达量分别为1.00±0.12和9.36±3.71(t=3.65,P=0.0024),DTL在骨髓瘤CD138+细胞中蛋白水平同样呈现过表达。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA病毒48h后,绿色荧光蛋白阳性细胞的比率为90%,CON组与DTL-[JP2]shRNA组DTL在mRNA水平相对表达量分别为1.00±0.01和0.21±0.04(t=33.19,P<0.0001),在蛋白水平DTL的相对表达量分别为0.52±0.13和0.11±0.02(t=5.399,P=0.0057)。CCK8检测CON组与DTL-shRNA组细胞增殖后显示0、24、48、72、96h的细胞增殖倍数分别为1.00±0.03比1.00±0.02、2.19±0.28比1.47±0.13、3.50±0.14比2.24±0.19、5.43±0.41比3.08±0.14、7.42±0.17比4.29±013(F=24.58,P=0.001)。检测CON组与DTL-shRNA组的克隆形成后显示,DTL-shRNA组大于50个细胞的克隆不可见,CON与DTL-shRNA克隆形成数量分别为76±4比0(P<0.01),在细胞周期中,CON与DTL-shRNA组G1期细胞比例分别为(28.61±8.64)%比(57.25±10.37)%(t=3.675,P=0.0213),细胞凋亡中,CON与DTL-shRNA组膜联蛋白V+细胞比例为(3.21±0.89)%比(34.71±18.68)%(t=2.895,P=0.0443)。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA慢病毒48h后,CON与DTL-shRNA磷酸化P65相对表达量分别为1.52±0.14和0.82±0.11(t=6.81,P=0.0024),而P65的表达分别为0.25±0.04和0.24±0.08(t=0.19,P=0.85),差异无统计学意义,CON与DTL-shRNA磷酸化IκBα的相对表达量分别为0.19±0.03和0.13±0.02(t=2.882,P=0.0449),而IκBα相对表达量分别为0.22±0.05和1.01±0.06(t=17.52,P<0.0001)。凝胶迁移实验检测DTL-shRNANF-κB转录活性进一步确定了DTL的下调抑制了NF-κB转录活性。结论DTL在多发性骨髓瘤细胞中高表达,且DTL的下调抑制了细胞增殖,阻断了克隆形成,促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,而DTL对骨髓瘤细胞生物学功能的影响与NF-κB通路的改变相关。 展开更多
关键词 E3泛素连接酶 多发性骨髓瘤 增殖 克隆形成 核因子-ΚB
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8-MOP、ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞克隆形成的影响 被引量：4
11
作者 闫晓光 吴军正 +2 位作者 陈建元 周训银 吴红 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期465-466,共2页
研究8-MOP与ATRA单独及联合应用对Mc3细胞克隆的影响。方法。软琼脂克隆法。结果：照组细胞克隆形成率为53．1％,经IC308-MOP与ATRA单独及联合作用5－d以后，克隆形成率降低为8-MOP组0．9％，ATRA组35.1％，联合用药组3.2％。结论：8－... 研究8-MOP与ATRA单独及联合应用对Mc3细胞克隆的影响。方法。软琼脂克隆法。结果：照组细胞克隆形成率为53．1％,经IC308-MOP与ATRA单独及联合作用5－d以后，克隆形成率降低为8-MOP组0．9％，ATRA组35.1％，联合用药组3.2％。结论：8－MOP与ATRA单独及联合应用Mc3细胞克隆形成率降低，有可能使Mc3细胞的转移能力下降。 展开更多
关键词 甲氧沙林 维甲酸 粘液表皮样癌 克隆集落形成测定
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hASCs的单克隆培养及干细胞相关标志物表达的实验研究 被引量：6
12
作者 顾繁 高建华 鲁峰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1067-1069,1075,共4页
目的通过对人体脂肪组织来源干细胞(hASCs)进行单克隆培养,以获得单克隆hASCs。并比较不同克隆干细胞相关标志物的表达。方法①临床手术切取脂肪组织,经胶原酶消化法原代培养,细胞培养并传至第2代后,有限稀释法进行克隆形成实验。②针... 目的通过对人体脂肪组织来源干细胞(hASCs)进行单克隆培养,以获得单克隆hASCs。并比较不同克隆干细胞相关标志物的表达。方法①临床手术切取脂肪组织,经胶原酶消化法原代培养,细胞培养并传至第2代后,有限稀释法进行克隆形成实验。②针对获得的单克隆hASCs,用流式细胞仪检测不同克隆CD29、CD34、CD44、CD54、CD106、ABCG2的表达。结果①通过克隆形成实验共获得10个单克隆细胞群,并成功扩增到第9代后冻存。②不同克隆细胞群体具有相似的成纤维细胞样形态,但增殖活力各异。③干细胞相关标志检测显示:各个群体均高表达CD29(92.9±7.4%)、CD44(94.6±6.8%),低表达ABCG2(2.5±1.4%),但CD34、CD54和CD106的表达在不同群体间有明显差异。结论酶消化法获得hASCs是含有不同分化潜能干细胞以及其他多种细胞的混合群体。用单克隆培养的方法可能获得纯化的单一细胞群,不同的克隆之间的表面抗原表达既有共性和又有差异,这种差异可能与不同克隆间分化潜能的不同相关。 展开更多
关键词 脂肪组织来源干细胞 组织工程 克隆形成实验 免疫表型
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FATE/BJ-HCC-2基因表达促进细胞增殖及肿瘤形成 被引量：2
13
作者 闫萌 王巍 +3 位作者 杨小昂 张毓 尹艳慧 陈慰峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期748-754,共7页
FATE/BJ-HCC-2是本实验室鉴定的一个新的肿瘤-睾丸抗原基因,定位于Xq28染色体.为探讨FATE/BJ-HCC-2对细胞生物学行为的影响及裸鼠体内肿瘤形成能力的改变,分别采用脂质体转染真核表达载体及逆转录病毒感染两种方式,获得了FATE/BJ-HCC-2... FATE/BJ-HCC-2是本实验室鉴定的一个新的肿瘤-睾丸抗原基因,定位于Xq28染色体.为探讨FATE/BJ-HCC-2对细胞生物学行为的影响及裸鼠体内肿瘤形成能力的改变,分别采用脂质体转染真核表达载体及逆转录病毒感染两种方式,获得了FATE/BJ-HCC-2表达的Bel-7402单克隆细胞株及NIH-3T3细胞克隆,并通过RT-PCR和Western印迹在基因和蛋白水平鉴定了FATE/BJ-HCC-2表达情况.通过3H-TdR参入法,检测细胞的增殖能力;通过稀释铺板集落形成率测定和软琼脂集落形成实验,检测细胞的集落形成能力;通过裸鼠体内细胞注射成瘤,检测细胞成瘤性和肿瘤生长速度.结果表明,FATE/BJ-HCC-2基因表达能明显提高细胞体外增殖、克隆形成能力和成瘤性.提示其对肿瘤的发生发展起到促进作用. 展开更多
关键词 FATE/BJ-HCC-2 细胞增殖 克隆形成能力 致瘤性
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改良TRIzol法提取肿瘤细胞琼脂克隆的总RNA 被引量：2
14
作者 沈景 宋利强 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期190-192,共3页
琼脂克隆形成实验是肿瘤研究领域中一种重要的体外实验,可用于筛选转化细胞、评价肿瘤细胞药物敏感性[1]等。有研究表明,琼脂克隆形成实验筛选的肿瘤细胞具有肿瘤干细胞的特性[2],有更强的致瘤性和转移能力[3]。
关键词 TRIZOL 琼脂克隆形成实验 RNA提取 多糖
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淋巴细胞-肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义
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作者 于晓敏 杨忠 +1 位作者 王颖 王小宁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期621-627,共7页
目的:探究淋巴细胞和肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义。方法:以人肝癌细胞株PLC/PRF/5与人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)形成cell-in-cell胞内嵌合结构为研究模型,采用流式细胞术分析淋... 目的:探究淋巴细胞和肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义。方法:以人肝癌细胞株PLC/PRF/5与人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)形成cell-in-cell胞内嵌合结构为研究模型,采用流式细胞术分析淋巴细胞钻入肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征。利用流式分选技术分选出小鼠脾淋巴细胞与PLC/PRF/5细胞形成的cell-in-cell胞内嵌合结构,利用平板克隆形成实验检测cell-in-cell胞内嵌合结构对PLC/PRF/5细胞生物学行为的影响。结果:4 h和8 h时,以CD3/CD28抗体活化的PBMC对PLC/PRF/5细胞的伸入率分别为(15.75±1.28)%、(13.49±1.23)%,明显高于未活化PBMC的伸入率[(10.56±0.57)%,(11.38±0.97)%;P<0.05];且活化的PBMC在4 h时的伸入率明显高于未活化PBMC在8 h时的伸入率(P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞伸入PLC/PRF/5细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构后,PLC/PRF/5细胞的克隆形成率明显高于未形成cell-in-cell胞内嵌合结构的PLC/PRF/5细胞[(32.25±2.32)%vs(21.92±2.02)%,P<0.05]。结论:活化后PBMC伸入PLC/PRF/5细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的比率升高、时间提前,同时形成胞内嵌合结构的肿瘤细胞在体外克隆形成能力增强。 展开更多
关键词 cell—in—cell胞内嵌合结构 PLC PRF 5细胞 PBMC 流式分选 克隆形成
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一种分离人表皮角质形成细胞的新方法 被引量：2
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作者 邹德波 潘婧 +1 位作者 张平 吴训伟 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期424-429,共6页
目的:探索一种简单快速无需分开表皮和真皮即可分离得到人表皮角质形成细胞(KC)并进行体外培养的方法。方法:取皮肤组织切碎后,先用含分散酶和Ⅰ型胶原酶的消化液37℃浸泡60 min,然后加入胰酶消化30 min,再加入DNA酶继续消化5 min以获... 目的:探索一种简单快速无需分开表皮和真皮即可分离得到人表皮角质形成细胞(KC)并进行体外培养的方法。方法:取皮肤组织切碎后,先用含分散酶和Ⅰ型胶原酶的消化液37℃浸泡60 min,然后加入胰酶消化30 min,再加入DNA酶继续消化5 min以获得单个细胞;加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中和消化,用100μm细胞过滤器过滤,离心后,用含10 mmol/L Rock蛋白激酶抑制剂的DMEM培养基(含10%FBS)培养,3 d后换成Cn T07培养基。每2 d换液1次,培养过程中,观察细胞生长状态。结果:与传统分散酶分离表皮KC方法相比,用该方法分离得到的表皮KC数量较多,第1代以克隆形式生长并且生长较快;传代后细胞呈角质细胞形态,主要表达未分化的角质蛋白K5,生长曲线和形成单细胞克隆能力和传统分离的表皮KC相近,并稍优于传统方法。采用新方法成功地从带毛发的头皮组织分离出大量的表皮KC并表达正常的角质蛋白。结论:该法得到的表皮KC形态、生长状态及形成单克隆的能力都接近或优于传统方法。该方法简单高效,具有较高的实用价值,尤其为以后临床上大量分离患者的表皮KC用于细胞治疗奠定基础。 展开更多
关键词 皮肤 角蛋白细胞 细胞分离 平板形成克隆实验
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清解扶正颗粒促进凋亡和自噬逆转结直肠癌细胞多药耐药研究 被引量：6
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作者 赵锦燕 朱晓勤 +3 位作者 蓝紫林 李斐 林明和 林久茂 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第15期2246-2252,共7页
目的:探讨清解扶正颗粒(QFG)对人结直肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞的逆转作用机制。方法:培养人结直肠癌HCT-8细胞及HCT-8/5-FU耐药细胞,计算不同化疗药物的耐药指数(RI)和QFG的逆转倍数(RF);设立空白对照组(0 mg/mL)和不同浓度(0.25、0.5、1... 目的:探讨清解扶正颗粒(QFG)对人结直肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞的逆转作用机制。方法:培养人结直肠癌HCT-8细胞及HCT-8/5-FU耐药细胞,计算不同化疗药物的耐药指数(RI)和QFG的逆转倍数(RF);设立空白对照组(0 mg/mL)和不同浓度(0.25、0.5、1.0 mg/mL)QFG干预组;各组干预48 h后,通过罗丹明-123(Rho123)染色和多柔比星(DOX)染色检测细胞外排泵功能,通过克隆形成试验检测细胞存活能力,应用磷脂酰丝氨酸(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染检测细胞凋亡,应用Cyto-ID染色检测细胞自噬,应用蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(gP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、选择性自噬接头蛋白(p62/SQSTM1)、微管相关蛋白1轻链(LC)3Ⅱ的蛋白表达。结果:HCT-8/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)、多柔比星(DOX)和顺铂(DDP)均耐药,QFG可有效逆转化疗耐药,与空白对照组比较,不同浓度QFG显著增加Rho123、DOX和Cyto-ID的平均荧光强度(均P<0.05);抑制细胞的克隆形成率(P<0.05),提高细胞凋亡率(P<0.05);和空白对照组比较,QFG抑制P-gP、p62的蛋白表达(P<0.05),降低Bcl-2/Bax比值(P<0.05),促进LC3-Ⅱ的蛋白表达(P<0.05)。结论:QFG促进细胞凋亡和自噬,抑制耐药细胞对化疗药物的外排泵功能,从而逆转多药耐药。 展开更多
关键词 清解扶正颗粒 结直肠癌 多药耐药 细胞凋亡 细胞自噬 克隆形成 逆转 泵
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免疫抑制剂环胞素A对鼠骨代谢的生物学效应 被引量：3
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作者 吴学宾 陈建新 +2 位作者 周越 王轩 李佳 《首都医科大学学报》 CAS 2008年第2期133-136,共4页
目的探讨实验条件下免疫抑制剂环胞素A(CsA)在骨代谢过程中对破骨细胞和成骨细胞克隆的生物作用及其机制。方法用不同浓度的环胞素A与鼠骨髓细胞共同培养,诱导产生破骨细胞和成骨细胞克隆。分别以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检查破骨... 目的探讨实验条件下免疫抑制剂环胞素A(CsA)在骨代谢过程中对破骨细胞和成骨细胞克隆的生物作用及其机制。方法用不同浓度的环胞素A与鼠骨髓细胞共同培养,诱导产生破骨细胞和成骨细胞克隆。分别以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检查破骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)染色检查CFU-F克隆和Von’Kassol染色检查CFU-OB克隆;光镜下计数破骨细胞数、CFU-F和CFU-OB成骨细胞克隆数。结果实验条件下环胞素A可诱导鼠破骨细胞的数量显著增加(F=16.496,P<0.001),且破骨细胞的数量与环胞素A剂量呈线性正相关(r=0.579,P<0.05);成骨细胞克隆CFU-F和CFU-OB的数量变化与环胞素A无相关性(F=1.380,F=0.305,P>0.05)。结论环胞素A在实验条件下可诱导鼠破骨细胞数量的增加,但对成骨细胞克隆无显著影响,环胞素A对骨代谢的生物作用可能是通过上调破骨细胞系统从而导致生物体发生骨质疏松。 展开更多
关键词 环胞素A 骨骼 破骨细胞 成骨细胞 纤维母细胞克隆形成单位 成骨细胞克隆形成单位
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再生障碍性贫血患者造血祖细胞对环孢菌素A反应性的研究
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作者 贾志凌 何学鹏 +1 位作者 刘端祺 陈书长 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第18期1696-1697,共2页
关键词 环孢菌素A 再生障碍性贫血 粒细胞/巨噬细胞 克隆形成单位 红系克隆形成单位
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异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响 被引量：11
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作者 李雅娟 甘露 +7 位作者 王占洋 邱理红 佀营营 张红 马成俊 李忌 孙喜灵 王振华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1298-1303,共6页
目的研究异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法和克隆形成实验考察异甘草素对C6胶质瘤细胞增殖抑制作用;Giemsa染色观察细胞形态学变化;半定量RT-PCR、Western blot鉴定细胞分化相关基因及蛋白... 目的研究异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法和克隆形成实验考察异甘草素对C6胶质瘤细胞增殖抑制作用;Giemsa染色观察细胞形态学变化;半定量RT-PCR、Western blot鉴定细胞分化相关基因及蛋白表达水平。结果大鼠C6胶质瘤细胞经异甘草素诱导后,以浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.01);光镜观察到异甘草素诱导前的C6胶质瘤细胞呈两极长梭形或多角形,胞质多,胞突短;而诱导后细胞突起数目不同程度增多,细胞形态变细变长。诱导前克隆形成出现早,数量多,直径大,克隆形成率高;异甘草素处理组克隆形成率降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR、Western blot结果显示,异甘草素诱导后C6细胞GFAP mRNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01)。结论异甘草素能抑制大鼠C6胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化。 展开更多
关键词 异甘草素 C6胶质瘤 增殖 分化 克隆形成 吉姆萨染色 星形胶质细胞 GFAP
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