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鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱株基因组B节段的克隆和序列分析 被引量:11
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作者 包晓玮 张厚双 +4 位作者 高宏雷 付朝阳 彭志伟 单文鲁 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期85-90,共6页
用蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段 ,将其克隆入PMD18_T载体 ,进行了测序 ,并用DNAStar软件进行序列分析... 用蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段 ,将其克隆入PMD18_T载体 ,进行了测序 ,并用DNAStar软件进行序列分析。测序结果表明 ,克隆的Gx株B节段全长为 2 82 7bp ,与超强毒参考株UK6 6 1的同源性为 88 2 % ,与强毒参考株Harbin_1株的同源性达 96 3% ;克隆的Gt株B节段全长为 2 82 7bp ,与弱毒参考株P2的同源性达 99 5 %。而Gx株与Gt株B节段的核苷酸的同源性只有 89 8% ;vvIBDV_Gx。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 基因组B节段 克隆和序列分析
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传染性法氏囊病病毒Gt株基因组A节段的克隆和序列分析 被引量:1
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作者 张厚双 包晓玮 +4 位作者 王笑梅 高宏雷 付朝阳 彭志伟 鞠玉琳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期130-133,138,共5页
利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV_Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,使其成为弱毒株IBDV_Gt。从细胞适应毒中提取病毒dsRNA ,通过反转录 ,使用Long_accuratePCR(LA_PCR)用一对引物一步直接扩增IBDV_Gt... 利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV_Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,使其成为弱毒株IBDV_Gt。从细胞适应毒中提取病毒dsRNA ,通过反转录 ,使用Long_accuratePCR(LA_PCR)用一对引物一步直接扩增IBDV_Gt基因组A节段全长cDNA的方法 ,得到一约 3 30kb的片段。测序结果证明已获得 32 5 5bp的A节段全长 ,对vvIBDV_Gx株和IBDV_Gt株的全部核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析 ,结果表明IBDV_Gt株与国内外数株IBDV弱毒株的同源性在 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 A节段 克隆和序列分析
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橡胶树抗白粉病基因连锁RAPD标记OPV—10_(390)的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 陈守才 邵寒霜 +1 位作者 胡东琼 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1994年第S1期7-11,共5页
对橡胶树抗白粉病基因连锁RAPD标记OPV—10390进行了克隆和测序。经计算机DNAsis系统分析,结果表明,该片段不全是编码序列,也没发现结构基因5′侧翼区和3′侧翼区的保守序列,但有近于外显子和内含子的结构。
关键词 橡胶树 抗白粉病基因连锁标记 克隆和序列分析.
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鸡传染性法氏囊病病毒PCR检测及VP4基因序列分析 被引量:1
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作者 吴忆春 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第7期62-65,共4页
从滨州地区某养鸡场疑似鸡传染性法氏囊病病鸡初步分离到一株记为HSJ12分离株的IBDV毒株,从该分离株中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增VP4基因。结果表明,测序结果与GenBank中报道的IBDV VP4序列同源性在95%~99%之间。将VP4基因测序序列... 从滨州地区某养鸡场疑似鸡传染性法氏囊病病鸡初步分离到一株记为HSJ12分离株的IBDV毒株,从该分离株中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增VP4基因。结果表明,测序结果与GenBank中报道的IBDV VP4序列同源性在95%~99%之间。将VP4基因测序序列与GenBank上报道的23个序列进行系统遗传进化树分析,证实其与ks株同源性最近,而与23-82、OH株同源性最远。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 VP4基因 克隆和序列分析
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蜡样芽胞杆菌M22铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆及表达 被引量:1
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作者 尚玉磊 张炳欣 +1 位作者 王琦 梅汝鸿 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期738-744,共7页
采用PCR技术 ,从蜡样芽胞杆菌M2 2基因组DNA扩增到长 132 0bp的基因片段 .该片段含编码 179个氨基酸残基的开放阅读框 ,推定蛋白序列与报道的BacillusanthracisCu ,Zn SOD序列有96 %同源性 ,其中N端 16个氨基酸残基推定为信号肽序列 .将... 采用PCR技术 ,从蜡样芽胞杆菌M2 2基因组DNA扩增到长 132 0bp的基因片段 .该片段含编码 179个氨基酸残基的开放阅读框 ,推定蛋白序列与报道的BacillusanthracisCu ,Zn SOD序列有96 %同源性 ,其中N端 16个氨基酸残基推定为信号肽序列 .将Cu ,Zn SOD编码区插入载体pET 2 2b(+ )构建表达载体pET 2 2b sodC ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,IPTG诱导融合蛋白表达 .SDS PAGE显示 ,融合蛋白表观分子质量约 2 4kD ,占菌体裂解液中总蛋白的 2 1 3% .将此表达载体转入SOD缺陷型大肠杆菌PN132 ,赋予了该菌株对paraquat的抗性 .NBT光抑制法测定SOD活性显示 ,与PN132无SOD活性相比 ,重组子在IPTG诱导前SOD活性极低 (1 79U/mg) ,诱导后活性高达 6 9 76U/mg .非变性电泳结果显示 ,该酶活性不同程度地受到 5mmol LH2 O2 和 5mmol 展开更多
关键词 蜡样芽胞杆菌 铜锌超氧化物歧化酶 克隆和序列分析 原核表达
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