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几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析 被引量:5
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作者 双杰 包秋华 +3 位作者 永胜 王艳霞 张和平 格日勒图 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2010年第8期8-10,31,共4页
从内蒙古传统发酵乳制品中分离的几种乳酸菌,包括干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧乳杆菌和嗜酸乳杆菌标准株(L.acidophilus ATCC4356)等为实验材料,应用SDS-PAGE方法和PCR方法分别进行S-层蛋白(S-lay... 从内蒙古传统发酵乳制品中分离的几种乳酸菌,包括干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧乳杆菌和嗜酸乳杆菌标准株(L.acidophilus ATCC4356)等为实验材料,应用SDS-PAGE方法和PCR方法分别进行S-层蛋白(S-layers pro-tein,SLP)的普查和slp基因的检测。结果表明:在各种乳酸菌中,经SDS-PAGE电泳方法检测,只有植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和其标准菌株的样品中出现膜外蛋白的可疑条带,大小为44~66ku之间,与文献报道的slp基因表达产物大小范围是一致;经PCR方法检测,只有嗜酸乳杆菌和其标准菌株L.acidophilus ATCC4356中扩增出slp基因可疑条带,其大小约为1 300 bp。并对嗜酸乳杆菌slp基因进行克隆、基因序列测序和分析。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 S-层蛋白 slp基因 克隆与序列分析
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2种山葡萄白藜芦醇合酶基因的克隆与序列分析
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作者 李滨胜 崔杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第S1期11-14,共4页
目的:白藜芦醇合酶(resveratrol synthetic enzyme,RS)是植物白藜芦醇合成途径中的关键酶,为获得高效表达的白藜芦醇合酶基因,方法:利用已知的葡萄RS基因(AF274281)序列设计并合成一对引物,以2种不同来源的山葡萄叶片基因组DNA为模板,PC... 目的:白藜芦醇合酶(resveratrol synthetic enzyme,RS)是植物白藜芦醇合成途径中的关键酶,为获得高效表达的白藜芦醇合酶基因,方法:利用已知的葡萄RS基因(AF274281)序列设计并合成一对引物,以2种不同来源的山葡萄叶片基因组DNA为模板,PCR扩增包含RS完整基因在内的一段序列;在此基础上采用悬挂延伸PCR法分别克隆目的基因。结果:测序与序列分析表明,RS全长基因片段大小均为1 536bp,其中包含一个内含子及两个外显子,同源性比较,其内含子碱基变化较大。悬挂延伸PCR法克隆获得的目的基因,开放读码框分别为1 170 bp和1 182bp,编码389/392个氨基酸残基,命名为CNRS1、CNRS3。同源性比较发现,CNRS1、CNRS3与已知葡萄RS基因序列的同源性分别为98%、97.5%。结论:以上结果证实CNRS1、CNRS3属葡萄RS基因家族成员,为今后进一步对该基因的研究与利用打下了基础。 展开更多
关键词 山葡萄 RS基因 克隆与序列分析
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金黄色葡萄球菌TRAP基因的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 于长清 崔玉东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第3期72-75,共4页
参考Genbank已经发表的关于金黄色葡萄球菌TRAP蛋白的基因序列,设计合成1对引物,从本实验室保存的金黄色葡萄球菌Newman株中提取细菌DNA,对TRAP蛋白基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现1条约500bp的条带,回收纯化后,将其克隆... 参考Genbank已经发表的关于金黄色葡萄球菌TRAP蛋白的基因序列,设计合成1对引物,从本实验室保存的金黄色葡萄球菌Newman株中提取细菌DNA,对TRAP蛋白基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现1条约500bp的条带,回收纯化后,将其克隆至pMD18-T质粒载体中,进行核苷酸序列分析,然后与报道的TRAP蛋白基因进行比较。结果表明:所扩增的基因序列与报道的TRAP核苷酸的同源性高达100/,证实为金黄色葡萄球菌Newman株TRAP蛋白基因。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 克隆与序列分析 TRAP
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鸡传染性支气管炎病毒N基因的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 王长远 周启扉 +2 位作者 薛军 王继昌 闻晓波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2008年第3期43-45,共3页
根据GenBank上已公布的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)N基因序列经多重比较设计一对特异性引物扩增大庆分离株DQ1株的N基因,RT-PCR产物经纯化回收后,克隆到pMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,筛选出阳性质粒进行序列测定,经与已发表... 根据GenBank上已公布的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)N基因序列经多重比较设计一对特异性引物扩增大庆分离株DQ1株的N基因,RT-PCR产物经纯化回收后,克隆到pMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,筛选出阳性质粒进行序列测定,经与已发表的IBV N基因序列进行序列比较与分析,表明DQ1株的N基因与现有疫苗株存在一定差异。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 N基因 克隆与序列分析
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短小乳杆菌内蒙古分离株S-层蛋白的普查、鉴定和基因分析
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作者 兰丽 魏建民 +3 位作者 王艳霞 王敏 满达 格日勒图 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期26-30,共5页
S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法... S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法克隆出L.brevis的slp基因,对该slp基因进行测序及序列分析。试验结果表明,SDS-PAGE电泳结果显示L.brevis样品在44~55 ku之间出现目的条带,与文献报道的S-层蛋白大小范围一致;PCR方法正确扩增出大小约为1300 bp的slp基因,经DNAStar软件遗传分析发现该基因与鸡乳酸杆菌株(GenBank登录号:AY597266.1)的亲缘关系和遗传距离最近,与其他种类乳酸菌遗传距离也非常相近;经Genetyx生物软件推导出的S-层蛋白大小理论值约为47 ku,具有显著的外膜蛋白的特性。本试验为后续遗传改造等研究工作奠定基础。 展开更多
关键词 短小乳杆菌 S-层蛋白 slp基因 克隆与序列分析
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贵州省五个猪场蚊蝇携带PRRSV的调查 被引量:2
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作者 路宪礼 周碧君 +4 位作者 王开功 文明 程振涛 罗意 江楠 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第9期30-33,共4页
为监测猪场内的蚊蝇是否能携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),采集贵州省5个养猪场蚊蝇样本,采用RT-PCR方法引物蚊蝇样本进行PRRSV N基因检测,对检测为阳性样本的PRRSV-NSP2基因进行克隆并测序,最后对NSP2基因进行生物信息学分析。... 为监测猪场内的蚊蝇是否能携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),采集贵州省5个养猪场蚊蝇样本,采用RT-PCR方法引物蚊蝇样本进行PRRSV N基因检测,对检测为阳性样本的PRRSV-NSP2基因进行克隆并测序,最后对NSP2基因进行生物信息学分析。结果显示,从花溪、乌当、毕节3个地方猪场的蚊蝇样本中均扩增出372 bp左右的片段。贵州省蚊蝇样本的3株PRRSV-NSP2基因的核苷酸序列之间存在较高的同源性,可达97.9%~98.3%;蚊蝇样本的PRRSV-NSP2基因片段与贵州猪场猪源PRRSV流行株相比具有较高的核苷酸同源性,高达97.6%~100.0%,与国内最近流行变异毒株的核苷酸同源性为84.3%~98.8%,而与早期国内外分离经典毒株的核苷酸同源性为77.1%~97.7%。结果表明,从贵州省几个猪场内采集的蚊蝇携带PRRSV。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 蚊蝇 克隆与序列分析
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