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光诱导RNAi系统的构建及优化
1
作者
王建华
王雪
+2 位作者
杜增民
赵玉政
杨弋
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期28-33,共6页
利用光诱导基因表达系统,构建光诱导RNAi系统,并对系统转染比例、转录因子的表达量和shRNAmir表达载体的核心启动子进行优化。通过构建不同启动子的光敏转录因子GAVPO表达载体和不同核心启动子的shRNAmir表达载体,分析它们对报告基因的...
利用光诱导基因表达系统,构建光诱导RNAi系统,并对系统转染比例、转录因子的表达量和shRNAmir表达载体的核心启动子进行优化。通过构建不同启动子的光敏转录因子GAVPO表达载体和不同核心启动子的shRNAmir表达载体,分析它们对报告基因的干扰效果的影响。结果表明,GAVPO的表达量对报告基因沉默效果和shRNAmir的背景表达水平至关重要。低表达量的GAVPO能够实现对报告基因的微调控,报告基因的表达量下降到约60%;而高表达量的GAVPO能够高效抑制报告基因表达,报告基因的表达量下降到34%。
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关键词
RNAI
光诱导
基因
表达
系统
shRNAmir
萤火虫荧光素酶
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职称材料
籽粒苋C_4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆和表达
被引量：
11
2
作者
冯瑞云
白云凤
+3 位作者
李平
张维锋
王媛媛
杨武德
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1801-1808,共8页
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是C4途径的关键酶之一。本研究克隆了双子叶植物籽粒苋(A.hypochondriacus L.)C4型PEPC基因的cDNA和gDNA全长序列。该基因编码区cDNA全长2895bp(GenBank登录号为HQ186302)...
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是C4途径的关键酶之一。本研究克隆了双子叶植物籽粒苋(A.hypochondriacus L.)C4型PEPC基因的cDNA和gDNA全长序列。该基因编码区cDNA全长2895bp(GenBank登录号为HQ186302),编码964个氨基酸残基。对应的gDNA全长为6785bp,含10个外显子和9个内含子,内含子总长3890bp,其中第一内含子最长,为1662bp,具GATA-motif、G-box等15个光应答元件,9个激素应答元件,29个CAAT box,72个TATA box。该特征在本研究范围内的植物中,为籽粒苋所独有。比较多种植物表明,不同植物之间的C3/C4型PEPC基因的外显子长度具有较高的一致性,而内含子的长度变化较大。不同植物PEPC基因对核苷酸具有一定的选择性,并且外显子和内含子的GC含量呈正相关。总的趋势是单子叶植物外显子和内含子的GC含量均高于双子叶植物。利用半定量RT-PCR分析表达模式,发现籽粒苋PEPC基因主要在叶片中表达,表达量随光照时间延长而增加。
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关键词
籽粒苋(A.hypochondriacusL)
C4光合途径
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶
基因组序列
叶片特异性
光诱导表达
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职称材料
拟南芥RBCS-1A基因受光调节表达模式及其启动子遗传转化应用评价
被引量：
7
3
作者
习雨琳
周朋
+3 位作者
宋梅芳
李志勇
孟凡华
杨建平
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1561-1569,共9页
RBCS编码光合碳同化关键酶核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶的小亚基,是控制植物光合作用的重要基因之一。本研究利用实时荧光定量PCR技术分析了拟南芥RBCS-1A受光调节的表达模式,结果表明,AtRBCS-1A表达受到光的诱导,同时具有组织表达特...
RBCS编码光合碳同化关键酶核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶的小亚基,是控制植物光合作用的重要基因之一。本研究利用实时荧光定量PCR技术分析了拟南芥RBCS-1A受光调节的表达模式,结果表明,AtRBCS-1A表达受到光的诱导,同时具有组织表达特异性;运用生物信息学手段分析发现,该基因启动子序列中存在多个参与光应答的顺式作用元件;采用PCR技术从拟南芥基因组中分离到长度为1691bp的AtRBCS-1A启动子片段,将该片段与GUS报告基因融合构建植物表达载体并转化野生型拟南芥,对获得的转基因植株进行GUS染色,结果显示,AtRBCS-1A启动子是光诱导型和组织特异型启动子。以上结果初步证明,AtRBCS-1A启动子应用于植物遗传转化切实可行,具有重要应用价值。
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关键词
拟南芥
RBCS-1A基因
表达
模式
光诱导表达
顺式作用元件
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职称材料
题名
光诱导RNAi系统的构建及优化
1
作者
王建华
王雪
杜增民
赵玉政
杨弋
机构
华东理工大学药学院生物反应器工程国家重点实验室
出处
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期28-33,共6页
基金
国家自然科学基金(31225008
31170815
+4 种基金
31071260)
上海市科委"创新行动计划"基础研究重点项目(NO12JC1402900)
上海市曙光人才计划(11SG31)
高等学校博士学科点专项科研基金(20100074110010)
高等学校基本科研业务费
文摘
利用光诱导基因表达系统,构建光诱导RNAi系统,并对系统转染比例、转录因子的表达量和shRNAmir表达载体的核心启动子进行优化。通过构建不同启动子的光敏转录因子GAVPO表达载体和不同核心启动子的shRNAmir表达载体,分析它们对报告基因的干扰效果的影响。结果表明,GAVPO的表达量对报告基因沉默效果和shRNAmir的背景表达水平至关重要。低表达量的GAVPO能够实现对报告基因的微调控,报告基因的表达量下降到约60%;而高表达量的GAVPO能够高效抑制报告基因表达,报告基因的表达量下降到34%。
关键词
RNAI
光诱导
基因
表达
系统
shRNAmir
萤火虫荧光素酶
Keywords
RNAi
light-inducible gene expression system
shRNAmir
firefly luciferase
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
籽粒苋C_4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆和表达
被引量：
11
2
作者
冯瑞云
白云凤
李平
张维锋
王媛媛
杨武德
机构
山西农业大学农学院
山西省农业科学院作物科学研究所
山西大学生物工程学院
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1801-1808,共8页
基金
国家自然科学基金项目(30971838)
山西省回国留学人员基金项目(200986)
山西省国际科技合作项目(2011081005)资助
文摘
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是C4途径的关键酶之一。本研究克隆了双子叶植物籽粒苋(A.hypochondriacus L.)C4型PEPC基因的cDNA和gDNA全长序列。该基因编码区cDNA全长2895bp(GenBank登录号为HQ186302),编码964个氨基酸残基。对应的gDNA全长为6785bp,含10个外显子和9个内含子,内含子总长3890bp,其中第一内含子最长,为1662bp,具GATA-motif、G-box等15个光应答元件,9个激素应答元件,29个CAAT box,72个TATA box。该特征在本研究范围内的植物中,为籽粒苋所独有。比较多种植物表明,不同植物之间的C3/C4型PEPC基因的外显子长度具有较高的一致性,而内含子的长度变化较大。不同植物PEPC基因对核苷酸具有一定的选择性,并且外显子和内含子的GC含量呈正相关。总的趋势是单子叶植物外显子和内含子的GC含量均高于双子叶植物。利用半定量RT-PCR分析表达模式,发现籽粒苋PEPC基因主要在叶片中表达,表达量随光照时间延长而增加。
关键词
籽粒苋(A.hypochondriacusL)
C4光合途径
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶
基因组序列
叶片特异性
光诱导表达
Keywords
Amarnthus hypochondriacus
C4 photosynthetic type
PEPC
gDNA
Leaf-specific
Light-inducible expression
分类号
S519 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
拟南芥RBCS-1A基因受光调节表达模式及其启动子遗传转化应用评价
被引量：
7
3
作者
习雨琳
周朋
宋梅芳
李志勇
孟凡华
杨建平
机构
中国农业科学院作物科学研究所
中国农业科学院研究生院
河南农业大学农学院
重庆邮电大学生物信息学院
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1561-1569,共9页
基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08010-002)
重庆市自然科学基金(CSTC2009BA1088)项目资助
文摘
RBCS编码光合碳同化关键酶核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶的小亚基,是控制植物光合作用的重要基因之一。本研究利用实时荧光定量PCR技术分析了拟南芥RBCS-1A受光调节的表达模式,结果表明,AtRBCS-1A表达受到光的诱导,同时具有组织表达特异性;运用生物信息学手段分析发现,该基因启动子序列中存在多个参与光应答的顺式作用元件;采用PCR技术从拟南芥基因组中分离到长度为1691bp的AtRBCS-1A启动子片段,将该片段与GUS报告基因融合构建植物表达载体并转化野生型拟南芥,对获得的转基因植株进行GUS染色,结果显示,AtRBCS-1A启动子是光诱导型和组织特异型启动子。以上结果初步证明,AtRBCS-1A启动子应用于植物遗传转化切实可行,具有重要应用价值。
关键词
拟南芥
RBCS-1A基因
表达
模式
光诱导表达
顺式作用元件
Keywords
Arabidopsis
RBCS-1A gene
Expression pattern
Light-induced expression
cis-acting elements
分类号
Q943 [生物学—植物学]
S33 [农业科学—作物遗传育种]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
光诱导RNAi系统的构建及优化
王建华
王雪
杜增民
赵玉政
杨弋
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
籽粒苋C_4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆和表达
冯瑞云
白云凤
李平
张维锋
王媛媛
杨武德
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
11
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
拟南芥RBCS-1A基因受光调节表达模式及其启动子遗传转化应用评价
习雨琳
周朋
宋梅芳
李志勇
孟凡华
杨建平
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
7
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职称材料
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