-
题名含组氨酸蛋白标签的蓝舌病假病毒物质构建及定量分析
被引量：1
- 1
-
-
作者
邓俊花
林祥梅
张永宁
王彩霞
吴绍强
-
机构
中国检验检疫科学研究院
-
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第9期68-73,共6页
-
基金
国家科技支撑计划项目(2013BAD12B01)
国家质检总局科研计划项目(2012IK026)
-
文摘
基于蓝舌病(bluetongue,BT)的危害及RNA阳性质控品研制的重要性,试验将pTrcHis-MS2质粒借助点突变技术在噬菌体外壳蛋白15和16氨基酸之间插入组氨酸(His)蛋白标签,构建了pTrcMS载体。将pMD19-T-BTV质粒与pTrcMS质粒分别进行KpnⅠ和HindⅢ双酶切,然后连接构建pTrcMS-BTV重组质粒。将pTrcMS-BTV重组菌进行原核表达,产物借助偶联His蛋白标签的磁珠捕获技术获得纯化的蓝舌病假病毒颗粒,进行特性鉴定并定量。结果显示,研制的pTrcMSBTV物质经PCR方法评价纯度高,无基因DNA污染;透射电镜观察形态为不规则的直径约为26nm的多边形;RT-PCR方法检测稳定性表明该物质耐RNase A,易保存;应用荧光RT-PCR检测表明该物质溶液最低检测限可达到2.5×102拷贝/mL。蓝舌病假病毒物质将为蓝舌病分子生物学检测提供阳性质控物质。
-
关键词
蓝舌病
假病毒物质
组氨酸蛋白标签
纯化
定量
-
Keywords
bluetongue
virus-like particles （VLPs）
6 His-tags purification quantitative
-
分类号
S855.3
[农业科学—临床兽医学]
-
-
题名IHHNV假病毒核酸标准物质定值研究
被引量：1
- 2
-
-
作者
陈桂芳
李会杰
高运华
杨佳怡
董莲华
-
机构
沈阳化工大学化学工程学院
深圳中国计量科学研究院技术创新研究院
中国计量科学研究院前沿计量科学中心
-
出处
《计量学报》
CSCD
北大核心
2023年第3期392-400,共9页
-
基金
国家市场监管总局科技计划项目(2021MK149)。
-
文摘
传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)感染对虾引起急性传染病,对幼虾危害尤其明显。基于Genbank收录的IHHNV基因序列(AF218266.2),制备了含IHHNV全基因组序列的假病毒标准物质(NIM-RM4062)。针对ORF1基因设计特异性引物探针,建立了IHHNV数字PCR检测方法,进行IHHNV假病毒核酸标准物质的均匀性和稳定性检验。标准物质拷贝数浓度的标准值及扩展不确定度为:(1.22±0.15)×10^(3)copies/μL(k=2)。利用多种数字PCR平台对标准物质进行定值验证,测量的相对标准偏差(RSD)小于4%,标准物质量值在不同检测平台复现性较好。采用市售IHHNV核酸检测试剂盒进行验证,标准物质量值与荧光定量PCR试剂盒的检测结果具有较好的一致性。
-
关键词
计量学
传染性皮下及造血组织坏死病毒
假病毒标准物质
数字PCR
对虾病毒
不确定度
-
Keywords
metrology
infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus(IHHNV)
pseudovirus nucleic acid reference materials
digital PCR
shrimp viruses
uncertainty
-
分类号
TB99
[机械工程—测试计量技术及仪器]
-
