GPI信号肽序列与B7-1基因的拼接及其真核表达载体的构建和序列分析 被引量：3

1

作者 易平勇 余海 马文学 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第2期152-152,共1页

B7-1提供T细胞激活需要的辅助信号,大多数的肿瘤细胞表面并不表达B7-1分子,这可能是肿瘤逃避机体免疫攻击的原因之一。通过基因转染法,将B7-1基因导入肿瘤细胞中表达,能诱导抗肿瘤免疫反应,但基因转染有其局限性,因此有必要探寻更好的... B7-1提供T细胞激活需要的辅助信号,大多数的肿瘤细胞表面并不表达B7-1分子,这可能是肿瘤逃避机体免疫攻击的原因之一。通过基因转染法,将B7-1基因导入肿瘤细胞中表达,能诱导抗肿瘤免疫反应,但基因转染有其局限性,因此有必要探寻更好的转染法。糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白是通过其羧基末端的GPI结构锚定于细胞膜表面的一类蛋白,人胎盘碱性磷酸酶-1(hPLAP-1)也是一种GPI锚定蛋白,指导蛋白锚定附着的信号是C末端信号肽。 展开更多

关键词 GPI 信号肽序列 肿瘤 免疫治疗 共刺激分子 糖基化磷脂酰肌醇 融合基因 人胎盘碱性磷酸酶

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整体优化的信号肽和人溶菌酶基因在毕赤酵母的高效表达 被引量：4

2

作者 陈珊珊 丁健 +5 位作者 李鑫 刘军 贾禄强 槐强强 孙佼文 史仲平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期20-28,共9页

人源溶菌酶作为一种天然的抑菌活力物质,在畜牧、医药及食品等行业具有潜在的应用价值。本研究将信号肽序列和人源溶菌酶基因碱基序列作为一个整体进行密码子优化。并在优化的信号肽序列2处位置,共新插入39个碱基,构成增长的优化信号肽... 人源溶菌酶作为一种天然的抑菌活力物质,在畜牧、医药及食品等行业具有潜在的应用价值。本研究将信号肽序列和人源溶菌酶基因碱基序列作为一个整体进行密码子优化。并在优化的信号肽序列2处位置,共新插入39个碱基,构成增长的优化信号肽+溶菌酶优化基因。将2种优化的信号肽+溶菌酶基因碱基序列分别插入pPICZαA载体上,并整合到毕赤酵母KM71的基因组上,获得重组子K1(整体优化的α信号肽+人源溶菌酶基因)和K4(整体优化的α信号肽+人源溶菌酶基因又整合了增长信号肽)。摇瓶诱导表达72 h后,离心取上清液,通过Bradford法和比浊法测定发现,K4的蛋白质表达量和酶活力均高于K1。5 L发酵罐下,采用高密度诱导表达策略,诱导54 h后K4的总蛋白质表达量可达3.02 g/L,所表达的人源溶菌酶活力达到324 072.0 U/ml。表明整体优化的α信号肽+人源溶菌酶基因又整合了增长信号肽有利于提高溶菌酶的分泌效率,实现高效表达。 展开更多

关键词 人源溶菌酶 信号肽序列 毕赤酵母 高效表达

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瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因在酿酒酵母中的表达研究 被引量：6

3

作者 丁新丽 黄晶 汪天虹 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期18-22,共5页

将PCR合成的瑞氏木霉 (Trichodermareesei) β 内切葡聚糖酶I(EGI)cDNA基因片断分别插入酵母met1 0和 pgk1启动子和终止子序列之间 ,构建了在不同启动子控制下 ,具有不同拷贝数的eg1表达分泌质粒pRS41 5ME、pRS41 5PE和 pRS42 5PE。通... 将PCR合成的瑞氏木霉 (Trichodermareesei) β 内切葡聚糖酶I(EGI)cDNA基因片断分别插入酵母met1 0和 pgk1启动子和终止子序列之间 ,构建了在不同启动子控制下 ,具有不同拷贝数的eg1表达分泌质粒pRS41 5ME、pRS41 5PE和 pRS42 5PE。通过电转化使重组质粒转移至实验室酿酒酵母H1 5 8菌株中 ,分别得到了 3株酵母转化子H1 p、H2p和H1m。在 3株酵母转化子中 ,重组 β 内切葡聚糖酶I都能在酶自身信号肽序列引导下进行分泌型表达。在YPD培养基中 3株重组酵母生长速率大致相同 ,H1m ,H1 p与H2 p的内切葡聚糖酶活力分别为 70 .4,1 2 6.7和 1 2 5 .0U/mL。 展开更多

关键词 分泌型表达 酶基因 葡聚糖 启动子 拷贝数 重组质粒 酿酒酵母 转化子 电转化 信号肽序列

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Aβ_(1-15)多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果 被引量：5

4

作者 张革 汪华侨 +4 位作者 邹俊涛 李国营 袁群芳 林贤 姚志彬 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期371-376,共6页

【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.... 【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合。【结果】测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8ku的分泌型4×Aβ15蛋白。pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1︰6400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和。【结论】所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件。 展开更多

关键词 多价DNA疫苗 体液免疫 COS-7细胞 pcDNA3.1 ELISA法检测 Western BALB/C鼠 linker 真核表达质粒 BLOT检测 免疫组织化学 抗体平均滴度 基因片段 加强免疫 转基因鼠 AΒ42 PCR技术 信号肽序列 转基因动物 老年性痴呆 基因合成

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禽类催乳素基因的研究概况 被引量：3

5

作者 朱文奇 李慧芳 +2 位作者 宋卫涛 王强 张静 《家禽科学》 2009年第6期46-49,共4页

催乳素（Prolactin，PRL）是由单基因编码23KD的多肽类激素，几乎存在于所有脊椎动物中，主要由垂体前叶嗜酸细胞分泌的，也可由各种免疫细胞、妊娠子宫蜕膜及皮肤细胞等合成和分泌。禽类催乳素前体含229个氨基酸，其中包括30个氨基酸... 催乳素（Prolactin，PRL）是由单基因编码23KD的多肽类激素，几乎存在于所有脊椎动物中，主要由垂体前叶嗜酸细胞分泌的，也可由各种免疫细胞、妊娠子宫蜕膜及皮肤细胞等合成和分泌。禽类催乳素前体含229个氨基酸，其中包括30个氨基酸的信号肽序列和199个氨基酸的PRL成熟蛋白.催乳素具有广泛的生理功能，它不仅具有调节生殖系统的重要作用，还具有调节体内渗透压平衡、内分泌、代谢和免疫系统，引起就巢等功能。 展开更多

关键词 催乳素基因 禽类 细胞分泌 多肽类激素 信号肽序列 氨基酸 基因编码 脊椎动物

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一种新型广谱的原核型分泌表达载体的建立及人表皮生长因子的表达 被引量：1

6

作者 郝春芳 徐虹 +1 位作者 章军 刘仁海 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1192-1197,共6页

通过Cyanobase藻类学数据库查询,从集胞藻6803转译后加工过程中的某些蛋白的分泌信号序列得到了可以用于分泌型表达的信号序列,进一步通过SignalP3.0Server分析软件预验证,从集胞藻6803得到4种不同蛋白的信号序列A、B、C、D,将这些信号... 通过Cyanobase藻类学数据库查询,从集胞藻6803转译后加工过程中的某些蛋白的分泌信号序列得到了可以用于分泌型表达的信号序列,进一步通过SignalP3.0Server分析软件预验证,从集胞藻6803得到4种不同蛋白的信号序列A、B、C、D,将这些信号序列插入pET-His-EGF表达载体hegf基因上游,得到了带有分泌型信号的pS-X系列分泌型表达载体,人表皮生长因子（hEGF）在其中的pS-A载体中实现了分泌型表达,hEGF分泌到周质空间的相对表达量约为1%,在其它3个载体中未见表达。获得的pS-A分泌型表达载体是一种新型分泌型表达载体,它利用蓝藻信号序列作为分泌表达的信号肽,实现了hEGF多肽在大肠杆菌中分泌表达,通过融合白亚细胞定位法处理得到的hEGF多肽在胞质、周质空间和培养基中表达的比例为85∶33∶25（density intensity/mm^2）,利用渗透休克处理方法得到的比例为50∶37∶25。由于A信号序列本身是集胞藻6803膜蛋白（ID：s110172/NCBI-GI：1001433）的分泌信号肽,说明pS-A载体是一种广谱的原核型分泌表达载体。这一结果为实现hEGF在螺旋藻中的分泌型表达奠定了基础。 展开更多

关键词 人表皮生长因子(hEGF) 信号肽序列 分泌型表达 载体 蓝藻

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多基因真核表达载体的构建及其产物的亚细胞定位 被引量：2

7

作者 靳志平 谭晓华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1044-1047,共4页

目的构建一种多基因表达载体,实现同一载体单一启动子的调控下表达多个基因以及这些基因在同一细胞不同细胞器中的定位。方法利用存在于某些病毒核酸序列中的不同2A肽,合成1段包括2个2A肽和不同限制性内切酶位点的多肽序列,形成单一的... 目的构建一种多基因表达载体,实现同一载体单一启动子的调控下表达多个基因以及这些基因在同一细胞不同细胞器中的定位。方法利用存在于某些病毒核酸序列中的不同2A肽,合成1段包括2个2A肽和不同限制性内切酶位点的多肽序列,形成单一的开放读码框,插入真核表达载体pcDNA3.1(-)Myc/His(B)相应的多克隆位点中,然后将带有膜定位的红色荧光蛋白(ERFP)、核定位的绿色荧光蛋白(EGFP)和胞浆定位的黄色荧光蛋白(EYFP)顺序插入2A肽之间的位点中,构建多基因真核表达载体pcDNA3.1 RGY。用脂质体转染小鼠成纤维NIH3T3细胞和人肾胚293细胞,利用流式细胞仪、荧光显微镜和共聚焦显微镜检测各种荧光蛋白的表达和亚细胞定位。结果转染24 h后用流式细胞仪检测,可同时检测到EGFP和ERFP的表达,且两种荧光蛋白的表达率十分接近;荧光显微镜下同时观察到绿色和红色荧光;共聚焦显微镜观察到在单一细胞上同时显示3种荧光,ERFP定位在细胞膜上,EGFP在细胞核中,而EYFP在细胞质中。结论通过串联方式将多个2A肽和基因置于同一个开放读码框中可实现在同一启动子的调控下表达多个基因。此外,在每个基因序列中加入不同的信号肽序列可将相应基因同时靶向不同的细胞器,实现同一细胞中不同的亚细胞定位。 展开更多

关键词 真核表达载体 基因表达 信号肽序列 亚细胞定位 2A肽

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棉花角斑病菌hpaXm基因突变体与互补载体构建 被引量：1

8

作者 王慕瑾 刘悦 +2 位作者 孙超 缪卫国 郑服丛 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期75-81,共7页

为了分析研究Harpin蛋白转运途径,针对来自棉花角斑病菌的HpaXm,构建hpaXm基因突变体和互补载体,根据文献和GenBank中已登录的hpaXm基因全序列及其同源基因hpa1的序列,设计合成多对引物进行PCR扩增,并将扩增片段与载体相连接,用电转化... 为了分析研究Harpin蛋白转运途径,针对来自棉花角斑病菌的HpaXm,构建hpaXm基因突变体和互补载体,根据文献和GenBank中已登录的hpaXm基因全序列及其同源基因hpa1的序列,设计合成多对引物进行PCR扩增,并将扩增片段与载体相连接,用电转化的方式将构建成功的hpaXm基因敲除载体转化Xanthmonas citri subsp.malvacearum,然后测定hpaXm基因突变体在烟草上激发HR的能力。结果得到hpaXm基因上游序列349 bp,hpaXm基因下游序列465 bp;利用重叠PCR将hpaXm基因上下游序列融合,克隆到自杀载体pK18mob的酶切位点BamHI和EcoRI之间,并将pK18mobhpaXm上下游融合片段转化大肠杆菌E.coli DH5α,经卡那霉素平板筛选得到阳性转化子;将hpaXm基因敲除载体转化X.citri subsp.malvacearum,经PCR验证成功敲除hpaXm基因,并发现hpaXm基因突变体在烟草上激发HR的能力要弱于野生型菌株。扩增得到hpaXm基因片段402 bp和信号肽类似序列缺失hpaXm46-402基因片段360 bp,克隆到广宿主载体pHM1的KpnI和SacI酶切位点之间,并将pHM1hpaXm和pHM1hpaXm46-402转化E.coli DH5α,经壮观霉素平板筛选得到阳性转化子。重组质粒经PCR检测、测序鉴定及突变体在烟草上的表型验证,表明hpaXm基因突变体和互补载体构建成功,为hpaXm基因回复突变株的构建和进一步研究信号肽序列缺失对HpaXm蛋白转运的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 HpaXm 信号肽类似序列 突变体 互补载体

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应用果聚糖蔗糖酶(Levansucrase)系统使MuIFN-α-7基因在枯草芽孢杆菌中表达

9

作者 陈玉梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第5期78-78,共1页

用寡核苷酸位点定向诱变法除去基因的信号肽序列,然后将这个基因克隆于蛋白质分泌载体质粒pC194中。

关键词 基因克隆 枯草芽孢杆菌 LEVANSUCRASE MuIFN-α-7 果聚糖 载体质粒 蔗糖酶 启动子 定向诱变 信号肽序列

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激素和活性多肽

10

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第5期50-51,共2页

关键词 融合蛋白 活性多肽 胸腺素 切割位点 克隆载体 寄主细胞 表达载体质粒 生物学活性 信号肽序列 胰岛素原

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激素和活性多肽

11

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第9期75-78,共4页

912999 人类催乳激素在大肠杆菌中的表达和部分纯化[英]/Gilbert,M.S.…∥Int.J.Biochem.-1991,23(1).-107～114[译自DBA,1991,10(3),91-01334] 在大肠杆菌HB101中克隆并表达了一种编码人催乳激素的基因.将编码信号肽序列和全长催乳激... 912999 人类催乳激素在大肠杆菌中的表达和部分纯化[英]/Gilbert,M.S.…∥Int.J.Biochem.-1991,23(1).-107～114[译自DBA,1991,10(3),91-01334] 在大肠杆菌HB101中克隆并表达了一种编码人催乳激素的基因.将编码信号肽序列和全长催乳激素分子的cDNA片段克隆到表达载体质粒pUR291中。 展开更多

关键词 融合蛋白 表达载体质粒 催乳激素 片段克隆 酵母表达质粒 活性多肽 β-葡糖苷酸酶 基因克隆 信号肽序列 载体转化

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