挤压伤大鼠血清促心脏成纤维细胞增殖作用 被引量：2

1

作者 刘水平 陈玉川 +3 位作者 王江峰 成建定 刘小山 李朝晖 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期544-546,共3页

【目的】观察挤压伤大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞的增殖作用。【方法】培养1～3d龄SD大鼠心脏成纤维细胞,观察挤压伤大鼠血清和正常大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞数量、蛋白质含量、犤3H犦-胸腺嘧啶核苷(犤3H犦-TdR)和犤3H犦-脯氨... 【目的】观察挤压伤大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞的增殖作用。【方法】培养1～3d龄SD大鼠心脏成纤维细胞,观察挤压伤大鼠血清和正常大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞数量、蛋白质含量、犤3H犦-胸腺嘧啶核苷(犤3H犦-TdR)和犤3H犦-脯氨酸(犤3H犦-Proline)掺入的影响。【结果】与正常大鼠血清组比较,挤压伤大鼠血清使培养的心脏成纤维细胞的数量(×109/L)、总蛋白含量(μg/2mL)分别由0.33±0.01、163.3±24.1增加至0.50±0.02和324.6±52.2,犤3H犦-Proline和犤3H犦-TdR掺入后测得的每分钟脉冲数则分别由1211.7±140.7、1104.8±113.9上升至2000.7±96.2和2066.2±223.5。【结论】肢体挤压伤大鼠血清可促进培养的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成。 展开更多

关键词 挤压伤 血清 促心脏成纤维细胞增殖作用 蛋白质 胸腺嘧啶核苷 脯氨酸

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辛伐他汀对大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用 被引量：6

2

作者 徐琳 赵连友 +3 位作者 郑强荪 范延红 田建伟 杨学东 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第12期920-922,共3页

目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,流式细胞分析技术(FCM)检测细胞周期,... 目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,流式细胞分析技术(FCM)检测细胞周期,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用。结果(1)随着Sim浓度的增高,CFsMTT比色法D490值呈明显的递减趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组的D490值分别为0.215±0.041和0.163±0.018,均较对照组D490值(0.393±0.048)显著降低(P<0.01);(2)FCM细胞周期分析表明,CFs的S期细胞百分率和细胞增殖指数随Sim刺激浓度的增加而呈递减趋势,G0/G1期细胞百分率呈递增趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组与对照组1×10-7 mol/LAVP比较,差异显著(P<0.01)。结论Sim可抑制AVP诱导的CFs增殖,其作用可能与影响CFs细胞周期有关。 展开更多

关键词 辛伐他汀 血管升压素 心脏成纤维细胞 细胞增殖 高血压 心肌纤维化

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川芎嗪对溶血磷脂酸诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响 被引量：18

3

作者 蔡辉 修春英 +2 位作者 郭郡浩 沈思钰 赵智明 《医学研究生学报》 CAS 2008年第1期31-33,共3页

目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察... 目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响及川芎嗪的干预作用。结果:随着LPA浓度的升高,MTT比色法A490值呈上升趋势。CF分泌的胶原随着LPA浓度和作用时间的增加呈递增趋势。20μg/m l的川芎嗪作用48 h即能明显抑制LPA(10-6μmol/L)诱导的细胞增殖作用(P<0.05)。结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成作用,而川芎嗪能对其产生明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。 展开更多

关键词 溶血磷脂酸 川芎嗪 心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原合成

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染料木素和槲皮素对成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制作用 被引量：8

4

作者 齐荔红 康鲁平 +3 位作者 张俊平 刘福堂 周俭平 周斌 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1166-1168,共3页

目的 :研究染料木素 ( genistein,GE)和槲皮素 ( quercetin,QU)对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法 :用结晶紫染色法测定光密度值检测 NIH3T3成纤维细胞增殖 ,用 3 H-脯氨酸掺入法测定 3 H-脯氨酸掺入 NIH3T3细胞的 Bq值表示胶原... 目的 :研究染料木素 ( genistein,GE)和槲皮素 ( quercetin,QU)对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法 :用结晶紫染色法测定光密度值检测 NIH3T3成纤维细胞增殖 ,用 3 H-脯氨酸掺入法测定 3 H-脯氨酸掺入 NIH3T3细胞的 Bq值表示胶原合成作用。 结果 :GE和 QU都能浓度依赖性抑制血清、血小板源生长因子 ( PDGF )或转化生长因子β1( TGF-β1)刺激的NIH3T3细胞增殖和胶原合成。 结论 :GE和 QU具有体外抑制成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。 展开更多

关键词 染料木素 槲皮素 成纤维细胞 胶原合成 细胞增殖 抑制作用 纤维化疾病

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尾加压素Ⅱ对培养的心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响 被引量：8

5

作者 何艳华 洪介民 +4 位作者 郭衡山 韦建瑞 陈辉 左辉华 李志樑 《第一军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期505-508,共4页

目的观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)在体外对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)基因表达的直接影响,以探讨UⅡ在心力衰竭心肌重塑中的作用。方法以胰酶消化和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠的CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法... 目的观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)在体外对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)基因表达的直接影响,以探讨UⅡ在心力衰竭心肌重塑中的作用。方法以胰酶消化和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠的CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,RT-PCR测定CoL-ⅠmRNA表达水平。结果UⅡ对CFs增殖呈浓度依赖性,随着UⅡ作用浓度的增加,MTT光吸收值呈先升高后降低的趋势,其中1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L的UⅡ作用显著(P<0.05);1×10-7 mol/L、1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L浓度的UⅡ能促进CFs的CoL-ⅠmRNA表达(P<0.01)。结论UⅡ可直接促进CFs的增殖及CoL-ⅠmRNA表达,作用大小与UⅡ浓度有关,提示UⅡ在心力衰竭心肌重塑的病理生理过程中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 尾加压素Ⅱ 培养的细胞 心脏成纤维细胞 增殖 基因表达 I型胶原

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氟伐他汀对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制作用 被引量：11

6

作者 赵峰 戚好文 叶江枫 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期185-188,共4页

目的 :观察氟伐他汀 (fluvastatin,Flu)对体外培养的大鼠肺成纤维细胞 (fibroblast,Fb)增殖的抑制作用。方法 :在体外培养的大鼠肺 Fb中 ,加入 Flu,用计数法和 MTT比色法观察并比较不同浓度的 Flu对培养细胞增殖的抑制作用、对大鼠肺 F... 目的 :观察氟伐他汀 (fluvastatin,Flu)对体外培养的大鼠肺成纤维细胞 (fibroblast,Fb)增殖的抑制作用。方法 :在体外培养的大鼠肺 Fb中 ,加入 Flu,用计数法和 MTT比色法观察并比较不同浓度的 Flu对培养细胞增殖的抑制作用、对大鼠肺 Fb分裂指数及分泌胶原的影响。 结果 :计数法和 MTT比色法均显示 ,Flu对体外培养的大鼠肺 Fb的增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 1 ) ,并呈剂量依赖效应 ,1 0 - 4mol/ L 的 Flu已可使培养细胞的增殖受到完全抑制。培养的大鼠肺 Fb细胞分裂指数及胶原分泌量在 Flu的作用下也有明显降低 (P<0 .0 1 )。结论 :Flu对体外培养的大鼠肺 Fb的增殖及其胶原分泌具有明显的抑制作用 。 展开更多

关键词 氟伐他汀 大鼠 成纤维细胞 抑制作用 细胞增殖 肺间质纤维化

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低氧对心脏成纤维细胞增殖细胞核抗原表达与表型的影响 被引量：4

7

作者 于军 朱妙章 +4 位作者 裴建明 陈宝莹 吕顺艳 董明清 魏启明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1311-1315,T002,共6页

目的 :观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与表型的影响。方法 :分离、纯化、培养乳鼠CFs ,随机分为 3组 :对照组、中度低氧组和重度低氧组 ,以四唑盐 (MTT)比色法检测细胞的增殖情况 ,采用免疫组织... 目的 :观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与表型的影响。方法 :分离、纯化、培养乳鼠CFs ,随机分为 3组 :对照组、中度低氧组和重度低氧组 ,以四唑盐 (MTT)比色法检测细胞的增殖情况 ,采用免疫组织化学的方法检测PCNA的表达情况 ,电镜观察细胞的超微结构 ,并采用激光共聚焦显微镜检测各组细胞内α -actin的表达情况。结果 :中度低氧组MTT的 4 90nm吸光度值 (A490nm)较对照组增加 (18 4±2 5 0 ) % (P <0 0 5 ) ,而重度低氧组A4 90nm值较对照组降低 (15 8± 2 5 0 ) % (P <0 0 5 )。免疫组化结果显示 :对照组CFs的PCNA有一定的基础表达 ,核内阳性反应颗粒较少 ,染色强度为 (92 2± 9 1) %AU ,中度低氧组CFs的PCNA染色强阳性 ,可见密集的阳性反应颗粒 ,染色强度为 (12 8 0± 11 4 ) %AU(P <0 0 5vs对照组 ) ,重度低氧组CFs核内无明显的阳性反应颗粒 ,染色强度为 (89 9± 8 4 ) %AU。透射电镜下 ,正常组CFs呈梭形 ,胞浆内有丰富的粗面内质网和高尔基复合体 ,线粒体和微丝的含量较少 ,无基膜存在 ,呈典型的成纤维细胞表型。中度低氧刺激 72h ,CFs粗面内质网明显减少 ,胞浆内出现大量的微丝 ,以质膜下分布最多 ,呈现肌成纤维细胞表型。重度低氧组CFs内仅有少量的? 展开更多

关键词 缺氧 心脏成纤维细胞 增殖细胞核抗原 表型 肌动蛋白类

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机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞增殖的影响 被引量：7

8

作者 冯雪 陈富林 +1 位作者 林珠 段银钟 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期312-314,共3页

目的 :观察机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞 (PDLFs)增殖能力的影响。方法 :用自行研制的细胞加载系统对PDLFs施以频率为 6次 /min(每次为 5s牵拉、5s松弛 ) ,幅度 12 %的牵张力 ,于加载 2 4、48、96h后 ,通过细胞计数、流式细胞仪检测... 目的 :观察机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞 (PDLFs)增殖能力的影响。方法 :用自行研制的细胞加载系统对PDLFs施以频率为 6次 /min(每次为 5s牵拉、5s松弛 ) ,幅度 12 %的牵张力 ,于加载 2 4、48、96h后 ,通过细胞计数、流式细胞仪检测观察PDLFs增殖能力的改变情况。结果 :在不同的时间点 ,加力组及对照组的细胞数均不断增加 ,在 48h及 96h时加力组结果明显高于对照组。流式细胞仪结果显示在不同时间点加力组处于DNA合成期的细胞数明显高于对照组。结论 :在对培养的人PDLFs施加频率为 6次 /min、幅度 12 %的牵张力时 。 展开更多

关键词 机械牵张作用 牙周膜成纤维细胞 细胞增殖 细胞计数 流式细胞仪

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溶血磷脂酸对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响 被引量：4

9

作者 修春英 蔡辉 +2 位作者 赵智明 郭郡浩 金洁 《医学研究生学报》 CAS 2006年第7期589-591,595,共4页

目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养心脏成纤维细胞(CF)的细胞增殖和胶原合成的影响。方法:用消化法培养新生SD大鼠的CF,实验分为四组。对照组(加含5%小牛血清的DMEM培养液),实验组根据不同浓度的LPA又分为10-6μmol/L组、10-7μmol/L... 目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养心脏成纤维细胞(CF)的细胞增殖和胶原合成的影响。方法:用消化法培养新生SD大鼠的CF,实验分为四组。对照组(加含5%小牛血清的DMEM培养液),实验组根据不同浓度的LPA又分为10-6μmol/L组、10-7μmol/L组和10-8μmol/L组。用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响。结果:①随着LPA浓度的升高,MTT比色法吸光度(A490)值呈上升趋势。在药物作用48 h后,仅有10-6μmol/L组A490值较对照组有显著升高(P<0.05);作用至72 h后,10-8μmol/L组、10-7μmol/L组、10-6μmol/L组A490值均较对照组显著升高(P<0.05);作用至96 h后,各实验组A490值较对照组均有显著升高(P<0.05和P<0.01)。②随着LPA浓度和作用时间的增加,CF分泌的胶原呈递增趋势。LPA作用48 h仅10-6μmol/L组胶原浓度较对照组显著升高(P<0.01);作用至72 h后,10-7μmol/L组、10-6μmol/L组胶原含量较对照组有显著升高(P<0.05和P<0.01);作用至96 h,各实验组胶原含量均较对照组有显著升高,10-6μmol/L组与10-7μmol/L组、10-8μmol/L组之间差异亦有显著性意义(P<0.05)。结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。 展开更多

关键词 溶血磷脂酸 心脏成纤维细胞 增殖 胶原合成

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肉苁蓉多糖对人成纤维细胞的增殖作用 被引量：4

10

作者 高慧 严华 +1 位作者 张洪泉 童鲲 《中成药》 CAS CSCD 1998年第4期43-44,共2页

关键词 肉苁蓉多糖 成纤维细胞 细胞增殖 药理作用

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白介素1α和白介素1受体拮抗剂对培养的Graves’眼眶成纤维细胞增殖作用的影响 被引量：4

11

作者 吴中耀 刘桂琴 +3 位作者 杨华胜 郑健樑 张平 林征 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第6期561-564,共4页

目的　探讨白介素 1α(IL 1α)和白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对培养的Graves’眼病 (GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法　以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞 :不同浓度的IL 1α刺激成纤维细胞48h ;3 0U/ml的IL 1... 目的　探讨白介素 1α(IL 1α)和白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对培养的Graves’眼病 (GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法　以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞 :不同浓度的IL 1α刺激成纤维细胞48h ;3 0U/ml的IL 1α刺激成纤维细胞 2 4～ 72h ;不同浓度的IL 1ra或 /和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 48h ;75ng/ml的IL 1ra和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 2 4～ 72h。用MTT法测定成纤维细胞增殖的刺激或抑制率。结果　IL 1α以剂量和时间依赖的方式刺激GO和正常人眼眶成纤维细胞增殖 ,而IL 1ra以剂量和时间依赖的方式抑制IL 1α诱导的GO和正常人眼眶成纤维细胞的增殖活性 ,刺激和抑制作用在GO和正常人眼眶成纤维细胞之间无明显差异。结论　IL 1ra是IL 1α诱导的人眼眶成纤维细胞增殖的强有力的抑制剂 。 展开更多

关键词 IL—1 正常人眼 眼眶成纤维细胞 IL-1 受体拮抗剂 白介素1 刺激 增殖作用 抑制率 抑制剂

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非诺贝特对心脏成纤维细胞胶原合成的影响及作用机制 被引量：3

12

作者 赵晓燕 赵连友 +1 位作者 苏金林 张兴凯 《医学研究生学报》 CAS 2011年第2期143-147,共5页

目的过氧化物酶增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)具有心血管保护作用,但其对心肌纤维化的影响及作用机制尚不清楚。文中探讨PPARα激动剂非诺贝特(Fenofibrate)对糜酶诱导的心脏成纤维细胞(card... 目的过氧化物酶增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)具有心血管保护作用,但其对心肌纤维化的影响及作用机制尚不清楚。文中探讨PPARα激动剂非诺贝特(Fenofibrate)对糜酶诱导的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CF)胶原合成的影响及细胞内信号转导机制。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CF,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平,Western blot检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/3及Smad7的蛋白表达水平。结果①非诺贝特浓度依赖性地抑制糜酶诱导的CF中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其中50和100μmol/L组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平均较糜酶组显著减少(P<0.01)。②不同浓度的非诺贝特预处理组CF的TGF-β1蛋白表达水平呈浓度依赖性减少,其中50和100μmol/L组均较糜酶组明显减少(P<0.05,P<0.01)。③不同浓度的非诺贝特预处理后,p-Smad2/3蛋白表达水平呈递减趋势,Smad7蛋白表达水平呈递增趋势。结论 PPARα激动剂非诺贝特可抑制糜酶诱导的大鼠CF胶原合成,其机制可能与其下调TGF-β1和p-Smad2/3、上调Smad7蛋白表达有关。 展开更多

关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体Α 非诺贝特 心脏成纤维细胞 胶原 转化生长因子β1 SMAD

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辛伐他汀对血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响 被引量：1

13

作者 徐琳 赵连友 +5 位作者 范延红 田建伟 杨学东 张海涛 陈永清 彭育红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1447-1449,共3页

目的　探讨辛伐他汀 (Simvastatin ,Sim)对血管升压素 (AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响 ,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法　采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺... 目的　探讨辛伐他汀 (Simvastatin ,Sim)对血管升压素 (AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响 ,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法　采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺入法测定DNA合成、四氮唑盐 (MTT)比色法测定细胞数目 ,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用及甲羟戊酸 (Meval onate,MVA)干预的影响。结果　①CFs(2 0 0个细胞 )的3H TdR掺入率随着Sim干预浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6mol/LSim和 1 0 - 5mol/LSim组的3H TdR掺入率分别为 (1 1 75± 2 0 2 6 6 )、(771± 1 6 4 86 )cpm ,明显低于对照组 (1 95 5± 3 72 45 )cpm(P <0 0 1 ) ;②MTT比色法A490 值随Sim浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6、1 0 - 5mol/LSim组的A490 值分别为 0 2 1 5± 0 0 4 1和 0 1 6 3± 0 0 1 8,均较对照组A490值 0 3 93± 0 0 4 8显著降低 (P <0 0 1 ) ;③ 1 0 - 5mol/LSim +1 0 - 3mol/LMVA组的3H TdR掺入率、MTT比色法A490 值分别为 (1 995±3 5 3 83 )cpm和 0 41 8± 0 0 4 5 ,均显著高于 1 0 - 5mol/LSim组 (P <0 0 1 )。结论　辛伐他汀可抑制AVP诱导的CFsDNA的合成和细胞数目增加 ,提示Sim可抑制CFs增殖 ,其机制可能通过甲? 展开更多

关键词 辛伐他汀 甲羟戊酸 血管升压素 心脏成纤维细胞 细胞增殖

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PYK_2小干扰RNA对成年大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响 被引量：1

14

作者 郝嘉 严俊 肖颖彬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期2331-2334,共4页

目的以富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,探讨PYK2小干扰RNA表达载体对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响。方法以pAVU6+27质粒为载体,以PYK2为靶基因,设计并构建短发夹状... 目的以富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,探讨PYK2小干扰RNA表达载体对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响。方法以pAVU6+27质粒为载体,以PYK2为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,行酶切和测序鉴定。用PYK2短发夹状小干扰RNA表达载体转染体外培养的成年大鼠心脏成纤维细胞,反转录聚合酶链反应和Westernblot法检测PYK2基因和蛋白表达的改变,四唑盐比色法和3H-TdR掺入率检测转染后细胞的增殖和DNA合成情况。结果酶切鉴定和测序分析表明靶向PYK2的RNA干扰重组体构建成功;重组体转染CFs后,PYK2的mRNA和蛋白水平较空载体转染的对照组显著下降;重组体转染CFs后MTT比色A值和3H-TdR掺入率均明显低于对照组。结论PYK2小干扰RNA表达载体是抑制心脏成纤维细胞增殖和DNA合成的有效手段,有利于深入探讨PYK2在心肌纤维化发生发展中的作用。 展开更多

关键词 PYK2 RNA干扰 心脏成纤维细胞 细胞增殖 大鼠

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氟非尼酮对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制作用

15

作者 何爱明 李晓晖 李岱 《医药导报》 CAS 2016年第9期915-920,共6页

目的探讨氟非尼酮对转化生长因子(TGF)-β1诱导大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制作用及其机制。方法采用差时贴壁法培养与纯化肺成纤维细胞,传至第3代,分别给予1,3,10 mmol·L-1氟非尼酮预处理。免疫细胞化学法鉴定肺成纤维细胞。采用瞬... 目的探讨氟非尼酮对转化生长因子(TGF)-β1诱导大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制作用及其机制。方法采用差时贴壁法培养与纯化肺成纤维细胞,传至第3代,分别给予1,3,10 mmol·L-1氟非尼酮预处理。免疫细胞化学法鉴定肺成纤维细胞。采用瞬时转染方式进行细胞干扰。Brd U法检测细胞增殖。采用实时-聚合酶链反应及蛋白质印迹技术检测e IF3α、P27mRNA及蛋白水平。结果 TGF-β1能明显促进肺成纤维细胞e IF3α表达,抑制P27mRNA表达,促进肺成纤维细胞增殖。氟非尼酮(3,10 mmol·L-1)能明显抑制肺成纤维细胞e IF3α表达,抑制率分别为66.7%与78.8%,亦能逆转TGF-β1抑制肺成纤维细胞P27的表达,逆转率分别为75.5%与71.3%,故而抑制肺成纤维细胞增殖。结论e IF3α/P27信号通路参与了TGF-β1诱导肺成纤维细胞的增殖作用。氟非尼酮可抑制e IF3α表达,提高P27或(和)直接增加P27表达,从而抑制肺成纤维细胞增殖。 展开更多

关键词 氟非尼酮 肺成纤维细胞 增殖作用

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巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α激活抑制巨噬细胞炎症反应诱导的心脏成纤维细胞活化及迁移 被引量：4

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作者 王文伟 王霞 +2 位作者 孙艳宇 于宝琪 曲爱娟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1921-1928,共8页

目的:研究巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激活对巨噬细胞炎症反应诱导的心脏成纤维细胞活化及迁移的影响。方法:将小鼠骨髓来源巨噬细胞随机分为4组:对照组、PPARα激动剂WY14643(10μmol/L)组、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ;1μ... 目的:研究巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激活对巨噬细胞炎症反应诱导的心脏成纤维细胞活化及迁移的影响。方法:将小鼠骨髓来源巨噬细胞随机分为4组:对照组、PPARα激动剂WY14643(10μmol/L)组、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ;1μmol/L)组和Ang Ⅱ+WY14643组。培养24 h后收集上述各组巨噬细胞的培养上清作为条件培养基(CM),并利用RT-qPCR检测巨噬细胞PPARα及促炎因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达,Western blot检测IL-6和IL-1β的蛋白表达。用上述4组CM培养心脏成纤维细胞24 h,RT-qPCR检测心脏成纤维细胞纤维化标志物I型胶原α2链(Col1a2)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA表达,Western blot检测心脏成纤维细胞中collagen I、collagen ⅡI和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA;由Acta2基因编码)的蛋白水平。心脏成纤维细胞加入上述4组CM后用划痕实验观察迁移情况。结果:Ang Ⅱ显著增加巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达的同时明显降低PPARα的表达,而WY14643显著降低Ang Ⅱ诱导的巨噬细胞炎症因子的表达。AngⅡ也可显著增加巨噬细胞中IL-6和pro-IL-1β的蛋白表达,而WY14643明显降低Ang Ⅱ诱导的巨噬细胞IL-6和pro-IL-1β的蛋白表达。Ang Ⅱ处理后的CM显著促进心脏成纤维细胞迁移及Col1a2、Col3a1和Acta2的mRNA表达,而WY14643处理后的CM则抑制心脏成纤维细胞的迁移以及Col1a2、Col3a1和Acta2的mRNA表达。Ang Ⅱ处理后的CM也促进心脏成纤维细胞collagen I、collagen ⅡI及α-SMA的蛋白表达,而WY14643处理后的CM则抑制心脏成纤维细胞collagen I、collagen ⅡI及α-SMA的蛋白表达。结论:WY14643激活的PPARα通过减轻Ang Ⅱ诱导的巨噬细胞炎症反应而抑制心脏成纤维细胞的活化及迁移。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 巨噬细胞 过氧化物酶体增殖物激活受体Α 心脏成纤维细胞 炎症

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胰岛素样生长因子-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的促生长作用 被引量：9

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作者 代佳灵 何为民 罗梦绮 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期805-810,共6页

背景甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性疾病，目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上。胰岛素样生长因子-1（IGF．1）功能的发挥需要IGF-1受体（IGF-1R）的参与，IGF-1在促甲状腺激素受体（TSHR）的信号传导通路中也起着重... 背景甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性疾病，目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上。胰岛素样生长因子-1（IGF．1）功能的发挥需要IGF-1受体（IGF-1R）的参与，IGF-1在促甲状腺激素受体（TSHR）的信号传导通路中也起着重要作用。目的探讨IGF-1对TAO患者眼眶成纤维细胞（OFs）增生及IGF-1R、TSHR表达的影响，探讨IGF-1在TAO发病机制中的作用。方法收集2016年3-6月于四川大学华西医院行TAO眼眶脂肪切除术取得的眶组织标本17例17份及正常人美容手术取得的眼眶组织4人4份，采用含体积分数5％胎牛血清的DMEM／F12培养液培养OFs。分别于培养液中加入不同质量浓度（O、50、100、125μg／L）的IGF-1，采用MTS比色法绘制OFs生长曲线，评估IGF-1对TAO和正常来源OFs增生的影响；采用流式细胞术测定不同质量浓度IGF-1对TAO和正常来源OFs中IGF-1R、TSHR表达水平的影响。结果TAO患者与正常人来源的OFs均生长良好，呈梭形，细胞质丰富，TAO患者与正常人来源的OFs形态学特点一致。培养的OFs波形蛋白呈阳性反应，结蛋白、S-100、肌红蛋白和角蛋白均呈阴性反应。不同质量浓度IGF-1作用后TAO组和正常组OFs增生均呈逐渐上升趋势，总体比较差异有统计学意义（F分组=219．639，P〈0．001；F质量浓度=17．752，P〈0．001），以100μg／LIGF-1的促进作用最强。0、50、100、125μg／LIGF-1作用后TAO组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0091±0．0087）％、（0．0953±0．0233）％、（0．0837±0．0227）％和（0．0709±0．0241）％，正常组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0023±0．0006）％、（0．0093±0．0012）％、（0．0073±0．0015）％和（0．0083±0．0012）％，其中50、100和125μg／LIGF-1作用后各组OFs中IGF-1R表达量均高于无添加IGF-1者，TAO组OFs细胞中IGF-1R的表达量均明显高于正常组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；0、50、100和125μg／LIGF-1作用后TAO组和正常组OFs中TSHR表达量的总体比较差异均无统计学意义（F分组=0．133，P〉0．05；F质量浓度=0．004，P〉0．05）。结论IGF-1对TAO患者和正常人OFs的生长均有促进作用并能上调OFs中IGF-1R的表达，但其对OFs中TSHR的表达变化无明显影响。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞/代谢 胰岛素样生长因子-1/代谢 胰岛素样生长因子-1受体/代谢 促甲状腺激素受体/代谢 细胞增生/药物作用 细胞培养

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GSTO1抑制TGFβ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和活化

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作者 张彤 谢赛阳 +1 位作者 邓伟 唐其柱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期656-662,共7页

目的:研究谷胱甘肽S-转移酶ω1(GSTO1)在转化生长因子β(TGFβ)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法:分离乳大鼠心脏成纤维细胞并进行体外培养。采用含绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒质粒构建对照(Ad-GFP)或GSTO1过表达(Ad-GST... 目的:研究谷胱甘肽S-转移酶ω1(GSTO1)在转化生长因子β(TGFβ)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法:分离乳大鼠心脏成纤维细胞并进行体外培养。采用含绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒质粒构建对照(Ad-GFP)或GSTO1过表达(Ad-GSTO1)质粒并转染心脏成纤维细胞,再用大鼠TGFβ(rTGFβ)刺激细胞24 h,实验分为4组:Ad-GFP+PBS、Ad-GFP+rTGFβ、Ad-GSTO1+PBS和Ad-GSTO1+rTGFβ。运用qPCR和免疫荧光染色确定转染的有效性;Western blot检测GSTO1蛋白表达;划痕实验和EdU掺入实验评估细胞迁移和增殖;CCK-8实验评估细胞活力;Western blot和细胞免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)和纤连蛋白(FN)的表达水平,并检测心脏成纤维细胞内P38 MAPK和Smad3信号通路相关蛋白水平。结果:与Ad-GFP+rTGFβ组相比,GSTO1过表达抑制TGFβ诱导的心脏成纤维细胞增殖(P<0.05),降低TGFβ刺激后α-SMA、Col I和FN的表达水平(P<0.05),抑制P38 MAPK/Smad3信号通路激活(P<0.05)。结论:GSTO1过表达通过抑制P38 MAPK/Smad3信号通路而阻遏TGFβ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和活化。 展开更多

关键词 心肌纤维化 谷胱甘肽S-转移酶ω1 心脏成纤维细胞 转化生长因子Β 细胞增殖

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噻唑烷二酮类胰岛素增敏药和LOX-1对心脏成纤维细胞功能的调节作用(英文)

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作者 陈家伟 胡长平 Jawahar L.Mehta 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期939-948,共10页

心脏成纤维细胞在心脏重构中起重要作用。在各种促纤维化因素(如前炎症因子、缺氧-复氧、压力超负荷、衰老)刺激下,心脏成纤维细胞增殖、迁移、激活,导致细胞基质成分的积聚、心脏肥厚和僵硬。过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPAR-γ)的配... 心脏成纤维细胞在心脏重构中起重要作用。在各种促纤维化因素(如前炎症因子、缺氧-复氧、压力超负荷、衰老)刺激下,心脏成纤维细胞增殖、迁移、激活,导致细胞基质成分的积聚、心脏肥厚和僵硬。过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPAR-γ)的配体,特别是噻唑烷二酮类胰岛素增敏药,在病理条件下可调节心脏成纤维细胞的功能以及心脏重构的发展,然而未发现噻唑烷二酮类胰岛素增敏药对心脏衰竭的有益作用。噻唑烷二酮类胰岛素增敏药调节心脏成纤维细胞功能和心脏重构的确切信号通路未完全阐明,现有证据提示涉及氧化应激及相关信号途径。此外,PPAR-γ和植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)在其中起重要作用。 展开更多

关键词 心脏成纤维细胞 噻唑烷二酮类胰岛素增敏药 植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 过氧化物酶增殖体激活受体Γ

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四环素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用 被引量：5

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作者 葛少华 杨丕山 +3 位作者 赵宁 戚向敏 孙钦峰 王艳 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期376-378,共3页

目的 探讨四环素对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的生物学作用。方法 将不同浓度的四环素(1、5、20、100、500、2 500 μg/ml)加入体外培养的HPDLFs中,孵育2 d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法... 目的 探讨四环素对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的生物学作用。方法 将不同浓度的四环素(1、5、20、100、500、2 500 μg/ml)加入体外培养的HPDLFs中,孵育2 d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺入法,分别检测四环素对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1-100μg／ml的浓度范围内,细胞形态呈正常的梭形或纺锤形。在20-100μg/ml的浓度范围内,四环素可促进HPDLFs的增殖及生物合成(P<0.01)。当四环素的浓度增至2 500μg／ml,不仅使细胞的镜下形态发生了明显改变,而且严重抑制了细胞的生物学活性。结论 在合适的浓度范围内,四环素能促进HPDLFs的增殖及生物合成,而浓度过高则具有细胞毒性。 展开更多

关键词 四环素 人牙周膜成纤维细胞 生物学作用 细胞形态 体外培养 增殖 ^3H-TdR掺入法 生物合成 形态发生 蛋白合成

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