目的研究HMG20A在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展和转移中的功能与机制。方法在不同转移能力和遗传背景的肝癌细胞Huh7和HCCLM3中分别构建HMG20A过表达和敲低稳定株,通过实时定量PCR(real time quantitative PCR,qPCR...目的研究HMG20A在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展和转移中的功能与机制。方法在不同转移能力和遗传背景的肝癌细胞Huh7和HCCLM3中分别构建HMG20A过表达和敲低稳定株,通过实时定量PCR(real time quantitative PCR,qPCR)验证过表达和敲低该基因的效果。用CCK8试剂盒检测HMG20A对肝癌细胞增殖能力的影响,利用Transwell小室分析HMG20A调控肝癌细胞转移的能力。借助Western blot和qPCR分析HMG20A调控肝癌增殖和转移的机制。结果体外实验表明,HMG20A能够促进肝癌细胞的体外增殖和迁移,显著上调促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路中p38(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)的活性和表达水平,同时上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的标志物Vimentin、抗平滑肌抗体(anti-smooth muscle antibody,alpha-SMA)、N-cadherin受到显著的正调控,E-cadherin受到显著负调控。结论 HMG20A可能通过促进EMT进程和MAPK通路促进肝癌细胞的体外增殖与迁移。展开更多
以人自发性永生化角质形成细胞系(Ha Ca T)细胞为材料,通过CCK8和蛋白印迹法分别测定不同剂量长波紫外线(ultraviolet A,UVA)、不同浓度丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSⅡA),以及UVA和TSⅡA共同作用下的细胞活力和促分裂素原活化蛋白激酶(mi...以人自发性永生化角质形成细胞系(Ha Ca T)细胞为材料,通过CCK8和蛋白印迹法分别测定不同剂量长波紫外线(ultraviolet A,UVA)、不同浓度丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSⅡA),以及UVA和TSⅡA共同作用下的细胞活力和促分裂素原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)信号通路蛋白(p38,JNK和Erk)磷酸化水平.结果表明:在10 J/cm2的UVA照射下,细胞活力为对照组的70%左右,在20 J/cm2的UVA照射下,细胞活力仅为对照组的55%左右;低浓度的TSⅡA在正常情况下对细胞活力无影响,高浓度(85μmol/L)TSⅡA处理组的细胞活力约为对照组的70%左右.与TSⅡA或UVA单独处理相比,二者共同作用下细胞活力大大降低且差异极其显著.UVA照射提高了MAPK信号通路中的p38和JNK磷酸化水平,但是对Erk磷酸化水平没有影响;而TSⅡA可以显著提高低辐射剂量(2 J/cm2)UVA诱导下的p38和JNK的磷酸化水平.这说明UVA促进Ha Ca T细胞凋亡是通过提高p38和JNK磷酸化水平来实现的;而TSⅡA可以提高p38和JNK磷酸化水平,进一步加速UVA诱导的Ha Ca T细胞凋亡.展开更多
文摘以人自发性永生化角质形成细胞系(Ha Ca T)细胞为材料,通过CCK8和蛋白印迹法分别测定不同剂量长波紫外线(ultraviolet A,UVA)、不同浓度丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSⅡA),以及UVA和TSⅡA共同作用下的细胞活力和促分裂素原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)信号通路蛋白(p38,JNK和Erk)磷酸化水平.结果表明:在10 J/cm2的UVA照射下,细胞活力为对照组的70%左右,在20 J/cm2的UVA照射下,细胞活力仅为对照组的55%左右;低浓度的TSⅡA在正常情况下对细胞活力无影响,高浓度(85μmol/L)TSⅡA处理组的细胞活力约为对照组的70%左右.与TSⅡA或UVA单独处理相比,二者共同作用下细胞活力大大降低且差异极其显著.UVA照射提高了MAPK信号通路中的p38和JNK磷酸化水平,但是对Erk磷酸化水平没有影响;而TSⅡA可以显著提高低辐射剂量(2 J/cm2)UVA诱导下的p38和JNK的磷酸化水平.这说明UVA促进Ha Ca T细胞凋亡是通过提高p38和JNK磷酸化水平来实现的;而TSⅡA可以提高p38和JNK磷酸化水平,进一步加速UVA诱导的Ha Ca T细胞凋亡.
