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抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值 被引量：11
1
作者 孔小祥 李芳秋 +3 位作者 王仕钦 史利宁 邵海枫 王卫萍 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期413-415,共3页
目的利用白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质为抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶IgG类抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值。方法收集各类确诊IC患者(66例)和白念珠菌定植者(32例)血清,用重组白念珠菌烯醇化酶包... 目的利用白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质为抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶IgG类抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值。方法收集各类确诊IC患者(66例)和白念珠菌定植者(32例)血清,用重组白念珠菌烯醇化酶包被ELISA微孔板,测定血清中的抗烯醇化酶抗体,确定cut off值并对方法的精密度和特异性进行考察。结果以重组烯醇化酶抗原建立的ELISA法批内变异系数(CV)为5.7%,批间CV为14.6%;重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为93.0%。经ROC曲线分析,选择吸光度值0.37作为cut off值,对IC的诊断敏感性为77.3%,特异性为98.0%。念珠菌定植者阳性率为31.3%(10/32),IC患者阳性率为77.3%(51/66),两组差异有统计学意义(P<0.05)。动态观察发现,IC患者中47.0%(31/66)可以在血培养阳性前检测到抗烯醇化酶抗体。结论建立了检测抗白念珠菌烯醇化酶抗体的ELISA法,在IC早期诊断中具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 烯醇化酶 抗体 酶联免疫吸附法
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侵袭性念珠菌病的实验室诊断 被引量：6
2
作者 葛一平 刘维达 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期100-102,共3页
关键词 侵袭性念珠菌病 实验室诊断 血清学诊断 分子生物学诊断
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侵袭性念珠菌病患者抗烯醇化酶抗体水平升降及影响因素 被引量：1
3
作者 李芳秋 胡毓安 +5 位作者 史利宁 廖红 李伟 张国勇 刘倩 商秀娟 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期817-820,共4页
目的评估抗念珠菌烯醇化酶（enolase,Eno）抗体（抗Eno）对侵袭性念珠菌病（invasive candidiasis,IC）的诊断价值,分析IC患者体内抗Eno水平变化趋势及影响因素。方法连续收集外科重症监护病房（ICU）IC易感患者从入住ICU当天到转出ICU... 目的评估抗念珠菌烯醇化酶（enolase,Eno）抗体（抗Eno）对侵袭性念珠菌病（invasive candidiasis,IC）的诊断价值,分析IC患者体内抗Eno水平变化趋势及影响因素。方法连续收集外科重症监护病房（ICU）IC易感患者从入住ICU当天到转出ICU或死亡的血清样本,3-5 d 1份（共收集血清1 200份,每例患者1-26份不等）。用ELISA法测定抗Eno抗体。结合念珠菌培养结果,观察抗体水平首次升高、下降的时间及影响因素。结果 307例临床显示脓毒症患者中,68例抗Eno阳性,34例念珠菌培养阳性。抗体与念珠菌培养共同阳性者21例,其中半数以上患者的抗Eno水平升高出现在培养结果阳性前;高水平抗Eno在30-60 d下降至临界值以下。47例抗体阳性但培养阴性患者中,预防用抗真菌药22例（46.8%）;13例抗体阴性的确诊病例中,11例使用糖皮质激素。结论抗Eno诊断IC的敏感性高于念珠菌培养,特别是对于预防性用抗真菌药的患者;抗体水平首次升高出现在IC早期,随后下降,使用免疫抑制剂可干扰抗体检出。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 念珠菌烯醇化酶 抗体 诊断
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用重组抗原诊断侵袭性念珠菌病 被引量：2
4
作者 陆静芬 史利宁 李芳秋 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期213-215,共3页
侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)缺乏特异性临床症状和快速准确的诊断方法,迄今IC的诊断仍很困难。检测血清中的特异性念珠菌抗体有助于IC的诊断。但传统检测抗体的方法使用粗制真菌抗原,存在重复性差和交叉反应等问题。用分... 侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)缺乏特异性临床症状和快速准确的诊断方法,迄今IC的诊断仍很困难。检测血清中的特异性念珠菌抗体有助于IC的诊断。但传统检测抗体的方法使用粗制真菌抗原,存在重复性差和交叉反应等问题。用分子克隆技术制备的重组抗原易于大量生产,且无翻译后修饰。将其应用于血清抗体检测,既消除了交叉反应,又易于方法的标准化,为IC早期诊断提供了新的诊断途径。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 重组抗原 抗体检测
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白念珠菌β-葡萄糖苷酶2的原核细胞表达、鉴定及免疫反应性 被引量：1
5
作者 贺政新 冉向阳 +2 位作者 陈晶 王宪灵 侯天文 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期59-61,共3页
目的构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2(BGL2)的原核细胞表达质粒,诱导其表达后加以鉴定,并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因,插入原核细胞表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌(E.co... 目的构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2(BGL2)的原核细胞表达质粒,诱导其表达后加以鉴定,并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因,插入原核细胞表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌(E.coli)BL21,经IPTG诱导表达后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测蛋白质的表达情况,梯度透析法对包涵体蛋白质复性,用抗His标签单克隆抗体鉴定。用临床侵袭性念珠菌病(IC)患者血清判定重组蛋白质的免疫反应性。结果成功构建原核细胞表达质粒pET30a-bgl2,诱导后的重组蛋白质以包涵体形式表达,经梯度透析复性成功。重组蛋白质能被抗His标签抗体识别,并与IC患者血清有良好的反应性。结论用原核细胞表达体系成功表达了白念珠菌BGL2,该蛋白质具有良好的免疫反应性,为进一步研究其在IC诊断中的作用打下基础。 展开更多
关键词 白念珠菌 原核细胞表达 β-葡萄糖苷酶2 侵袭性念珠菌病
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白色念珠菌致病机制研究进展 被引量：3
6
作者 骆阳 徐兴伟 嵇武 《山东医药》 CAS 2023年第29期111-114,共4页
白色念珠菌是定植于肠道的一种可以造成体表或深部感染的条件致病性优势共生真菌。当机体免疫功能正常时,白色念珠菌表面抗原及代谢产物可以对机体免疫系统起到塑造作用,与宿主形成互惠共生的局面;但当机体免疫功能低下时,白色念珠菌便... 白色念珠菌是定植于肠道的一种可以造成体表或深部感染的条件致病性优势共生真菌。当机体免疫功能正常时,白色念珠菌表面抗原及代谢产物可以对机体免疫系统起到塑造作用,与宿主形成互惠共生的局面;但当机体免疫功能低下时,白色念珠菌便会成为致病性真菌,通过形成菌丝体、分泌念珠菌溶素及分泌细胞外囊泡等多种机制引起感染,甚至侵入血流造成播散性念珠菌病。深入探究白色念珠菌的致病机制对于进一步认识真菌,探寻新的治疗方法具有重要意义。 展开更多
关键词 肠道真菌 白色念珠菌 菌丝 念珠菌溶素 细胞外囊泡 侵袭性念珠菌病
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白色念珠菌烯醇化酶免疫磁珠定量检测方法的建立 被引量：9
7
作者 胡毓安 史利宁 +3 位作者 李芳秋 李伟 马春芳 年娜 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第6期568-572,共5页
目的侵袭性念珠菌病临床致死率较高,而白色念珠菌为最常见致病菌。建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶（enolase,Eno）的免疫磁珠方法,提高侵袭性念珠菌感染的实验室诊断水平。方法将白色念珠菌Eno单抗耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶... 目的侵袭性念珠菌病临床致死率较高,而白色念珠菌为最常见致病菌。建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶（enolase,Eno）的免疫磁珠方法,提高侵袭性念珠菌感染的实验室诊断水平。方法将白色念珠菌Eno单抗耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶标记羊抗Eno作为检测抗体,利用重组白色念珠菌Eno蛋白作为标准品评价该方法的精密度、特异性、线性范围、最低检测下限等性能指标。用建立的免疫磁珠方法检测不同真菌培养上清中Eno水平。结果 Eno浓度为25 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间精密度分别为4.54%、5.87%和5.26%、8.82%。最低检出下限为0.5 ng/mL,线性范围为0.5~50 ng/mL。白色念珠菌37℃培养24 h的上清中Eno含量为3.89 ng/mL,培养120 h的Eno水平上升至37.89 ng/mL,Eno水平与白色念珠菌菌丝含量呈正相关。该方法与近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新型隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。结论成功建立了定量检测白色念珠菌Eno的免疫磁珠法,与前期建立的定性ELISA相比,免疫磁珠法更为简便、准确、敏感,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 白色念珠菌 烯醇化酶 免疫磁珠 定量检测
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双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体 被引量：4
8
作者 陈笑 王颖 +3 位作者 黄梅 胡毓安 史利宁 李芳秋 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第12期924-926,共3页
目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度... 目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 血清学诊断 烯醇化酶抗体 双抗原夹心ELISA法
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白念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：4
9
作者 胡毓安 李芳秋 +1 位作者 马春芳 年娜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期565-567,574,共4页
目的建立检测白念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。方法将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建... 目的建立检测白念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。方法将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建立检测Eno的ELISA法,对方法的精密度、特异性、最低检测限等指标进行评价。用该法检测白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母等不同真菌培养上清中Eno水平。结果 Eno浓度为20 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间变异系数(CV)分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%;最低检测限为1.25ng/mL。本法可从白念珠菌37℃培养24 h后的上清中检出Eno,Eno含量与白念珠菌菌丝含量呈正相关。本法对近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。结论建立的检测白念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA方法有较好的特异性,可用于评价Eno检测在侵袭性白念珠菌感染中的诊断价值。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 白念珠菌 烯醇化酶 双抗体夹心酶联免疫吸附试验
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检测3种侵袭性真菌感染相关抗体的蛋白质芯片法 被引量：2
10
作者 马春芳 李芳秋 +4 位作者 胡毓安 史利宁 韩丹丹 廖红 李伟 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期825-828,共4页
目的用念珠菌烯醇化酶(Eno)、果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)及烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)3种基因重组蛋白质,建立检测这3种蛋白质特异性抗体的蛋白质芯片法,并进行临床应用评价。方法用重组Eno、Fba1和TR作为固相抗原构建蛋白质芯片。对芯片... 目的用念珠菌烯醇化酶(Eno)、果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)及烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)3种基因重组蛋白质,建立检测这3种蛋白质特异性抗体的蛋白质芯片法,并进行临床应用评价。方法用重组Eno、Fba1和TR作为固相抗原构建蛋白质芯片。对芯片制备及血清中相应抗体测定的反应条件进行优化。对方法的重复性、稳定性及特异性进行考察,并测定临床确诊的侵袭性念珠菌病(IC)、侵袭性曲霉病(IA)患者血清中的相应抗体。结果蛋白质芯片以硝酸纤维素膜为固相载体,以Tris-HCl为载样液,重组Eno、Fba1、TR最适点阵浓度分别为0.5 mg/mL、0.04 mg/mL和1.0 mg/mL,用含50 g/L脱脂奶粉的PBS溶液封闭,待测血清稀释度为1∶10。抗Eno抗体和抗Fba1抗体诊断IC的敏感性和特异性分别为67.6%(71/105)和96.5%(299/310),64.8%(68/105)和90.3%(280/310);联合检测抗Eno抗体和抗Fba1抗体,可将敏感性提高至81.0%。抗TR抗体诊断IA的敏感性为71.4%(30/42),特异性为98.1%(366/373)。结论建立了同时检测两种真菌的3种不同抗体的蛋白质芯片方法,敏感性尚可,可用于高危人群的筛查。 展开更多
关键词 蛋白质芯片 抗体 侵袭性念珠菌病 侵袭性曲霉病
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