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黄颡鱼实时荧光RPA及侧向流RPA试纸条快速现场鉴定方法的建立与应用
1
作者
林玉
张旻
+11 位作者
王娜
何舜平
张辉
唐永凯
方成池
景宏丽
张浪
沙航
段志强
王宽
吕继洲
吴绍强
《水生生物学报》
北大核心
2025年第4期120-128,共9页
研究以黄颡鱼为目标对象,基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)等温扩增技术,开发了实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条两种现场快速检测方法。这些方法能够用于快速、准确和灵敏地实时检测出黄颡鱼DNA。首先,...
研究以黄颡鱼为目标对象,基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)等温扩增技术,开发了实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条两种现场快速检测方法。这些方法能够用于快速、准确和灵敏地实时检测出黄颡鱼DNA。首先,通过对黄颡鱼及其近缘物种的鱼类线粒体基因组序列进行对比分析,针对COI基因保守区域,设计了特异性探针和引物。测试结果显示,在37℃条件下,实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条都具有良好的特异性。实时荧光型RPA方法能够在20min内完成黄颡鱼DNA的检测,且最低检测限可以达到102拷贝数/反应;而侧向流RPA试纸条的操作更加便捷,能够在10min内可完成对102低拷贝数的黄颡鱼DNA的扩增和鉴定。应用这两种RPA检测技术对149份长江流域常见鱼类进行现场检测,两种方法均显示出较高的准确性(准确率100%)。因此,研究开发的两种用于检测黄颡鱼的实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条方法,拥有操作简便、结果直观、准确率高、不依赖实验室仪器设备等优势,具有良好的现场快速检测应用前景。此外,其克服了形态学物种鉴定专业门槛高、难以鉴定残破组织样品的问题,检测靶标可跨越卵、鱼苗、成鱼等全生命周期,为水产品监管执法提供技术手段。
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关键词
快速物种鉴定
重组酶聚合酶扩增
实时荧光型
rpa
侧向流rpa试纸条
黄颡鱼
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职称材料
基于RPA-侧向流试纸条技术的单核细胞增生李斯特氏菌快检技术
2
作者
曹悦
李龙
+5 位作者
索一平
李庆尧
王青龙
张爽
邢超
宋丽萍
《分析测试学报》
2025年第11期2223-2228,共6页
基于重组聚合酶扩增(RPA)-侧向流试纸条技术(LFS),开发了针对单核细胞增生李斯特氏菌(单增李斯特氏菌)的快速检测技术,并对该方法的特异性、灵敏度和检出限等性能指标进行了系统评估。结果显示,RPA扩增15 min后,侧向流试纸条的检测灵敏...
基于重组聚合酶扩增(RPA)-侧向流试纸条技术(LFS),开发了针对单核细胞增生李斯特氏菌(单增李斯特氏菌)的快速检测技术,并对该方法的特异性、灵敏度和检出限等性能指标进行了系统评估。结果显示,RPA扩增15 min后,侧向流试纸条的检测灵敏度为6.5×10^(2)CFU/mL;对人工污染样品进行8 h增菌后,检出限可达1 CFU/mL。所建立的快检方法无需大型实验设备、操作简单,检测人员进行简单培训即可在20 min内完成单增李斯特氏菌的检测工作,为食品生产企业从源头加强生产环境中单增李斯特氏菌的监控提供了技术支持,有助于提升整个行业食品安全质量控制水平。
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关键词
食源性致病菌
重组聚合酶扩增(
rpa
)-
侧向
流
试纸
条
单核细胞增生李斯特氏菌
食品安全质量控制水平
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职称材料
题名
黄颡鱼实时荧光RPA及侧向流RPA试纸条快速现场鉴定方法的建立与应用
1
作者
林玉
张旻
王娜
何舜平
张辉
唐永凯
方成池
景宏丽
张浪
沙航
段志强
王宽
吕继洲
吴绍强
机构
中国检验检疫科学研究院
三亚中国检科院生物安全中心
国家市场监督管理总局技术创新中心(动植物产品质量与安全)
中国科学院水生生物研究所
中国水产科学研究院长江水产研究所
中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
山东舜丰生物科技有限公司
出处
《水生生物学报》
北大核心
2025年第4期120-128,共9页
基金
“十四五”国家重点研发计划(2022YFF0608201)
国家市场监督管理总局科技创新人才计划(QNBJ202324)
中国检验检疫科学研究院基本科研业务费项目(2022JK43)资助。
文摘
研究以黄颡鱼为目标对象,基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)等温扩增技术,开发了实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条两种现场快速检测方法。这些方法能够用于快速、准确和灵敏地实时检测出黄颡鱼DNA。首先,通过对黄颡鱼及其近缘物种的鱼类线粒体基因组序列进行对比分析,针对COI基因保守区域,设计了特异性探针和引物。测试结果显示,在37℃条件下,实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条都具有良好的特异性。实时荧光型RPA方法能够在20min内完成黄颡鱼DNA的检测,且最低检测限可以达到102拷贝数/反应;而侧向流RPA试纸条的操作更加便捷,能够在10min内可完成对102低拷贝数的黄颡鱼DNA的扩增和鉴定。应用这两种RPA检测技术对149份长江流域常见鱼类进行现场检测,两种方法均显示出较高的准确性(准确率100%)。因此,研究开发的两种用于检测黄颡鱼的实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条方法,拥有操作简便、结果直观、准确率高、不依赖实验室仪器设备等优势,具有良好的现场快速检测应用前景。此外,其克服了形态学物种鉴定专业门槛高、难以鉴定残破组织样品的问题,检测靶标可跨越卵、鱼苗、成鱼等全生命周期,为水产品监管执法提供技术手段。
关键词
快速物种鉴定
重组酶聚合酶扩增
实时荧光型
rpa
侧向流rpa试纸条
黄颡鱼
Keywords
Rapid species identification
Recombinase polymerase amplification
RT-
rpa
rpa
-LFD
Pelteobagrus fulvidraco
分类号
Q33 [生物学—遗传学]
S932.4 [农业科学—渔业资源]
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职称材料
题名
基于RPA-侧向流试纸条技术的单核细胞增生李斯特氏菌快检技术
2
作者
曹悦
李龙
索一平
李庆尧
王青龙
张爽
邢超
宋丽萍
机构
北京市食品检验研究院(北京市食品安全监控和风险评估中心)国家市场监管重点实验室(食品安全重大综合保障关键技术)
出处
《分析测试学报》
2025年第11期2223-2228,共6页
基金
国家重点研发计划项目资助(SQ2022YFF1100056)。
文摘
基于重组聚合酶扩增(RPA)-侧向流试纸条技术(LFS),开发了针对单核细胞增生李斯特氏菌(单增李斯特氏菌)的快速检测技术,并对该方法的特异性、灵敏度和检出限等性能指标进行了系统评估。结果显示,RPA扩增15 min后,侧向流试纸条的检测灵敏度为6.5×10^(2)CFU/mL;对人工污染样品进行8 h增菌后,检出限可达1 CFU/mL。所建立的快检方法无需大型实验设备、操作简单,检测人员进行简单培训即可在20 min内完成单增李斯特氏菌的检测工作,为食品生产企业从源头加强生产环境中单增李斯特氏菌的监控提供了技术支持,有助于提升整个行业食品安全质量控制水平。
关键词
食源性致病菌
重组聚合酶扩增(
rpa
)-
侧向
流
试纸
条
单核细胞增生李斯特氏菌
食品安全质量控制水平
Keywords
foodborne pathogens
recombinase polymerase amplification(
rpa
)-lateral flow strip
Listeria monocytogenes
food safety quality control level
分类号
O615.4 [理学]
TS201.6 [理学—无机化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黄颡鱼实时荧光RPA及侧向流RPA试纸条快速现场鉴定方法的建立与应用
林玉
张旻
王娜
何舜平
张辉
唐永凯
方成池
景宏丽
张浪
沙航
段志强
王宽
吕继洲
吴绍强
《水生生物学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于RPA-侧向流试纸条技术的单核细胞增生李斯特氏菌快检技术
曹悦
李龙
索一平
李庆尧
王青龙
张爽
邢超
宋丽萍
《分析测试学报》
2025
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职称材料
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