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黄颡鱼实时荧光RPA及侧向流RPA试纸条快速现场鉴定方法的建立与应用
1
作者
林玉
张旻
+11 位作者
王娜
何舜平
张辉
唐永凯
方成池
景宏丽
张浪
沙航
段志强
王宽
吕继洲
吴绍强
《水生生物学报》
北大核心
2025年第4期120-128,共9页
研究以黄颡鱼为目标对象,基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)等温扩增技术,开发了实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条两种现场快速检测方法。这些方法能够用于快速、准确和灵敏地实时检测出黄颡鱼DNA。首先,...
研究以黄颡鱼为目标对象,基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)等温扩增技术,开发了实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条两种现场快速检测方法。这些方法能够用于快速、准确和灵敏地实时检测出黄颡鱼DNA。首先,通过对黄颡鱼及其近缘物种的鱼类线粒体基因组序列进行对比分析,针对COI基因保守区域,设计了特异性探针和引物。测试结果显示,在37℃条件下,实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条都具有良好的特异性。实时荧光型RPA方法能够在20min内完成黄颡鱼DNA的检测,且最低检测限可以达到102拷贝数/反应;而侧向流RPA试纸条的操作更加便捷,能够在10min内可完成对102低拷贝数的黄颡鱼DNA的扩增和鉴定。应用这两种RPA检测技术对149份长江流域常见鱼类进行现场检测,两种方法均显示出较高的准确性(准确率100%)。因此,研究开发的两种用于检测黄颡鱼的实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条方法,拥有操作简便、结果直观、准确率高、不依赖实验室仪器设备等优势,具有良好的现场快速检测应用前景。此外,其克服了形态学物种鉴定专业门槛高、难以鉴定残破组织样品的问题,检测靶标可跨越卵、鱼苗、成鱼等全生命周期,为水产品监管执法提供技术手段。
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关键词
快速物种鉴定
重组酶聚合酶扩增
实时荧光型
rpa
侧向流rpa试纸条
黄颡鱼
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职称材料
题名
黄颡鱼实时荧光RPA及侧向流RPA试纸条快速现场鉴定方法的建立与应用
1
作者
林玉
张旻
王娜
何舜平
张辉
唐永凯
方成池
景宏丽
张浪
沙航
段志强
王宽
吕继洲
吴绍强
机构
中国检验检疫科学研究院
三亚中国检科院生物安全中心
国家市场监督管理总局技术创新中心(动植物产品质量与安全)
中国科学院水生生物研究所
中国水产科学研究院长江水产研究所
中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
山东舜丰生物科技有限公司
出处
《水生生物学报》
北大核心
2025年第4期120-128,共9页
基金
“十四五”国家重点研发计划(2022YFF0608201)
国家市场监督管理总局科技创新人才计划(QNBJ202324)
中国检验检疫科学研究院基本科研业务费项目(2022JK43)资助。
文摘
研究以黄颡鱼为目标对象,基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)等温扩增技术,开发了实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条两种现场快速检测方法。这些方法能够用于快速、准确和灵敏地实时检测出黄颡鱼DNA。首先,通过对黄颡鱼及其近缘物种的鱼类线粒体基因组序列进行对比分析,针对COI基因保守区域,设计了特异性探针和引物。测试结果显示,在37℃条件下,实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条都具有良好的特异性。实时荧光型RPA方法能够在20min内完成黄颡鱼DNA的检测,且最低检测限可以达到102拷贝数/反应;而侧向流RPA试纸条的操作更加便捷,能够在10min内可完成对102低拷贝数的黄颡鱼DNA的扩增和鉴定。应用这两种RPA检测技术对149份长江流域常见鱼类进行现场检测,两种方法均显示出较高的准确性(准确率100%)。因此,研究开发的两种用于检测黄颡鱼的实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条方法,拥有操作简便、结果直观、准确率高、不依赖实验室仪器设备等优势,具有良好的现场快速检测应用前景。此外,其克服了形态学物种鉴定专业门槛高、难以鉴定残破组织样品的问题,检测靶标可跨越卵、鱼苗、成鱼等全生命周期,为水产品监管执法提供技术手段。
关键词
快速物种鉴定
重组酶聚合酶扩增
实时荧光型
rpa
侧向流rpa试纸条
黄颡鱼
Keywords
Rapid species identification
Recombinase polymerase amplification
RT-
rpa
rpa
-LFD
Pelteobagrus fulvidraco
分类号
Q33 [生物学—遗传学]
S932.4 [农业科学—渔业资源]
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出处
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1
黄颡鱼实时荧光RPA及侧向流RPA试纸条快速现场鉴定方法的建立与应用
林玉
张旻
王娜
何舜平
张辉
唐永凯
方成池
景宏丽
张浪
沙航
段志强
王宽
吕继洲
吴绍强
《水生生物学报》
北大核心
2025
0
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