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弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD快速检测方法的建立及应用
被引量：
2
1
作者
王姝然
范厚勇
+3 位作者
徐嘉楠
周天琦
许丹
郑跃平
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期241-249,共9页
为建立一种针对弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)敏感性高、特异性强的临床快速检测方法,根据该菌定居因子基因cfa的保守序列,设计特异性引物,采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),并结合琼脂糖...
为建立一种针对弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)敏感性高、特异性强的临床快速检测方法,根据该菌定居因子基因cfa的保守序列,设计特异性引物,采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),并结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)方法进行反应条件的优化及特异性与灵敏度的检测。结果表明:本研究中所建立的弗氏柠檬酸杆菌重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸条(RPA-LFD)快速检测方法,在38℃条件下扩增20 min后,能特异性地检测到弗氏柠檬酸杆菌,对弗氏柠檬酸杆菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限分别为1.5×102 CFU/mL和200 fg/μL,是常规PCR(cfa引物)检测灵敏度(20 pg/μL)的100倍;利用所建立的RPA-LFD法与常规PCR同时检测杂交鲟攻毒试验样本,两种方法的检测结果一致。研究表明,本研究中建立的弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD方法,操作简便、反应迅速、特异性好、灵敏度高,并且不需要昂贵的仪器,该方法可为未来弗氏柠檬酸杆菌细菌性疾病的早期诊断提供更有效的技术支持。
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关键词
弗氏柠檬酸杆菌
快速检测
重组酶聚合酶扩增技术
侧向流动试纸条
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职称材料
禽呼肠孤病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的研发
被引量：
4
2
作者
华俊
曾婷婷
+7 位作者
谢芝勋
谢丽基
李孟
罗思思
王盛
万丽军
任红玉
谢志勤
《中国动物检疫》
CAS
2023年第4期99-105,共7页
禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)主要感染鸡和火鸡,引起关节炎、腱鞘炎等症状。为满足疾病早期快速诊断的需求,建立一套应用重组聚合酶核酸等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)检测ARV的方法,使用侧向流动免疫试...
禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)主要感染鸡和火鸡,引起关节炎、腱鞘炎等症状。为满足疾病早期快速诊断的需求,建立一套应用重组聚合酶核酸等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)检测ARV的方法,使用侧向流动免疫试纸条(lateral flow dipstick,LFD)观测结果。首先针对ARV较为保守的片段M1基因设计数套引物,使用普通RT-PCR筛选出一套无非特异条带、敏感性优良的引物组建立ARV RT-RPA-LFD反应体系,优化探针浓度和反应温度,使用建立的反应体系进行特异性和敏感性试验,最后以最低检测模板浓度优化反应时间。结果显示,建立的ARV RT-RPA-LFD反应体系在探针工作浓度为0.12 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(1)copies/反应的ARV RNA,并且不与其他常见禽病原体核酸发生反应。使用建立的方法检测40份临床病料,发现有3份ARV阳性,与之前本实验室建立的二重qRT-PCR检测结果一致。结果表明,本研究建立的ARV RT-RPA-LFD检测方法,具有快速、特异,不需要大型复杂仪器,可直观观测结果的优势,为基层兽医实验室和兽医现场检测提供了技术参考。
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关键词
禽呼肠孤病毒
重组聚合酶核酸等温扩增技术
侧向
流动
免疫
试纸
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职称材料
题名
弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD快速检测方法的建立及应用
被引量：
2
1
作者
王姝然
范厚勇
徐嘉楠
周天琦
许丹
郑跃平
机构
上海海洋大学水产与生命学院
上海海洋大学国家水生动物病原库
上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室
上海市水生野生动植物保护研究中心
出处
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期241-249,共9页
基金
上海市水生野生动植物保护研究中心委托项目“中华鲟主要细菌性疾病的预警和防控”(沪水野研专项2022-01号)。
文摘
为建立一种针对弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)敏感性高、特异性强的临床快速检测方法,根据该菌定居因子基因cfa的保守序列,设计特异性引物,采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),并结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)方法进行反应条件的优化及特异性与灵敏度的检测。结果表明:本研究中所建立的弗氏柠檬酸杆菌重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸条(RPA-LFD)快速检测方法,在38℃条件下扩增20 min后,能特异性地检测到弗氏柠檬酸杆菌,对弗氏柠檬酸杆菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限分别为1.5×102 CFU/mL和200 fg/μL,是常规PCR(cfa引物)检测灵敏度(20 pg/μL)的100倍;利用所建立的RPA-LFD法与常规PCR同时检测杂交鲟攻毒试验样本,两种方法的检测结果一致。研究表明,本研究中建立的弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD方法,操作简便、反应迅速、特异性好、灵敏度高,并且不需要昂贵的仪器,该方法可为未来弗氏柠檬酸杆菌细菌性疾病的早期诊断提供更有效的技术支持。
关键词
弗氏柠檬酸杆菌
快速检测
重组酶聚合酶扩增技术
侧向流动试纸条
Keywords
Citrobacter freundii
rapid detection
recombinase polymerase amplification technique
lateral flow test strips
分类号
S943 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
禽呼肠孤病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的研发
被引量：
4
2
作者
华俊
曾婷婷
谢芝勋
谢丽基
李孟
罗思思
王盛
万丽军
任红玉
谢志勤
机构
农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室
出处
《中国动物检疫》
CAS
2023年第4期99-105,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31660715)
国家“万人计划”领军人才专项(W02060083)
“广西八桂学者”项目(2019A50)。
文摘
禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)主要感染鸡和火鸡,引起关节炎、腱鞘炎等症状。为满足疾病早期快速诊断的需求,建立一套应用重组聚合酶核酸等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)检测ARV的方法,使用侧向流动免疫试纸条(lateral flow dipstick,LFD)观测结果。首先针对ARV较为保守的片段M1基因设计数套引物,使用普通RT-PCR筛选出一套无非特异条带、敏感性优良的引物组建立ARV RT-RPA-LFD反应体系,优化探针浓度和反应温度,使用建立的反应体系进行特异性和敏感性试验,最后以最低检测模板浓度优化反应时间。结果显示,建立的ARV RT-RPA-LFD反应体系在探针工作浓度为0.12 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(1)copies/反应的ARV RNA,并且不与其他常见禽病原体核酸发生反应。使用建立的方法检测40份临床病料,发现有3份ARV阳性,与之前本实验室建立的二重qRT-PCR检测结果一致。结果表明,本研究建立的ARV RT-RPA-LFD检测方法,具有快速、特异,不需要大型复杂仪器,可直观观测结果的优势,为基层兽医实验室和兽医现场检测提供了技术参考。
关键词
禽呼肠孤病毒
重组聚合酶核酸等温扩增技术
侧向
流动
免疫
试纸
条
Keywords
ARV
RPA
LFD
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD快速检测方法的建立及应用
王姝然
范厚勇
徐嘉楠
周天琦
许丹
郑跃平
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
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职称材料
2
禽呼肠孤病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的研发
华俊
曾婷婷
谢芝勋
谢丽基
李孟
罗思思
王盛
万丽军
任红玉
谢志勤
《中国动物检疫》
CAS
2023
4
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