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体细胞核移植技术在家畜上的应用
1
作者 张天泽 范志乐 +3 位作者 崔慧 房义 郭晶 吕文发 《黑龙江动物繁殖》 2025年第3期65-71,共7页
文章简述了体细胞核移植的技术历史与发展脉络;系统讨论了核移植操作流程,涵盖细胞选择、显微操作、胚胎处理等多个步骤,分析了关键环节的技术要点与改进方法;评述了核移植在家畜上的应用,重点阐述该技术在良种选育、种质保存、转基因... 文章简述了体细胞核移植的技术历史与发展脉络;系统讨论了核移植操作流程,涵盖细胞选择、显微操作、胚胎处理等多个步骤,分析了关键环节的技术要点与改进方法;评述了核移植在家畜上的应用,重点阐述该技术在良种选育、种质保存、转基因动物生产等领域的具体应用与成果;探讨了核移植技术面临的主要障碍与应对策略,以期为核移植技术在家畜遗传改良、濒危资源保护和人类健康事业上的发展提供理论参考。 展开更多
关键词 体细胞核移植 牛 羊 猪 技术优化 应用
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体细胞核移植技术在蓝塘猪遗传资源保护中的应用
2
作者 周荣 苏巧云 +8 位作者 罗绿花 麦然标 纪红美 余婉娴 梁涣连 石俊松 邹娴 孟繁明 蔡更元 《广东畜牧兽医科技》 2025年第4期17-21,66,共6页
该试验旨在通过体细胞核移植技术对蓝塘猪进行克隆,为我国优良地方猪种或濒危猪种的遗传资源保护提供新的有效途径。试验通过采集蓝塘猪耳组织进行体细胞克隆,比较了组织块法和胶原酶消化法对蓝塘猪体细胞建系的影响,并对比分析了不同... 该试验旨在通过体细胞核移植技术对蓝塘猪进行克隆,为我国优良地方猪种或濒危猪种的遗传资源保护提供新的有效途径。试验通过采集蓝塘猪耳组织进行体细胞克隆,比较了组织块法和胶原酶消化法对蓝塘猪体细胞建系的影响,并对比分析了不同性别的蓝塘猪供体细胞制备的克隆胚胎在体外培养的发育效果,最后进行了克隆胚胎的体内移植。结果表明,与组织块法相比胶原酶法能更快的获得细胞及更多的细胞总量。不同性别的克隆胚胎在体外培养的卵裂率和囊胚细胞总数之间无显著差异,但雄性胚胎的囊胚率显著高于雌性(P<0.05)。通过3个批次的蓝塘猪克隆胚胎体内移植,最终成功获得4头健康克隆仔猪。该研究利用体细胞核移植技术成功获得了国内首例体细胞克隆蓝塘猪,为蓝塘猪遗传资源保护提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 地方猪 体细胞核移植 克隆 遗传资源保护
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猪体细胞核移植技术的应用研究进展
3
作者 卢玉婷 席广银 秦玉圣 《猪业科学》 2025年第8期20-21,共2页
生猪产业是我国农业的重要组成部分,其发展对保障国家粮食安全、器官移植等具有重要意义。随着社会对猪肉品质与生产效率的要求日益提升,传统育种技术已难以契合市场需求。猪体细胞核移植技术作为一种先进的生物技术手段,为生猪产业的... 生猪产业是我国农业的重要组成部分,其发展对保障国家粮食安全、器官移植等具有重要意义。随着社会对猪肉品质与生产效率的要求日益提升,传统育种技术已难以契合市场需求。猪体细胞核移植技术作为一种先进的生物技术手段,为生猪产业的转型升级提供了新的思路和方法。通过该技术可以实现优良种猪的快速扩繁、基因修饰猪的高效构建以及濒危猪种的保护。 展开更多
关键词 农业 猪体细胞核移植技术 粮食安全
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体细胞核移植技术及应用
4
作者 王维佳 李道全 +8 位作者 刘建雷 尹诗 杨汉文 倪鹏程 张勇峰 杨卫兵 赵善江 李广栋 王志坤 《黑龙江动物繁殖》 2024年第5期25-31,40,共8页
体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能使已分化的体细胞获得全能性(totipotency)的技术,在发育生物学、生物医学研究和农业应用方面具有重要价值。该技术主要包括卵细胞去核和核供体细胞植入两个环节。文章综述了S... 体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能使已分化的体细胞获得全能性(totipotency)的技术,在发育生物学、生物医学研究和农业应用方面具有重要价值。该技术主要包括卵细胞去核和核供体细胞植入两个环节。文章综述了SCNT技术的原理、流程、应用等,以期为SCNT技术的研究与应用提供参考依据。 展开更多
关键词 体细胞核移植(scnt) 全能性 克隆 重编程 应用
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体细胞核移植技术在肉牛育种上的研究进展 被引量：1
5
作者 陈欢 李楠楠 +4 位作者 陈瑞 周金陈 肖鹏 李孟琪 尚江华 《中国畜禽种业》 2024年第11期59-67,共9页
目前,国内肉牛产业发展迅猛,亟需提升养殖效能与肉牛品质。体细胞核移植技术(Somatic cell nuclear transfer, SCNT)作为先进繁殖生物技术,在推动肉牛遗传育种发展上起到了关键作用。该文详细分析了SCNT原理及在国内外肉牛育种上的应用... 目前,国内肉牛产业发展迅猛,亟需提升养殖效能与肉牛品质。体细胞核移植技术(Somatic cell nuclear transfer, SCNT)作为先进繁殖生物技术,在推动肉牛遗传育种发展上起到了关键作用。该文详细分析了SCNT原理及在国内外肉牛育种上的应用研究现状,探讨其研究进展与提升遗传品质的显著优势。同时,分析了SCNT面临的操作低效、胚胎存活率低及重构胚胎发育异常等挑战,这些限制了SCNT技术在肉牛育种的广泛应用。展望未来,需不断改进SCNT技术,提升克隆效率与存活率,并探索与基因编辑等新兴技术融合,加快肉牛遗传育种工作进展。 展开更多
关键词 肉牛 遗传育种 体细胞核移植技术 畜牧业
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不同供体细胞及其处理对猪核移植重构胚体外发育的影响 被引量：21
6
作者 张德福 刘东 +6 位作者 汤琳琳 王英 陈茵 王凯 王根林 KARL Schellander LIN Cailu 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期211-217,共7页
系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40～44h的猪卵母细胞去核后，将经血清饥饿（0．5％FBS）培养2～9天、0．1mg／L Aphidicolin（APD）培养＋0．5％FBS培养2～9天或一般培养法（10％FBS）... 系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40～44h的猪卵母细胞去核后，将经血清饥饿（0．5％FBS）培养2～9天、0．1mg／L Aphidicolin（APD）培养＋0．5％FBS培养2～9天或一般培养法（10％FBS）培养的卵丘细胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞，直接注射到去核的卵母细胞质中，或注射到卵周隙中，再经电融合（100V／mm，30μs，电脉冲1次）构建重构胚．重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6．DMAP激活处理，体外培养6天。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0．1mg／LAPD＋0．5％FBS培养处理后的重组胚卵裂率，均高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞（P〈0．01）。卵丘细胞、颗粒细胞经0．1mg／LAPD＋0．5％FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均高于输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞（P〈0．05）。以猪颗粒细胞为核供体时，电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法（P〈0．05），但囊胚发育率无显著差异（P〉0．05）。培养3代和6代的猪颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞，其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异（P〉0．05）；以这2种细胞不同培养代数做供体进行核移植时，各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异（P〉0．05）。这些结果表明：（1）猪耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定；（2）0．1mg／LAPD预培养处理供体细胞能提高猪体细胞核移植的效果，血清饥饿培养则无明显效果；（3）猪颗粒细胞和耳皮成纤维细胞等均可做供核细胞，核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚，但前者的效果略优于后者，且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；（4）电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法，但两者的总体效率相近。 展开更多
关键词 猪 体细胞核移植 细胞周期
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优化山羊体细胞核移植方案的研究 被引量：6
7
作者 刘凤军 安志兴 +5 位作者 高立功 张玉玲 张晶晶 何小宁 郑月茂 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期972-976,共5页
以乳腺细胞、胎儿成纤维细胞和颗粒细胞为供体细胞进行核移植,比较了供体细胞类型、细胞冷冻及核移植的重建方法(胞质内注射、电融合)对重构胚早期发育的影响。结果:(1)乳腺细胞支持重组胚的发育能力(囊胚率7.14%)显著低于成纤维细胞(16... 以乳腺细胞、胎儿成纤维细胞和颗粒细胞为供体细胞进行核移植,比较了供体细胞类型、细胞冷冻及核移植的重建方法(胞质内注射、电融合)对重构胚早期发育的影响。结果:(1)乳腺细胞支持重组胚的发育能力(囊胚率7.14%)显著低于成纤维细胞(16.19%)和颗粒细胞(19.01%)(P<0.05),卵裂率无显著差异(P>0.05);(2)乳腺上皮细胞构建重组胚时电融合法的效率(69.52%)极显著高于胞质注射法(59.20%)(P<0.01);成纤维细胞的重组成功率、卵裂率和囊胚率在两种方法间均无显著差异(P>0.05);在颗粒细胞,胞质注射法重组成功率(82.17%)显著高于电融合法(50.99%)(P<0.05),其囊胚率也稍高于电融合法,但无显著差异(P>0.05);(3)上述3种供体细胞在冻融后支持重组胚发育力方面无显著差异(P>0.05)。结论:在山羊体细胞核移植中,上述3种细胞支持重组胚的发育力以成纤维细胞和颗粒细胞较好;细胞冷冻对其无显著影响;在构建重组胚方法上,乳腺细胞以电融合法为宜,颗粒细胞是胞质注射法优于电融合法,而成纤维细胞两种方法均可。 展开更多
关键词 核移植 体细胞 山羊 胞质内注射 电融合
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TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达 被引量：6
8
作者 孔庆然 朱江 +6 位作者 黄波 郇延军 王峰 石永乾 刘仲凤 武美玲 刘忠华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期749-756,共8页
不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙... 不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。 展开更多
关键词 TSA 体细胞核移植 胚胎发育 外源基因表达 猪
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受体卵母细胞来源和供体细胞类型对山羊体细胞核移植融合率的影响 被引量：9
9
作者 刘海军 刘灵 +2 位作者 刘玉堂 李平 池炳杰 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第1期41-44,共4页
以波尔山羊体细胞作为核供体进行核移植,比较受体卵母细胞来源以及不同供体细胞类型对核移植重构胚融合率的影响。结果:以体内成熟和FSH处理卵巢、屠宰场卵巢来源的体外成熟卵母细胞做核移植受体卵母细胞,重组卵的融合率分别为71.9%,78.... 以波尔山羊体细胞作为核供体进行核移植,比较受体卵母细胞来源以及不同供体细胞类型对核移植重构胚融合率的影响。结果:以体内成熟和FSH处理卵巢、屠宰场卵巢来源的体外成熟卵母细胞做核移植受体卵母细胞,重组卵的融合率分别为71.9%,78.4%,73.1%,三者之间差异不显著;以卵丘细胞和皮肤成纤维细胞做核供体,重组卵的融合率分别为77.1%,68.3%,二者之间差异显著。 展开更多
关键词 山羊 核移植 供体细胞 卵母细胞 电融合
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供体细胞和去核卵母细胞的不同预激活对体细胞核移植胚胎体外发育的影响 被引量：5
10
作者 李雪峰 李煜 +2 位作者 安志兴 郭继彤 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期33-36,共4页
研究用细胞质内注射法构建重组胚,比较了离子霉素和乙醇预激活供体细胞和去核卵母细胞对重组胚卵裂和体外发育的影响。结果表明:与未经处理的对照组相比,离子霉素预激活供体细胞时重组胚的卵裂率和囊胚发育率有所提高;而供体细胞和去核... 研究用细胞质内注射法构建重组胚,比较了离子霉素和乙醇预激活供体细胞和去核卵母细胞对重组胚卵裂和体外发育的影响。结果表明:与未经处理的对照组相比,离子霉素预激活供体细胞时重组胚的卵裂率和囊胚发育率有所提高;而供体细胞和去核卵母细胞同时用离子霉素预激活,重组胚的卵裂率无明显提高,囊胚发育率下降;用离子霉素或乙醇预激活去核卵母细胞,对重组胚的卵裂和发育无明显影响。 展开更多
关键词 供体细胞 去核卵母细胞 预激活 体细胞核移植胚胎 体外发育
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体细胞核移植与中心体遗传 被引量：7
11
作者 杜卫华 朱化彬 +1 位作者 郝海生 王栋 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期960-966,共7页
体细胞克隆虽然在多种哺乳动物中成功获得后代,但仍存在一系列的问题需要解决。克隆胚胎的发育能力由核移植后几小时内的细胞和分子过程决定,包括染色体分离和纺锤体的重新组装。中心体的正常组成和分布能保证染色体分离的准确性及新生... 体细胞克隆虽然在多种哺乳动物中成功获得后代,但仍存在一系列的问题需要解决。克隆胚胎的发育能力由核移植后几小时内的细胞和分子过程决定,包括染色体分离和纺锤体的重新组装。中心体的正常组成和分布能保证染色体分离的准确性及新生和出生后克隆动物发育过程中的基因组稳定性。文章在分析哺乳动物体细胞克隆存在的问题和简介中心体结构功能的基础上,综述了中心体在配子和受精卵发育过程中的遗传机制,同时阐述了体细胞克隆胚胎中心体及其相关蛋白的研究现状。 展开更多
关键词 体细胞核移植 胚胎发育 中心体
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猪手工体细胞核移植电融合/激活参数的优化 被引量：4
12
作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1246-1252,共7页
通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨,为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台。利用手工克隆(HMC)技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间,研究猪手工克隆胚胎的发育... 通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨,为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台。利用手工克隆(HMC)技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间,研究猪手工克隆胚胎的发育能力。结果表明:(1)对重构胚进行一步法电融合时,参数2(180V·mm-1,30μs×1次)与参数1(160·mm-1,30μs×1次)两组间的融合率差异显著(65.31%vs58.33%,P<0.05);(2)对重构胚进行两步法融合时,参数3(第一次:180V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)和参数4(第一次:200V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)两组间的总融合率差异不显著(75.88%vs81.20%,P>0.05);(3)采用参数4与采用参数2融合的重构胚其分裂率和囊胚率均差异不显著((79.98%vs72.66%)和(13.14%vs9.36%),P>0.05);(4)在电激活和CHX+CB联合激活4、5、6h这3组中,其分裂率和囊胚率均差异不显著(P>0.05)。相对而言,重构胚采用参数4的两步融合法和CHX+CB激活5h效果较好。 展开更多
关键词 猪 卵母细胞 手工克隆 体细胞核移植
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体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)的猪胚胎 被引量：5
13
作者 冯冲 周艳荣 +4 位作者 龙川 刘晓 陈红星 潘登科 杨博辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期633-638,共6页
本研究通过脂质体介导的方法将来源于线虫C.Briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)转染至大白猪胎儿成纤维细胞。采用600μg.mL-1G418药物浓度,经连续10 d筛选及PCR、RT-PCR鉴定,获得11个转基因阳性细胞克隆。以体外成熟42 h的猪卵... 本研究通过脂质体介导的方法将来源于线虫C.Briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)转染至大白猪胎儿成纤维细胞。采用600μg.mL-1G418药物浓度,经连续10 d筛选及PCR、RT-PCR鉴定,获得11个转基因阳性细胞克隆。以体外成熟42 h的猪卵母细胞与转基因细胞构建重构胚。经体外培养后观察,转基因克隆胚胎与非转基因胚胎的卵裂率(76.6%±4.1%vs.81.6%±3.1%)和囊胚率(10%±1.97%vs.9.7%±1.4%)均无显著差异(P>0.05)。采用放线菌酮进行化学二次激活时,胚胎的囊胚率显著高于采用电二次激活胚胎(20.6%±0.89%vs.10%±1.97%,P<0.05),但二者的卵裂率并无显著差异(72.4%±4.96%vs.76.6%±4.1%,P>0.05)。研究表明,通过脂质体介导的方法,可以获得转sFat-1基因大白猪胎儿成纤维细胞系;以该细胞系为核供体构建的转基因克隆胚胎与非转基因克隆胚胎的发育能力无显著差异;二次激活采用放线菌酮进行化学激活能够显著提高胚胎的囊胚发育率。 展开更多
关键词 猪 sFat-1基因 胎儿成纤维细胞 体细胞核移植
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哺乳动物体细胞核移植研究进展及应用前景 被引量：5
14
作者 侯健 陈学进 +1 位作者 安晓荣 陈永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第5期16-19,共4页
哺乳动物体细胞核移植克隆技术成功于１９９７ 年，曾引起世界范围内的广泛关注，本文综述了体细胞克隆技术在近两年内的最新研究进展及其在生产、医疗和科学研究方面的应用前景。
关键词 哺乳动物 体细胞 核移植
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无血清培养基IVD101和G1/G2在牛体细胞核移植中的应用研究 被引量：3
15
作者 李荣 刘颖 +7 位作者 赵兴波 王莉莉 王海萍 丁方荣 李京 李松 高凤磊 戴蕴平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1487-1492,共6页
通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基(IVD101、G1/G2)条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa+5%FBS作... 通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基(IVD101、G1/G2)条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa+5%FBS作为对照组。无血清培养基IVD101和G1/G2的囊胚发育率与对照组无显著性差异(41.2%±9.1%、42.2%±10.8%,48.0%±9.2%,P>0.05)。通过囊胚差异染色和冷冻/解冻胚胎存活率分析胚胎质量,发现无血清培养基ICM/Total略低于对照组(31.8%±10.5%、29.5%±11.9%vs.33.0%±14.8%),但无显著性差异(P>0.05);3个组别的囊胚经程序化冷冻/解冻后无血清培养基的存活率(IVD101、G1/G2)略高于对照组,但差异不显著(84.8%、80.4%vs.77.3%,P>0.05)。结果证明无血清培养基(IVD101、G1/G2)可以支持体细胞核移植重构胚的体外发育,且其对程序化冷冻的耐受性与添加血清组(CR1aa+5%FBS)相似。 展开更多
关键词 无血清培养基 体细胞核移植 差异染色 胚胎冷冻
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5-aza-dc和TSA对广西陆川猪体细胞核移植的影响 被引量：3
16
作者 秦小娥 王猛 +2 位作者 宋雪梅 卢晟盛 卢克焕 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期2372-2375,共4页
为探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc、去乙酰基转移酶抑制剂TSA对广西陆川猪体细胞核移植效率的影响,用5-aza-dc、TSA处理供体细胞和重构胚。结果显示,5-Aza-dc联合TSA处理供体细胞、重构胚以及连续处理供体细胞和重构胚,桑椹胚率均显著高... 为探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc、去乙酰基转移酶抑制剂TSA对广西陆川猪体细胞核移植效率的影响,用5-aza-dc、TSA处理供体细胞和重构胚。结果显示,5-Aza-dc联合TSA处理供体细胞、重构胚以及连续处理供体细胞和重构胚,桑椹胚率均显著高于对照组(P<0.05),但各组间囊胚率差异不显著。说明5-aza-dc联合TSA处理供体细胞和克隆胚能提高猪克隆胚的发育能力,尽管差异不显著。 展开更多
关键词 猪 体细胞核移植 卵母细胞 5-AZA-DC TSA
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体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究 被引量：8
17
作者 刘凤军 张玉玲 +4 位作者 杨自军 陈兴启 孙达权 王国华 张涌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12720-12723,共4页
[目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、... [目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、激活、体外培养后，2-8细胞期克隆胚被移植到同期发情山羊的输卵管内，囊胚被移植到子宫角内。[结果]GFF与GMGE的妊娠率相近（输卵管移植妊娠率分别为26.47%及20.00%）；在GFF，输卵管移植的妊娠率与子宫角内移植妊娠率接近（分别为26.47%及25.00%），输卵管移植胚胎平均数为21.2组的妊娠率显著高于5.93组和9.64组（40.00%及26.67%，21.43%）。[结论]供体细胞类型、移植胚胎的发育阶段及移植部位对山羊转基因克隆效率的影响不大，但对于输卵管移植，受体羊移植胚胎数量对妊娠率有明显的影响。此外，该研究还提示了利用成年羊乳腺上皮细胞制作转基因动物的可行性。 展开更多
关键词 体细胞核移植 转基因 人乳铁蛋白基因 山羊胎儿成纤维细胞 乳腺上皮细胞
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供体细胞对哺乳动物体细胞核移植的影响 被引量：4
18
作者 张小建 李键 +1 位作者 王蕊 郜勇 《动物医学进展》 CSCD 2007年第3期82-85,共4页
哺乳动物体细胞核移植技术(克隆)在农业、生物技术、医药生产和濒危动物保护等方面具有很大的潜力和应用价值,已成为目前发育生物学研究的重要方法。文章依据近年来国内外在动物克隆技术方面的资料,分析了供体细胞类型、供体细胞动物年... 哺乳动物体细胞核移植技术(克隆)在农业、生物技术、医药生产和濒危动物保护等方面具有很大的潜力和应用价值,已成为目前发育生物学研究的重要方法。文章依据近年来国内外在动物克隆技术方面的资料,分析了供体细胞类型、供体细胞动物年龄、供体细胞所处细胞周期、体外传代次数以及供体动物性别等因素对克隆动物效率的影响及可能原因。 展开更多
关键词 供体细胞 体细胞核移植 克隆效率
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水牛体细胞核移植方法的研究 被引量：4
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作者 陆凤花 石德顺 +1 位作者 韦英明 潘红平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期127-132,共6页
探讨电融合参数对水牛体细胞核移植效果的影响.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞,在含有5 μg/mL细胞松弛素的操作液中进行去核,然后将经0.1 mg/L Aphidicolin (APD)处理1 d, 再用0.5% FBS培养2～9 d的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞... 探讨电融合参数对水牛体细胞核移植效果的影响.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞,在含有5 μg/mL细胞松弛素的操作液中进行去核,然后将经0.1 mg/L Aphidicolin (APD)处理1 d, 再用0.5% FBS培养2～9 d的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞注射到去核的卵母细胞卵周隙中,再经电融合形成重构胚.重构胚经5 μmol/L离子霉素激活处理5 min并在2 mmol/L的6-DMAP中培养3 h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中(30 μL)培养7～9 d,观察其卵裂和胚胎发育情况.当电融合的电场强度为1 500 V·μs/mm(电压100 V/mm×脉时15 μs)时,电脉冲3次,颗粒细胞核移植的融合率为74.18%,分裂率为71.82%,囊胚发育率为10%,融合率显著高于2次电脉冲(52.03%,P<0.05),卵裂率显著高于4次电脉冲(53.95%,P<0.05);当电脉冲次数为3次时,电场强度为2 000 V·μs/mm的分裂率(53.54%)显著低于1 500 V·μs/mm,2 500 V·μs/mm的融合率(62.0%)和分裂率(53.23%)均显著低于1 500 V·μs/mm(P<0.05).采用耳皮成纤维细胞作供核的融合率(59.75%)和分裂率(57.45%)均显著低于颗粒细胞.染色体组型分析显示,66.7%的核移植胚胎具有正常的供体细胞二倍体核型.将来自1头22岁的摩拉公牛耳皮成纤维细胞的2枚冻胚移植给受体母牛,妊娠到215 d时发生流产.结果表明,高龄水牛的体细胞核移植胚胎能发育到妊娠晚期;水牛体细胞核移植的适宜电融合参数为100 V/mm,15μs,3次电脉冲;颗粒细胞的电融合核移植效果优于耳皮成纤维细胞. 展开更多
关键词 成纤维细胞 颗粒细胞 电脉冲 胚胎 正常 处理 高龄 水牛 体细胞核移植 电融合
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体细胞核移植技术的研究进展 被引量：4
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作者 王巍 付茂忠 +4 位作者 唐慧 甘佳 方东辉 王淮 易军 《中国草食动物科学》 CAS 2017年第2期44-47,共4页
体细胞核移植转基因法效率高、成本低,目前已经成为构建转基因动物极为重要的方法。但该项技术的成功率较低,而且许多克隆动物会出现胎儿过度生长、出生前死亡、出生后生长异常等病理反应。文章以核移植生物学理论为基础,重点探讨了改... 体细胞核移植转基因法效率高、成本低,目前已经成为构建转基因动物极为重要的方法。但该项技术的成功率较低,而且许多克隆动物会出现胎儿过度生长、出生前死亡、出生后生长异常等病理反应。文章以核移植生物学理论为基础,重点探讨了改进型核移植技术(OSM)在操作方法方面的改进研究,分析了影响核移植成功率的影响因素,为核移植技术的进一步完善提供了理论基础。 展开更多
关键词 体细胞核移植 供体 受体 胚胎
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