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题名水稻几丁质酶的原核表达、复性及体外抑菌活性的研究
被引量：7
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作者
刘宝业
梁国鲁
张增艳
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机构
中国农业科学院作物科学研究所 农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程
西南大学园艺园林学院
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出处
《核农学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期369-374,共6页
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基金
国家转基因生物重大专项课题(2008ZX08002-001)和重点课题
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文摘
利用RT-PCR反应,从纹枯菌诱导的水稻叶片cDNA中克隆了1个水稻几丁质酶基因RC7的全长编码序列(ORF)。通过亚克隆方法,RC7与原核表达载体pGEX-4T-1上的GST融合,构建成GST-RC7重组蛋白的原核表达载体pGST-RC7,然后,将其转化到大肠杆菌细胞中。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得了以包涵体形式高效表达的GST-RC7。经过洗涤、溶解(变性)、复性及纯化等处理,包涵体中GST-RC7蛋白得到溶解、复性和纯化。纯化的复性GST-RC7蛋白具有几丁质酶活性。对6种重要作物病原真菌进行体外抑菌活性分析的结果表明,RC7可显著抑制水稻纹枯病菌、小麦纹枯菌、小麦赤霉菌、棉花黄萎菌、烟草赤星菌的菌丝生长,说明RC7可作为上述植物病害抗性基因育种的重要基因。
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关键词
水稻几丁质酶基因
表达
蛋白质纯化
复性
体外抑制真菌活性
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Keywords
rice chitinase gene
expression
protein purification
renaturation
antifungal activity in vitro
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分类号
S511
[农业科学—作物学]
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