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膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响
1
作者 徐振钊 张学华 +9 位作者 赵玲萍 李高桦 崔甜甜 王晓玲 李璇 臧茹歌 岳文 王亚楠 李国新 习佳飞 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1578-1584,共7页
目的:探究膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响。方法:通过电转法构建膜表达IL-21的K562稳转细胞系,细胞灭活后与NK细胞共培养,观察NK细胞增殖情况。通过乳酸脱氢酶(LDH)和干扰素-γ(IFN-γ)释放实验检测扩增获得的NK细胞体... 目的:探究膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响。方法:通过电转法构建膜表达IL-21的K562稳转细胞系,细胞灭活后与NK细胞共培养,观察NK细胞增殖情况。通过乳酸脱氢酶(LDH)和干扰素-γ(IFN-γ)释放实验检测扩增获得的NK细胞体外杀伤功能。构建NOD/SCID小鼠异种移植肠癌肿瘤模型,设置空白对照组、NK细胞组和扩增NK细胞组,检测扩增NK细胞体内肿瘤杀伤功能。结果:通过电转法成功构建了膜表达IL-21的K562细胞。与膜表达IL-21的K562细胞共培养17 d后,NK细胞的扩增倍数可达700倍,与对照组相比扩增能力明显增强(P<0.001)。体外肿瘤细胞杀伤实验检测结果显示,NK细胞和扩增后的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用无明显差异,对小鼠体内肿瘤的杀伤效果也无明显差异。结论:膜表达IL-21的K562细胞可显著增强NK细胞的体外扩增能力,但不影响NK细胞的体内外杀伤功能,可用于后续NK细胞的体外规模化扩增。 展开更多
关键词 NK细胞 K562细胞 体外扩增 白介素-21
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人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定 被引量：91
2
作者 朱学军 曹雪涛 +5 位作者 于益芝 陈国友 万涛 马施华 唐华 章卫平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第4期302-306,共5页
树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng... 树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng/ml hGM-CSF、500U/ml hIL-4,体外培养1周后,获得大量高纯度的树突状细胞,其高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及共刺激分子B7-1和CD40,能强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖,培养条件以应用自体血清或胎牛血清为最佳;单独应用hGM-CSF只能生成巨噬细胞;在培养末期加入TNFα可促进DC进一步成熟.本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础. 展开更多
关键词 树突状细胞 单核细胞 体外扩增 鉴定 外周血
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一种体外扩增人γδΤ细胞的新方法 被引量：31
3
作者 陈复兴 刘军权 +2 位作者 冯霞 张娟 张颂 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期662-664,共3页
目的:建立一种简单快速的体外扩增人外周血γδΤ细胞的方法,以便进一步对γδΤ细胞生物学特性和肿瘤免疫治疗的研究。方法:取健康人外周血100mL,分离单个核细胞,置于含100mL/L小牛血清,50mL/L人AB血清,异戊烯焦磷酸(2μg/L)和IL-2(100... 目的:建立一种简单快速的体外扩增人外周血γδΤ细胞的方法,以便进一步对γδΤ细胞生物学特性和肿瘤免疫治疗的研究。方法:取健康人外周血100mL,分离单个核细胞,置于含100mL/L小牛血清,50mL/L人AB血清,异戊烯焦磷酸(2μg/L)和IL-2(100IU/mL)RPMI1640培养液中培养,进行细胞毒杀伤活性测定和流式细胞术分析。结果:细胞培养10d时γδΤ细胞从扩增前4·21%增加到70·35%,增殖倍数可达80倍,悬浮生长γδΤ细胞CD44表达为86·39%、贴壁生长γδΤ细胞为94·0%。效靶细胞比为40:1时,对K562细胞和SGC-7901胃腺癌细胞的杀伤活性分别为75%和61%。结论:用一种简单、快速和特异性的体外扩增人外周血中γδΤ细胞新方法,培养的γδΤ细胞具有较强的抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 γδΤ细胞 体外扩增 末梢血 异戊烯焦磷酸
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IL-11基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响 被引量：9
4
作者 杨光 周雅德 +3 位作者 裴雪涛 李梁 冯凯 时维绢 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期55-58,共4页
目的　研究造血因子白介素 11(IL 11)基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响。方法　采用逆转录病毒载体将IL 11基因转入基质细胞HFCL ,用Northernblot检测基质细胞HFCLIL 11基因的表达 ,用流式细胞仪检测IL 11基因修饰的HFCL支... 目的　研究造血因子白介素 11(IL 11)基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响。方法　采用逆转录病毒载体将IL 11基因转入基质细胞HFCL ,用Northernblot检测基质细胞HFCLIL 11基因的表达 ,用流式细胞仪检测IL 11基因修饰的HFCL支持的脐血CD3 4 + 造血细胞体外扩增中表型为CD3 4 + CD3 8- 早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系定向祖细胞的比例。结果　基质细胞HFCL能够表达逆转录病毒介导的IL 11基因 ,并且在这种IL 11基因修饰的基质细胞支持下 ,脐血CD3 4 + 造血细胞经过7d扩增 ,扩增细胞中表型为CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞的比例分别为 (1.62± 0 .2 3 ) %、(9.9±1.1) % ,高于未转基因HFCL的 (0 .8± 0 .2 3 ) %、(6.5± 1.8) % ,而在相同条件下细胞因子支持的扩增细胞中则分别为 (0 .19±0 .14 ) %、(6.0± 1.1) %。结论　基质细胞能够表达经逆转录病毒载体介导的IL 11基因 ,而且经IL 11基因修饰的基质细胞能显著促进CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞扩增。 展开更多
关键词 造血细胞 体外扩增 基质细胞 基因修饰 白细胞介素Ⅱ
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基质细胞衍生因子-1和血小板第4因子对体外扩增后脐血CD34^+细胞黏附特性和趋化功能的影响 被引量：9
5
作者 李桥川 李云涛 +7 位作者 孟恒星 王亚非 万长春 李新 葛薇 李茜 韩俊领 邱录贵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期83-88,共6页
为了研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血小板第4因子(PF4)对扩增后脐血CD34+细胞归巢相关功能的影响,将纯化的脐血CD34+细胞接种入无血清培养液中,加入不同组合的细胞因子FST(FL+SCF+TPO)、FST+SDF-1、FST+PF4或FST+SDF-1+PF4,分别于培... 为了研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血小板第4因子(PF4)对扩增后脐血CD34+细胞归巢相关功能的影响,将纯化的脐血CD34+细胞接种入无血清培养液中,加入不同组合的细胞因子FST(FL+SCF+TPO)、FST+SDF-1、FST+PF4或FST+SDF-1+PF4,分别于培养第7、10、14天检测CD34+细胞扩增倍数、集落形成能力、细胞的黏附分子表达、总黏附性、趋化功能。结果表明:①加入SDF-1的实验组CD34+细胞及造血祖细胞集落扩增倍数高于对照组;②加入SDF-1明显上调扩增的CD34+细胞CD49e的表达,加入PF4明显上调扩增的CD34+细胞CD49e、CD54的表达,在扩增体系中加入SDF-1或PF4均能够明显提高扩增的CD34+细胞的总黏附性;③在扩增体系中加入SDF-1能够明显提高扩增的CD34+细胞的自发迁移率,但导致CXCR-4的表达和SDF-1诱导迁移率降低;而PF4能够明显提高扩增的CD34+细胞的CXCR-4的表达和SDF-1诱导迁移率;在扩增体系中同时加入SDF-1和PF4能够明显提高扩增的CD34+细胞自发迁移率和SDF-1诱导迁移率。结论:体外扩增体系中加入SDF-1和PF4能够上调部分归巢相关黏附分子的表达,保持扩增的CD34+细胞的黏附和迁移能力,有利于降低体外扩增对造血干/祖细胞(HSPC)归巢相关功能的不利影响,维持扩增的HSPC的归巢潜能。 展开更多
关键词 CD34^+细胞 脐带血 基质细胞衍生因子-1 血小板第4因子 体外扩增 黏附特性 趋化功能
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不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响 被引量：7
6
作者 毛平 许力 +3 位作者 莫文健 应逸 许艳丽 林秀梅 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期318-321,共4页
为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化,将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天,在0天,7天检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR... 为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化,将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天,在0天,7天检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD49d+的细胞数和集落形成单位(CFU)数.根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组;SF组(SCF+FL);SFT组(SCF+FL+TPO)和SFT6组(SCF+FL+TPO+IL-6)。结果表明,和对照组相比,SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增,加入TPO后即SCF/FL/TPO组合能有效的扩增脐血细胞,但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生(P>0.05);SF,SFT和SFT63组的细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞CD49d,CXCR4的表达,但3组之间差异无显著性(P>0.05)。结论:SF组合可协同扩增人造血细胞,但协同作用较弱;TPO在脐血造血干/祖细胞体外扩增中起重要调节作用,而IL-6作用不显著;SCF/FL/TPO3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增,而且可上调脐血造血细胞CD49d,CXCR4表达。 展开更多
关键词 脐血 细胞因子组合 体外扩增 单个核细胞 CD49D CXCR4
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人骨髓、脐血CD34^+干细胞体外扩增的树突状细胞的表型及其T细胞刺激活性分析 被引量：7
7
作者 朱学军 曹雪涛 +4 位作者 马施华 章卫平 鞠佃文 于益芝 陈国友 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第1期22-26,共5页
目的:从人骨髓造血前体细胞体外培养扩增树突状细胞(dendritic cells,DCs),测定其表型及T细胞刺激活性.方法:采用Mini-MACS分离技术,从正常人骨髓、脐血分离CD34^+造血干细胞,体外以重组hGM-CSF,hTNF-α,hIL-3诱导培养2周,流式细胞术检... 目的:从人骨髓造血前体细胞体外培养扩增树突状细胞(dendritic cells,DCs),测定其表型及T细胞刺激活性.方法:采用Mini-MACS分离技术,从正常人骨髓、脐血分离CD34^+造血干细胞,体外以重组hGM-CSF,hTNF-α,hIL-3诱导培养2周,流式细胞术检测扩增细胞的表面表型及细胞内IL-12的表达,体外同种混合淋巴细胞反应检测扩增DCs的T细胞刺激活性.结果:从正常人骨髓、脐血分离得到高纯度(>90%)的CD34^+造血干细胞,经重组hGM-CSF,hTNF-α的共同诱导培养,扩增得到大量DCs,加人hIL-3可以进一步增加DCs产量;FACS检测表明,扩增的DCs表达HLA-DR,CD40,CD54,CD80,CD86分子,细胞内有hIL-12的P35,P40亚基的表达;与外周血单核细胞培养生成的DCs相比,由CD34^+干细胞扩增的DCs具有更强的激发同种T细胞增殖的能力.结论:人CD34^+干细胞体外经诱导培养,可以生成大量功能成熟的DCs,从而为进一步开展DCs的基础及临床研究打下了基础. 展开更多
关键词 树突状细胞 造血干细胞 T细胞刺激活性 体外扩增
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基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用 被引量：6
8
作者 孔佩艳 郭朝华 +3 位作者 罗成基 周燕虹 邹仲敏 施炎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期891-893,共3页
目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）体外液体培养和各种造血祖细胞集落培养技术，进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究，并与单纯细胞因子支持下... 目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）体外液体培养和各种造血祖细胞集落培养技术，进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究，并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后基质细胞层存在的条件下，同时含有细胞因子组合的培养体系，对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。 展开更多
关键词 基质细胞 细胞因子 骨髓单个核细胞 体外扩增 动物实验
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血管紧张素Ⅱ对脐血CD34^+细胞体外扩增的作用 被引量：7
9
作者 彭程 黎纬民 +4 位作者 马艳萍 胡中波 程范军 刘凌波 邹萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期227-229,共3页
血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )是肾素 血管紧张素系统的一种主要生物活性物质。为了研究它在造血系统中的影响 ,本实验通过体外细胞培养的方法 ,探讨AngⅡ与不同的细胞因子联合刺激脐血CD34+ 细胞生长和分化的作用。研究结果发现 ,悬浮培养体... 血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )是肾素 血管紧张素系统的一种主要生物活性物质。为了研究它在造血系统中的影响 ,本实验通过体外细胞培养的方法 ,探讨AngⅡ与不同的细胞因子联合刺激脐血CD34+ 细胞生长和分化的作用。研究结果发现 ,悬浮培养体系中的AngⅡ可同时刺激BFU E和CFU GM的扩增 ,BFU E和CFU GM的数量在一定范围内随AngⅡ浓度 (0 0 1- 0 1μmol/L)的升高而增多 ;在半固体培养基中的AngⅡ则仅刺激CFU GM的形成 ,却不影响BFU E ;悬浮培养体系中AngⅡ与细胞因子SCF +G CSF +GM CSF +IL 3联合可使CFU GM的扩增倍数由 2 3± 0 8升高到 7 8± 1 9倍 ,与SCF +EPO +TPO +IL 3联合 ,BFU E的扩增倍数由 3 1± 1 8提高到 9 2± 2 3倍。结论 :AngⅡ与其他细胞因子联合可刺激脐血造血干 /祖细胞体外扩增。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 脐血 造血干/祖细胞 体外扩增
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血管内皮祖细胞的体外扩增特性研究 被引量：6
10
作者 刘超 孙宗全 +2 位作者 吴永超 陈新忠 冯建鳄 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期760-764,共5页
目的 :探讨血管内皮祖细胞 (EPCs)在体外扩增特性。方法 :利用磁性活化细胞分选系统 (MACS)系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批的单个核细胞 (MNC)、CD34+ 和CD34-混和细胞进行对照培养 ,比较EPCs体外扩增效果。另外研究血管内皮... 目的 :探讨血管内皮祖细胞 (EPCs)在体外扩增特性。方法 :利用磁性活化细胞分选系统 (MACS)系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批的单个核细胞 (MNC)、CD34+ 和CD34-混和细胞进行对照培养 ,比较EPCs体外扩增效果。另外研究血管内皮生长因子 (VEGF)和传代培养对细胞分化、扩增动力学和细胞凋亡的影响。应用细胞免疫化学和流式细胞术对细胞定性定量分析。结果 :MNC培养、CD34+ 和CD34-细胞混和培养明显高于CD34+细胞单独培养EPCs扩增率 (P <0 0 5 ) ,一旦细胞形成线索样结构行传代培养明显低于未传代的细胞凋亡 (P <0 0 5 )。VEGF对细胞凋亡 (P >0 0 5 )无明显影响 ,这些分化的EPCs免疫细胞化学染色CD34、vWF、KDR、CD31阳性 ,并且吞噬乙酰化低密度脂蛋白 (Ac -LDL)。培养 7d流式细胞检查CD34+ 、AC133+ 分别占贴壁 (AT)细胞的 6 8 2 %±6 3% (n =6 )、5 7 2 %± 9 8% (n =6 )。结论 :MNC培养、CD34+ 和CD34-细胞混和培养提高了EPCs扩增率 ,早传代使凋亡率明显降低。VEGF对EPCs体外扩增无明显影响。 展开更多
关键词 血管内皮祖细胞 体外扩增 抗原 CD34 细胞凋亡
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IL-2、IL-7和IL-15联合对T细胞的体外扩增效应 被引量：5
11
作者 董隽 杨素霞 +2 位作者 李煜 高江平 张旭 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期1590-1594,共5页
为了建立一种快速有效的体外T细胞扩增方法,本研究比较了不同培养条件对T细胞增殖及其功能和特性的影响。取外周血T细胞,用自体的树突状细胞(DC)和EB病毒转化的B细胞进行周期性刺激,用细胞增殖试验、PI和AnnexinV双标记流式细胞术、Cr... 为了建立一种快速有效的体外T细胞扩增方法,本研究比较了不同培养条件对T细胞增殖及其功能和特性的影响。取外周血T细胞,用自体的树突状细胞(DC)和EB病毒转化的B细胞进行周期性刺激,用细胞增殖试验、PI和AnnexinV双标记流式细胞术、Cr释放测定及ELISPOT试验分别测定不同培养条件下细胞的增殖程度、IFN-γ分泌细胞的频率、抗原特异性T细胞的杀伤活力、细胞的凋亡状态和分化能力。结果显示:T细胞在周期性刺激后,用CD3/28微珠的短期扩增效应最好,但多轮刺激后联合应用IL-2,IL-7和IL-15对细胞的扩增最强。Cr释放试验表明,CD3/28微珠扩增的T细胞不具有杀伤活力,高浓度IL-2诱导的T细胞杀伤活性最强,其次为联合应用IL-2,IL-7和IL-15。ELISPOT显示不同培养条件诱导出的分泌IFN-γ的T细胞频率从高到低依此为高浓度IL-2>联合应用IL-2,IL-7和Il-15>低浓度的IL-2>CD3/28微珠。细胞表型分析显示高浓度IL-2和联合应用IL-2,IL-7和Il-15扩增的细胞含有较高比例的CD3+CD8+T细胞。对细胞的凋亡测定表明联合应用IL-2,IL-7和IL-15获得的T细胞的存活率最高,处于凋亡早期的细胞比例最低。细胞增殖试验显示联合应用IL-2,IL-7和IL-15扩增的细胞分化能力最强。结论:本研究建立了一种快速有效地体外扩增T细胞的方法,其中联合应用IL-2,IL-7和IL-15对T细胞的扩增最显著,获得的T细胞存活率最高,分化能力最强,该细胞同时也含有较高频率的IFN-γ分泌细胞且表现出较强的杀伤活力。 展开更多
关键词 过继性免疫治疗 IL-2 IL-7 IL-15 T细胞 体外扩增
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GM-CSF对脐血CD34^+巨核祖细胞体外扩增及分化的影响 被引量：5
12
作者 陈舒 朱发明 +3 位作者 何吉 刘晋辉 秦斐 严力行 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期1041-1043,共3页
本实验旨在研究GMCSF对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,在含有TPO+IL3+SCF并添加了不同浓度(5、20、100ng/ml)的GMCSF的无血清培养基中进行培养。培养6、10、14天后计数单个核细胞(MNC),检测CD41... 本实验旨在研究GMCSF对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,在含有TPO+IL3+SCF并添加了不同浓度(5、20、100ng/ml)的GMCSF的无血清培养基中进行培养。培养6、10、14天后计数单个核细胞(MNC),检测CD41+细胞比例和CFUMK。结果表明,培养14天后3种不同浓度GMCSF对MNC均有明显的扩增作用,其中以20和100ng/mlGMCSF的扩增效果较好。3种不同浓度的GMCSF均使CD41+细胞比例增加,20和100ng/ml与5ng/mlGMCSF相比更能提高CD41+细胞的比例。5和20ng/ml的GMCSF能促进CFUMK的形成,但100ng/ml的GMCSF却抑制CFUMK的形成。结论:在TPO+IL3+SCF细胞因子组合中添加GMCSF有利于促进脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞。 展开更多
关键词 GM-CSF 脐血 CD34^+细胞 巨核细胞 体外扩增
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脐血CD34^+细胞体外扩增时HOXB4基因表达的变化 被引量：6
13
作者 唐宇宏 费小明 +3 位作者 沈文怡 缪扣荣 崔毓桂 汪承亚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期89-93,共5页
同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达,以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结果显示:随着体外培养时间的延长,虽... 同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达,以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结果显示:随着体外培养时间的延长,虽然CD34+细胞数增加,但HOXB4表达下降;周后,HOXB4几乎检测不到,与成熟外周血淋巴细胞表达HOXB4的水平相同;CD34+细胞与骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养可以减缓CD34+细胞HOXB4表达的下降。结论:脐血CD34+细胞体外扩增过程中自我更新能力逐渐下降。CD34+与BM-MSC共培养有助于减缓体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的丧失。 展开更多
关键词 HOXB4 脐血CD34^+细胞 体外扩增 骨髓间充质干细胞 实时定量RT—PCR
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记忆性B细胞体外扩增影响因素的研究进展 被引量：5
14
作者 张莉芳 廖焕金 +7 位作者 蔡珺 何一鸣 彭艳霞 李光民 谢彤 吴平 刘华锋 潘庆军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期144-147,共4页
记忆性B细胞（Memory B cells）是成熟的初始B细胞被抗原激活分化为具有记忆功能并持续存在于宿主的一类细胞。当再次遇到相同抗原时,该细胞可迅速增殖分化为浆细胞,产生高亲和力的抗原特异性抗体,介导体液免疫应答,从而保护机体免受再... 记忆性B细胞（Memory B cells）是成熟的初始B细胞被抗原激活分化为具有记忆功能并持续存在于宿主的一类细胞。当再次遇到相同抗原时,该细胞可迅速增殖分化为浆细胞,产生高亲和力的抗原特异性抗体,介导体液免疫应答,从而保护机体免受再次入侵的抗原感染。 展开更多
关键词 记忆性 细胞分化 抗原特异性抗体 体液免疫应答 体外扩增 影响因素 多克隆刺激剂 原时 肿瘤免疫治疗 单克隆抗体
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达沙替尼对NK细胞的体外扩增、细胞亚群、受体表达及细胞毒功能的调节作用 被引量：4
15
作者 盛立霞 王佳萍 +5 位作者 赖艳丽 吴昊 孙永城 周淼 欧阳桂芳 黄河 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1762-1768,共7页
目的:探讨达沙替尼对NK细胞的体外扩增作用,以及对NK细胞的亚群、受体表达及细胞毒功能的影响。方法:从健康成人外周血中分离单个核细胞(PBMC),采用添加过IL-2、IL-15的SCGM培养液进行NK细胞的扩增培养,培养体系中添加不同浓度的达沙替... 目的:探讨达沙替尼对NK细胞的体外扩增作用,以及对NK细胞的亚群、受体表达及细胞毒功能的影响。方法:从健康成人外周血中分离单个核细胞(PBMC),采用添加过IL-2、IL-15的SCGM培养液进行NK细胞的扩增培养,培养体系中添加不同浓度的达沙替尼,细胞计数结合FCM检测分析扩增效率,FCM检测NK细胞表面受体表达以及亚群的分布;采用脱颗粒试验结合CFSE/7AAD杀伤试验检测NK细胞对白血病细胞株K562的细胞毒功能。结果:5-50 nmol/L的达沙替尼能够在体外增加NK细胞的扩增效率,NK细胞的扩增效率在达沙替尼浓度为20 nmol/L时达到峰值。20 nmol/L达沙替尼培养组的NK细胞对K562细胞的细胞毒作用强于对照组。达沙替尼体外扩增的NK细胞中,CD226、NKP46及NKG2D等活化型受体的MFI上调;NKG2A^+CD57^-亚群比例下调,而NKG2A^-CD57^+亚群比例增高,NKG2A^-CD57^+NK细胞对K562细胞的脱颗粒反应强于NKG2A^+CD57^-NK细胞。结论:20 nmol/L的达沙替尼可以增强NK细胞体外扩增的效率,并能够上调扩增的NK细胞表面活化型受体的表达和优先扩增胞毒功能较强的NKG2A^-CD57^+亚群,从而增强NK细胞对白血病细胞株的细胞毒作用。 展开更多
关键词 达沙替尼 自然杀伤细胞 体外扩增 细胞毒作用 激活型受体
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弓形虫ROP2基因的体外扩增及真核表达重组质粒的构建 被引量：10
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作者 吴昆 陈晓光 +1 位作者 李华 支国舟 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第7期620-623,共4页
目的　构建弓形虫棒状体蛋白2（POP2）基因真核表达重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构... 目的　构建弓形虫棒状体蛋白2（POP2）基因真核表达重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoR　I、Not　I双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2。结果　ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 ROP2基因 体外扩增 真核表达重组质粒 DNA疫苗
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定量PCR检测体外扩增脐带血造血干细胞HOXB4基因的表达 被引量：5
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作者 唐宇宏 费小明 +4 位作者 沈文怡 缪扣荣 崔毓桂 陆化 汪承亚 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期443-446,共4页
目的:通过检测HOXB4基因表达,评价体外扩增的脐带血干细胞(CBSC)自我更新的能力。方法:CBSC在含造血细胞因子(TPO+SCF+FL+G鄄CSF)的无血清培养基体外扩增7天和14天,抽提细胞总RNA,采用定量PCR检测HOXB4基因的表达。结果:CBSC体外培养后... 目的:通过检测HOXB4基因表达,评价体外扩增的脐带血干细胞(CBSC)自我更新的能力。方法:CBSC在含造血细胞因子(TPO+SCF+FL+G鄄CSF)的无血清培养基体外扩增7天和14天,抽提细胞总RNA,采用定量PCR检测HOXB4基因的表达。结果:CBSC体外培养后,细胞总数可以增加近100倍,但HOXB4的表达较扩增前下降。培养7天HOXB4的水平为扩增前的18%,培养14天,HOXB4表达仅为扩增前的3%左右。结论:CBSC体外扩增细胞数量增加的同时,自我更新能力逐渐下降,甚至消失。 展开更多
关键词 HOXB4 脐带血造血干细胞 体外扩增 实时定量RT-RCR
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人脐血基质细胞对脐血CD34^+细胞体外扩增的作用 被引量：5
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作者 高蕾 陈幸华 +6 位作者 张曦 彭贤贵 刘耀 孔佩艳 刘林 刘红 张怡 《医学研究生学报》 CAS 2005年第6期486-489,共4页
目的:研究人脐血基质细胞(hUCBSCs)对脐血CD34+细胞体外扩增的促进作用。方法:应用MACS磁珠分离系统分离脐血CD34+细胞,按照DEXTER法行脐血基质细胞培养,观察hUCBSCs的生长状态及细胞表面分子的表达情况。建立以hUCBSCs为滋养层的脐血CD... 目的:研究人脐血基质细胞(hUCBSCs)对脐血CD34+细胞体外扩增的促进作用。方法:应用MACS磁珠分离系统分离脐血CD34+细胞,按照DEXTER法行脐血基质细胞培养,观察hUCBSCs的生长状态及细胞表面分子的表达情况。建立以hUCBSCs为滋养层的脐血CD34+细胞体外扩增体系,并对脐血CD34+细胞短期扩增后行集落形成单位(CFU)GM、CFUE和CFUMg半固体培养。结果:脐血基质细胞为混合细胞群,包括CD68(+)、Fn(+)、CD31(+)和CD34(-);以hUCBSCs为滋养层的体外扩增体系对脐血CD34+细胞具有明显的扩增作用,体外液体扩增后的脐血CD34+细胞集落形成能力明显高于对照组,其中细胞因子(SCF+IL3+EPO+TPO+GMCSF)联合hUCBSCs体系的扩增作用最强,hUCBSCs在促进CFUMg集落形成的作用中具有明显优势。结论:hUCBSCs具有体外支持造血作用,与细胞因子联合对促进脐血CD34+细胞扩增作用更加明显。hUCBSCs对促进巨核细胞扩增可能具有特殊的意义。 展开更多
关键词 脐血 基质细胞 CD34^+细胞 体外扩增
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人骨髓间充质干细胞对脐血干细胞体外扩增支持作用的研究 被引量：4
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作者 费小明 陆化 +5 位作者 吴雨洁 周迎峰 周小玉 唐宇鸿 沈文怡 汪承亚 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期235-238,I001,共5页
目的:探讨以人骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cells,BM-MSC)为基质的无血清培养方法,体外扩增脐血造血干细胞(cord blood stem cells,CBSC),研究BM-MSC支持造血的功能,以能最终用于临床。方法:用含血小板生成素(TPO)... 目的:探讨以人骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cells,BM-MSC)为基质的无血清培养方法,体外扩增脐血造血干细胞(cord blood stem cells,CBSC),研究BM-MSC支持造血的功能,以能最终用于临床。方法:用含血小板生成素(TPO)、干细胞因子(SCF)、flt3/flk2配体(FL)和粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)的无血清培养液,比较有或无MSC条件下,体外扩增脐血CD34+细胞两周后检测总细胞TC、CD34+细胞、集落形成单位(CFU)和长期培养-起始细胞(LTC-IC)增加倍数。结果:在TPO、FL、SCF和G-CSF的作用下,经两周体外扩增后有MSC组的TC、CD34+细胞、CFU-GM、CFU-C和LTC-IC数较起始分别增加了427、39、125、104和16倍。单纯用上述4种细胞因子的无MSC组,TC、CD34+细胞、CFU-GM、CFU-C数分别增加了62、11、25、24倍,但LTC-IC只有扩增前的0.8倍。结论:以人BM-MSC为基质的无血清体外培养体系可以更有效扩增CBSC,有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 脐血干细胞 体外扩增 细胞培养 细胞因子 流式细胞仪
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CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外扩增 被引量：6
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作者 史艳侠 何伟 +1 位作者 彭柔君 姜文奇 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期664-669,共6页
【目的】探讨有效的体外培养扩增CD4+CD25+Treg的方法。【方法】收集健康志愿者外周血5例,免疫磁珠法分选出CD4+CD25+Treg。将实验分为3组,第1组在CD4+CD25+Treg中加入100nmol/Lrapamycin(1μg/mL)和包被了CD3/CD28单抗的磁珠培养3周,第... 【目的】探讨有效的体外培养扩增CD4+CD25+Treg的方法。【方法】收集健康志愿者外周血5例,免疫磁珠法分选出CD4+CD25+Treg。将实验分为3组,第1组在CD4+CD25+Treg中加入100nmol/Lrapamycin(1μg/mL)和包被了CD3/CD28单抗的磁珠培养3周,第8天开始加入1000U/mL的IL-2,第2组培养条件除不加rapamycin外其余与第1组相同,第3组培养细胞为CD4+CD25-T细胞,培养条件同第1组。培养第7、14、21天收集细胞计数,第21天收集细胞行流式细胞术三标法检测CD4、CD25、FOXP3的表达。MTT法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD4+T细胞增殖的抑制作用。【结果】三组细胞均有明显的扩增。加rapamycin培养的CD4+CD25+Treg细胞的扩增率比不加rapamycin扩增倍数低,但细胞的纯度明显增加。CD4+CD25-T细胞组在培养第1周扩增迅速,从第2周开始增殖减慢,其中CD4+CD25+Treg细胞的比例较培养前无明显的差别。三组至第3周时扩增倍数分别为89±21、338±78、216±55(F=484.655,P<0.0001),细胞的纯度分别为84.32%±4.62%、34.04%±5.78%、0.68%±0.39%(F=24.660,P<0.0001)。体外抑制实验显示体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体和异体的CD4+T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低。在CD4+T/Treg比例为8:1、4:1、2:1、1:1时对自体CD4+T细胞的抑制率分别为9.65%、16.43%、28.75%、55.34%,对异体CD4+T细胞的抑制率分别为6.43%、14.72%、26.47%、50.25%,而且在各浓度梯度其抑制作用在自体和异体之间均无明显的差异。【结论】我们采用rapamycin+CD3/CD28单抗标记的磁珠+IL-2在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg,其扩增的倍数为89.4±20.53,具有免疫抑制功能,有望进一步应用于临床。 展开更多
关键词 CD4^+CD25^+TREG 体外扩增 RAPAMYCIN
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