低温诱导基因表达与紫花苜蓿主要农艺性状间的关系 被引量：1

1

作者 彭嘉文 夏厚胤 +9 位作者 马志超 崔祎琳 苑旺 苗愉祺 同雨涛 武佳昕 张梦瑶 袁子昂 高景慧 杨培志 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期3358-3370,共13页

低温限制紫花苜蓿(Medicago sativa L.)生长发育,严重影响其产量。为在作物生长早期筛选高产抗寒候选品种,本研究以4种紫花苜蓿为试验材料,利用甲基磺酸乙酯(Ethyl methanesulfonate,EMS)诱变建立T 1突变群体,结合优良突变体高产相关农... 低温限制紫花苜蓿(Medicago sativa L.)生长发育,严重影响其产量。为在作物生长早期筛选高产抗寒候选品种,本研究以4种紫花苜蓿为试验材料,利用甲基磺酸乙酯(Ethyl methanesulfonate,EMS)诱变建立T 1突变群体,结合优良突变体高产相关农艺性状评价,拟探索低温诱导基因表达量与高产农艺性状间的关系。结果表明:优质抗寒苜蓿突变体植株表现为植株高大、茎秆粗壮、分枝数多、叶面积大,同时低温诱导基因MsG0180003510(HIPP),MsG0880047253(LEA),MsG0880047531(TPS)和MsG0180005121(PM)表达水平在隶属函数分析中排位最高;其中HIPP与茎粗显著正相关(P<0.05),LEA与茎粗显著正相关、与分枝数和节间显著负相关(P<0.05),PM和茎粗、分枝数和干鲜重显著正相关(P<0.05)。研究指出苜蓿中农艺性状表现为茎秆粗壮、枝繁叶茂,且分子水平HIPP,LEA,TPS和PM基因高表达,可作为在生长早期筛选高产耐寒苜蓿品种的预测因子,为紫花苜蓿在低温胁迫下的生存策略提供依据。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 低温胁迫 农艺性状 低温诱导基因

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木薯低温诱导基因MeLTI6A的启动子的克隆与序列分析 被引量：6

2

作者 黎娟华 孙海彦 +3 位作者 阮孟斌 赵平娟 曾长英 彭明 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第11期2164-2171,共8页

MeLTI6A(Manihot esculenta low temperature inducible 6A)是木薯低温干旱诱导基因,本研究从MeLTI6A的序列出发,利用电子克隆设计引物进行PCR扩增的方法获得该基因的启动子,其序列共1 304 bp。生物信息学分析发现该启动子中具有真核生... MeLTI6A(Manihot esculenta low temperature inducible 6A)是木薯低温干旱诱导基因,本研究从MeLTI6A的序列出发,利用电子克隆设计引物进行PCR扩增的方法获得该基因的启动子,其序列共1 304 bp。生物信息学分析发现该启动子中具有真核生物典型的核心启动子区(TATA-box和CAAT-box),并利用α-互补,蓝白斑筛选原理验证了该启动子核心序列具有活性;该启动子具有与干旱胁迫相关的激素类(如脱落酸、乙烯)的响应元件和逆境胁迫(如低温、干旱胁迫)的响应元件;还具有与木薯组织特异表达相关的调控元件和其它光响应元件;并通过Real time PCR检测了低温胁迫(4℃)下的木薯组培苗中MeLTI6A的表达变化,说明了该启动子区的低温胁迫顺式作用响应元件可能调节MeLIT6A在低温胁迫下的表达。这些说明木薯的MeLIT6A基因可能是通过对干旱胁迫激素信号响应以及逆境胁迫响应起作用,使木薯获得一定的抗胁迫的能力,同时还可能参与了木薯相关组织发育过程的调控。本研究有利于对MeLTI6A基因抗逆境胁迫功能的理解,为探索木薯高效抗逆的分子机制作初步研究。 展开更多

关键词 木薯 启动子 木薯低温诱导基因MeLTI6A 启动子序列分析

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植物低温诱导蛋白和低温诱导基因的表达调控 被引量：16

3

作者 王艇 苏应娟 刘良式 《武汉植物学研究》 CSCD 1997年第1期80-90,共11页

关键词 低温诱导蛋白 低温诱导基因 基因表达调控

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桑树低温诱导基因Wap25的序列分析及表达产物的亚细胞定位 被引量：3

4

作者 陆小平 刘嘉琦 +1 位作者 李叶峰 楼程富 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期209-213,共5页

Wap25是从桑树幼茎克隆的低温诱导蛋白基因,为胚胎后期富集蛋白(LEA)基因的成员之一,与其它物种低温诱导基因的同源性很低。生物信息学分析表明,桑树低温诱导基因Wap25编码蛋白由226个氨基酸组成,分子质量25.3kD,等电点5.52;蛋白N端1-3... Wap25是从桑树幼茎克隆的低温诱导蛋白基因,为胚胎后期富集蛋白(LEA)基因的成员之一,与其它物种低温诱导基因的同源性很低。生物信息学分析表明,桑树低温诱导基因Wap25编码蛋白由226个氨基酸组成,分子质量25.3kD,等电点5.52;蛋白N端1-30位氨基酸表现出强烈的疏水性,其后是亲水性高的区域,平均亲水值达-1.020,而蛋白1-29位氨基酸为典型的真核生物蛋白质的信号肽序列,表明WAP25蛋白属于分泌型蛋白。用SubLocv1.0软件预测WAP25的亚细胞定位,将该蛋白定位于细胞质中。Tmpred软件预测WAP25不存在跨膜结构。构建Wap25与绿色荧光蛋白(GFP)的重组质粒,用基因枪法将其转入洋葱表皮细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下发现GFP分散于洋葱表皮的细胞质中,而在细胞核未发现GFP的表达,此结果与WAP25的亚细胞定位预测结果相符。 展开更多

关键词 桑树 蒙古桑 低温诱导基因Wap25 序列分析 亚细胞定位 绿色荧光蛋白

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植物低温诱导基因及其产物的生物学功能 被引量：5

5

作者 陆小平 楼程富 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期562-567,共6页

植物在适应低温胁迫的过程中,体内将会发生一系列生理生化反应,多种基因得以诱导表达,这些基因的表达在时空上是有序发生的,并相互联系形成了低温应答的分子机制。为促进我国桑树抗寒分子育种的研究,结合植物的抗冻特性和桑树低温胁迫反... 植物在适应低温胁迫的过程中,体内将会发生一系列生理生化反应,多种基因得以诱导表达,这些基因的表达在时空上是有序发生的,并相互联系形成了低温应答的分子机制。为促进我国桑树抗寒分子育种的研究,结合植物的抗冻特性和桑树低温胁迫反应,对植物的3种主要低温诱导蛋白(抗冻蛋白、胚胎后期富集蛋白和转录因子)的研究进展进行了综述,并以此阐述了植物抗寒抗冻特性和植物低温应答的分子机制。 展开更多

关键词 植物 抗冻蛋白 胚胎后期富集蛋白 转录因子 低温诱导基因 桑

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桑树低温诱导基因Wap在不同地理来源桑品种幼叶中的表达差异 被引量：1

6

作者 孙银苹 沈智超 +3 位作者 雷朋 邸炳荣 刘利 潘刚 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期772-776,共5页

为探究不同桑树品种抗寒性差异的分子机制,以4个不同地理来源桑品种的幼苗叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR方法分析正常环境和低温(4℃)胁迫下桑树低温诱导基因Wap(winter accumulating protein)在各品种间的表达差异。正常环境下,来自... 为探究不同桑树品种抗寒性差异的分子机制,以4个不同地理来源桑品种的幼苗叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR方法分析正常环境和低温(4℃)胁迫下桑树低温诱导基因Wap(winter accumulating protein)在各品种间的表达差异。正常环境下,来自吉林省的向海桑中Wap的表达水平最高,在来自新疆维吾尔自治区的实生桑和来自江苏省的丰驰桑中该基因也有较高水平的表达,而在来自广东省的杂交桑塘10×伦109中则检测不到该基因的表达。低温胁迫2～6 d,4个桑品种幼苗叶片中Wap的表达均上调,至胁迫8～10 d时Wap的表达达到最高水平;低温胁迫12 d,Wap在广东杂交桑的表达开始降低,低温胁迫16 d,在丰驰桑与新疆实生桑的表达也开始降低,而来自寒冷地域的向海桑在低温胁迫20 d该基因的表达才开始降低;低温胁迫24 d,在广东杂交桑中已检测不到Wap的表达,在丰驰桑与新疆实生桑中仅有微量表达,而在向海桑中仍有较高水平的表达。初步推测Wap在不同桑树品种的表达差异是各品种抗寒性差异的重要因素之一。构建重组质粒pGEX-4T-2-Wap在大肠杆菌中表达了分子质量约27 kD的WAP蛋白,有助于进一步研究其生物学功能。 展开更多

关键词 桑树品种 生态区域 低温诱导基因 表达差异 原核表达

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水稻苗期低温诱导表达新基因OsCOI的克隆、过表达载体的构建与转化 被引量：2

7

作者 孙琦 刘香玲 +1 位作者 张宁 余柏胜 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期18-22,共5页

水稻苗期冷害是导致水稻减产的重要因素之一。为了发掘新的耐冷基因、诠释其耐冷分子机制并应用分子育种的手段提高水稻苗期耐冷性,前期已通过Northern表达分析,从已构建的水稻苗期低温诱导表达正向抑制差减cDNA文库中,发现了一个受低... 水稻苗期冷害是导致水稻减产的重要因素之一。为了发掘新的耐冷基因、诠释其耐冷分子机制并应用分子育种的手段提高水稻苗期耐冷性,前期已通过Northern表达分析,从已构建的水稻苗期低温诱导表达正向抑制差减cDNA文库中,发现了一个受低温诱导上调表达的功能未知的C2H2型锌指结构域蛋白新基因(特命名为OsCOI)。本研究进一步通过RT-PCR的方法从水稻中克隆了该基因,构建了其植物过表达载体,并通过农杆菌介导转入水稻基因组中,获得了其过表达转基因水稻株系,为进一步研究该基因的功能并探讨其在水稻耐冷分子育种中的应用价值奠定了基础。 展开更多

关键词 水稻 低温诱导表达基因 载体构建 遗传转化

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柑橘冷诱导基因及其启动子表达载体构建与瞬时表达分析 被引量：3

8

作者 周潇 姜航 +3 位作者 屈汉金 邓子牛 A.Gentile 龙桂友 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期353-358,348,共7页

【目的】以YFP为报告基因,构建柑橘冷诱导基因及其启动子的植物表达载体。【方法】克隆获得枳冷诱导基因Ptcor8及其启动子p Ptcor8,柠檬中同源基因Clcor8及其启动子p Clcor8;双酶切含启动子的克隆载体和植物表达原始载体p1D4,连接获得... 【目的】以YFP为报告基因,构建柑橘冷诱导基因及其启动子的植物表达载体。【方法】克隆获得枳冷诱导基因Ptcor8及其启动子p Ptcor8,柠檬中同源基因Clcor8及其启动子p Clcor8;双酶切含启动子的克隆载体和植物表达原始载体p1D4,连接获得含启动子的中间载体;再双酶切含冷诱导基因的克隆载体和中间载体,连接后获得重组质粒;通过冻融法将重组质粒导入农杆菌EHA105中。【结果】构建了p1D4/p Ptcor8-Ptcor8::YFP,p1D4/p Ptcor8-Clcor8::YFP和p1D4/p Clcor8-Ptcor8::YFP 3个融合表达载体,瞬时表达发现3个融合基因均可在冰糖橙叶片中表达。【结论】3个融合表达载体的成功构建为下一步转化柠檬,分析枳冷诱导基因Ptcor8及其启动子p Ptcor8的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 柑橘 低温诱导基因 载体构建 瞬时表达

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一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因 被引量：2

9

作者 刘美芹 沈昕 +1 位作者 卢存福 尹伟伦 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期67-72,共6页

该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly(A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操... 该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly(A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行.扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料(Driver)的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料(Tester)cDNA第二链中的共有序列.多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失.最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率.该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列.经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因. 展开更多

关键词 固相扣除杂交 聚合酶链式反应 低温诱导基因

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柑橘抗寒相关基因及抗寒基因工程研究进展 被引量：1

10

作者 张真真 邱立军 +2 位作者 刘博文 徐超红 徐建国 《浙江农业科学》 2015年第11期1845-1850,共6页

柑橘是我国南方重要经济树种,而低温是影响柑橘产量和分布的重要制约因素。基因差异表达分析技术是寻找植物抗寒基因的重要技术手段,而基因工程是获得植物抗寒品种的重要方法。本文综述了利用基因差异表达分析技术获得柑橘抗寒基因的方... 柑橘是我国南方重要经济树种,而低温是影响柑橘产量和分布的重要制约因素。基因差异表达分析技术是寻找植物抗寒基因的重要技术手段,而基因工程是获得植物抗寒品种的重要方法。本文综述了利用基因差异表达分析技术获得柑橘抗寒基因的方法,重点介绍了近年来在柑橘中已被分离鉴定的抗寒相关基因,分析了这些基因的抗寒功能及抗寒调控分子机制,并探讨了通过基因工程转化寒敏感柑橘的研究进展。 展开更多

关键词 柑橘 低温诱导基因 抗寒基因 基因表达调控 基因工程

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从琼脂糖凝胶中高效回收DNA技术的探讨 被引量：4

11

作者 徐剑 周君 陆小平 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期15-17,共3页

用两只离心管制成的凝胶过滤装置,从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简易方法。它依次包括以下步骤:凝胶过滤装置的制作、凝胶切割、凝胶低温冷冻、低温高速离心、ddH2O洗胶、DNA纯化和回收效果检测等。用此方法回收的DNA片段产率高... 用两只离心管制成的凝胶过滤装置,从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简易方法。它依次包括以下步骤:凝胶过滤装置的制作、凝胶切割、凝胶低温冷冻、低温高速离心、ddH2O洗胶、DNA纯化和回收效果检测等。用此方法回收的DNA片段产率高、质量纯,可直接用于分子生物学实验的后续操作,如载体连接、PCR模板获得、DNA探针制备、基因测序等。其优点是:DNA片段的回收率高(90%以上),质量好;操作简便,耗时短;回收装置简单,成本低廉,可进行商品化开发。 展开更多

关键词 DNA回收 凝胶过滤装置 蜜蜂磷酸甘油醛异构酶基因 桑树低温诱导基因

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