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低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用被引量：1: 1; 作者姜桢曹永梅 +4 位作者曾真顾玉春季莹莹赵宇鹏李颖川《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期674-681,共8页; 目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)... 展开更多; 关键词 BCL-2 低氧反应元件抗凋亡肺血管内皮细胞基因调控; 在线阅读下载PDF 职称材料

低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用被引量：1: 2; 作者王小忠彭启全 +1 位作者彭云恒廖文鹏《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1513-1516,共4页; 目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体... 展开更多; 关键词低氧反应元件单纯疱疹病毒胸苷激酶腺病毒载体肝肿瘤; 在线阅读下载PDF 职称材料

构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体被引量：1: 3; 作者聂小维孙立军 +2 位作者郝跃文杨广笑王全颖《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期278-280,283,共4页; 目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF... 展开更多; 关键词低氧反应元件(HRE) 重组腺伴随病毒载体低氧诱导; 在线阅读下载PDF 职称材料

经静脉注射的单链9型腺相关病毒介导基因在星形胶质细胞表达: 4; 作者王晓丹杨钊沈帆霞《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1036-1040,共5页; 目的·探讨静脉注射含低氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)启动子的单链9型腺相关病毒(single-stranded adeno-associated virus serotype 9,ssAAV9)能否介导LacZ基因在脑缺血区表达,及其可转染的脑细胞类型。方法·... 展开更多; 关键词 9型腺相关病毒脑缺血低氧反应元件星形胶质细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用被引量：1: 1; 作者姜桢曹永梅曾真顾玉春季莹莹赵宇鹏李颖川; 机构同济大学附属东方医院麻醉科上海交通大学附属第六人民医院麻醉科; 出处《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期674-681,共8页; 基金浦东新区科技发展基金(PKj2011-y36)~~; 文摘目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)条件下培养;96 h后通过荧光标记物确认感染效率,Western blotting检测转染后细胞内Bcl-2蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Bcl-2基因沉默明显下调细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达;HRE启动子仅在低氧环境中活性显著增强;重组慢病毒感染肺微血管内皮细胞后96 h时的转染效率约为90%,细胞内Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡增加;在低氧环境中,受HRE的调控,Lv-HRE-Bcl-2-shRNA组细胞凋亡率显著增高。结论低氧条件下,HRE作为氧敏感调控开关,可进一步增强Bcl-2-shRNA的作用,诱导肺血管内皮细胞凋亡,这将为肺动脉高压的血管重塑提供潜在的治疗靶标。; 关键词 BCL-2 低氧反应元件抗凋亡肺血管内皮细胞基因调控; Keywords Bd-2 hypoxia response element anti-apoptotic pulmonary vascular endothelial cells gene regulation; 分类号 R544.1 [医药卫生—心血管疾病]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用被引量：1: 2; 作者王小忠彭启全彭云恒廖文鹏; 机构广东省汕头市中心医院肝胆外科; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1513-1516,共4页; 基金广东省科技计划资助项目(No.2005B30301020); 文摘目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体外感染肝癌细胞系HepG2后分别在正常和低氧条件下培养。分别采用反转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blotting)技术检5测TKmRNA及蛋白表达情况,并用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理后以MTT法检测细胞的增殖情况。结果:RT-PCR及Western blotting结果显示,仅转染重组腺病毒Ad-HRE-TK并在低氧条件下培养的HepG2细胞特异性表达TK基因及蛋白。HepG2细胞感染Ad-HRE-TK后,在低氧培养条件下对GCV的敏感性明显增加,在感染复数(MOI)为100并用50mg/LGCV处理时,则有95%以上HepG2细胞被杀死。而正常氧浓度下培养组,未能观察到GCV的杀伤作用。结论:低氧条件下,HRE可特异性地促进HSV-TK基因的表达,从而诱导GCV的毒性作用。; 关键词低氧反应元件单纯疱疹病毒胸苷激酶腺病毒载体肝肿瘤; Keywords Hypoxic response element Herpes simplex virus thymidine kinase Adenoviral vector Liver neoplasms; 分类号 R73 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体被引量：1: 3; 作者聂小维孙立军郝跃文杨广笑王全颖; 机构第四军医大学西京医院放射科华广生物工程有限公司; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期278-280,283,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30871041); 文摘目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF-binding site,HBS)A/GCGTG(4×HBS)的36 bp核酸片段和插入到CMV启动子TATA Box上游的间隔区35 bp的核酸序列,并运用PCR方法扩增。测序正确后,通过常规分子生物学重组方法,将原AAV载体质粒中CMV启动子替换成为含有最小人工合成HRE的CMV启动子,重组构建了低氧反应元件调控的AAV载体。并在该载体CMV启动子下游的多克隆位点插入具有6×His标签的NT4-6His-PR39融合肽序列。磷酸钙沉淀法包装表达NT4-6His-PR39融合肽序列的重组AAV。重组病毒感染人宫颈癌细胞(HeLa),化学性低氧培养,使用免疫组织化学观察低氧条件的诱导表达作用。结果:基因测序结果和酶切结果表明,我们已经把人工合成的HRE,以正确的间隔插入到CMV启动子的上游,成功地构建了HRE调控的AAV重组载体。重组病毒感染的细胞在常氧和低氧诱导表达的结果表明,在启动子上游插入人工合成的微小HRE能够有效调控重组腺相关病毒的表达。结论:使用PCR方法可以将人工合成的HER插入缺乏内切酶识别点的CMV启动子上游,可以制备低氧调控的真核表达载体。人工合成的微小HRE能够有效的调控CMV启动子控制的下游基因表达。该载体的成功制备在缺血性心脑血管病的预防和治疗中具有重要的理论和使用价值。; 关键词低氧反应元件(HRE) 重组腺伴随病毒载体低氧诱导; Keywords hypoxic-responsive element（HRE） recombinate adenoassociated virus vector hypoxia inducible; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名经静脉注射的单链9型腺相关病毒介导基因在星形胶质细胞表达: 4; 作者王晓丹杨钊沈帆霞; 机构上海交通大学医学院附属瑞金医院北院美国加州大学旧金山分校麻醉与围术期医学系脑血管研究中心; 出处《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1036-1040,共5页; 基金国家自然科学基金(81771281,81471177)。; 文摘目的·探讨静脉注射含低氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)启动子的单链9型腺相关病毒(single-stranded adeno-associated virus serotype 9,ssAAV9)能否介导LacZ基因在脑缺血区表达,及其可转染的脑细胞类型。方法·建立永久性左侧远端大脑中动脉闭塞(distal middle cerebral artery occlusion,dMCAO)小鼠模型,模型建立1 d和5 d后检测脑缺血区中低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)的表达。dMCAO模型建立1 h经颈静脉注射AAV9-H9LacZ载体,注射5 d后X-gal染色检测脑缺血区和肝组织中LacZ基因编码蛋白β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)的表达,免疫荧光双染色检测β-gal在星形胶质细胞、神经元及血管内皮细胞内的表达。结果·dMCAO模型建立1 d和5 d后小鼠缺血病灶局部HIF-1表达增高。β-gal主要在AAV9-H9LacZ注射小鼠的缺血半暗带区表达,其肝脏组织无β-gal阳性表达。脑缺血区β-gal主要与胶质细胞原纤维酸性蛋白共表达,少量β-gal与神经元特异核蛋白共表达。结论·经静脉注射的ssAAV9主要介导基因在脑缺血区星形胶质细胞表达。HRE能有效控制LacZ基因主要在脑缺血区表达。; 关键词 9型腺相关病毒脑缺血低氧反应元件星形胶质细胞; Keywords adeno-associated virus serotype 9(AAV9) cerebral ischemia hypoxia-responsive element(HRE) astrocyte; 分类号 R741 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用	姜桢曹永梅曾真顾玉春季莹莹赵宇鹏李颖川	《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用	王小忠彭启全彭云恒廖文鹏	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2009	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体	聂小维孙立军郝跃文杨广笑王全颖	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	经静脉注射的单链9型腺相关病毒介导基因在星形胶质细胞表达	王晓丹杨钊沈帆霞	《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2020	0	在线阅读下载PDF 职称材料