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柑桔基因工程位点特异性重组系统研究进展
1
作者
江学友
陈善春
《中国南方果树》
北大核心
2014年第6期24-26,共3页
基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有...
基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有效清除选择标记基因,但同样存在删除不完全的缺点。组成型表达启动子驱动Cre/loxP系统表现出极高的删除效率,且极少有嵌合体的发生。FLP/FRT系统已被成功用于转基因植物选择标记基因的删除,但在柑桔上还没有相关的报道。
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关键词
柑桔基因工程
选择标记基因
位点特异性重组系统
基因删除
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职称材料
Cre/LoxP系统联合SV40 LTag诱导可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系的建立
被引量:
2
2
作者
李晓航
张佳林
+5 位作者
康铁利
李乐
程颖
石蕊
赵宁
刘永锋
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期979-982,共4页
目的探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法。方法采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞;逆转录病毒载体(SSR69)转染成纤维细胞,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞;用表达Cre重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞,...
目的探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法。方法采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞;逆转录病毒载体(SSR69)转染成纤维细胞,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞;用表达Cre重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞,筛选获得回复后成纤维细胞。对原代、永生化及回复后成纤维细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态;采用细胞生长曲线法测定细胞增殖能力。免疫荧光染色检测Vimentin在原代及永生化成纤维细胞中的表达情况,平板克隆实验评价回复后成纤维细胞的致瘤性。结果提取了大鼠皮肤成纤维细胞,并筛选出表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞,二者形态无明显差异,均贴壁生长,呈长梭形或多角形,但永生化成纤维细胞体外增殖能力明显高于原代成纤维细胞(P<0.05),在体外培养传代>25代。细胞免疫荧光提示两种细胞均在细胞质内表达Vimentin。回复后成纤维细胞不表达SV40 LTag,其体外增殖能力与原代细胞无明显差异(P>0.05),无致瘤性。结论应用Cre/LoxP系统联合SV40 LTag可以建立可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系。
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关键词
永生化
猿猴病毒大T抗原基因
Cre/LoxP
位点
特
异性
重组
酶
系统
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职称材料
拟南芥原生质体瞬时表达快速验证重组酶外源基因删除
3
作者
池俊杰
戴绍军
+1 位作者
魏建华
王宏芝
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期86-92,共7页
通过在拟南芥原生质体中瞬时表达重组酶删除系统,以拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因的启动子诱导加入马铃薯StLs1基因第2个内含子的重组酶表达,证明瞬时转化质粒DNA中位于识别位点之间的基因元件可以被有效删除。建立了一种快速验证重组酶外...
通过在拟南芥原生质体中瞬时表达重组酶删除系统,以拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因的启动子诱导加入马铃薯StLs1基因第2个内含子的重组酶表达,证明瞬时转化质粒DNA中位于识别位点之间的基因元件可以被有效删除。建立了一种快速验证重组酶外源基因删除系统的方法。
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关键词
位点特异性重组系统
热激蛋白Hsp18
2启动子
拟南芥原生质体瞬时表达
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职称材料
高效删除标记基因的Bhlea2植物表达载体的构建
被引量:
1
4
作者
邹璐琳
魏建华
+1 位作者
王宏芝
张少斌
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期79-82,共4页
为培育去除选择标记基因的耐旱转基因植物,同时利用Cre/Lox和FLP/frt系统,构建一个能够高效删除标记基因的Bhlea2基因植物表达载体。拟南芥rd29A启动子是在低温、干旱、高盐胁迫下的快速应答启动子,玉米ubiquitin启动子可有效驱动外源...
为培育去除选择标记基因的耐旱转基因植物,同时利用Cre/Lox和FLP/frt系统,构建一个能够高效删除标记基因的Bhlea2基因植物表达载体。拟南芥rd29A启动子是在低温、干旱、高盐胁迫下的快速应答启动子,玉米ubiquitin启动子可有效驱动外源基因的转录,拟南芥pAB5启动子是花粉及胚胎等发育早期特异表达的启动子,利用上述启动子构建了表达Bhlea2基因并能够删除标记基因的植物表达载体。该表达载体包括重组酶表达元件pAB5-FLP、Bhlea2抗旱基因表达元件rd29A-Bhlea2和bar标记基因表达元件ubiquitin-bar。
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关键词
位点特异性重组系统
标记基因删除
转基因植物
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职称材料
题名
柑桔基因工程位点特异性重组系统研究进展
1
作者
江学友
陈善春
机构
西南大学柑桔研究所/中国农业科学院柑桔研究所
出处
《中国南方果树》
北大核心
2014年第6期24-26,共3页
文摘
基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有效清除选择标记基因,但同样存在删除不完全的缺点。组成型表达启动子驱动Cre/loxP系统表现出极高的删除效率,且极少有嵌合体的发生。FLP/FRT系统已被成功用于转基因植物选择标记基因的删除,但在柑桔上还没有相关的报道。
关键词
柑桔基因工程
选择标记基因
位点特异性重组系统
基因删除
分类号
S666 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
Cre/LoxP系统联合SV40 LTag诱导可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系的建立
被引量:
2
2
作者
李晓航
张佳林
康铁利
李乐
程颖
石蕊
赵宁
刘永锋
机构
中国医科大学附属第一医院普通外科教研室肝胆外科暨器官移植科
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期979-982,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30371359
30870644
31140059)
文摘
目的探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法。方法采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞;逆转录病毒载体(SSR69)转染成纤维细胞,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞;用表达Cre重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞,筛选获得回复后成纤维细胞。对原代、永生化及回复后成纤维细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态;采用细胞生长曲线法测定细胞增殖能力。免疫荧光染色检测Vimentin在原代及永生化成纤维细胞中的表达情况,平板克隆实验评价回复后成纤维细胞的致瘤性。结果提取了大鼠皮肤成纤维细胞,并筛选出表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞,二者形态无明显差异,均贴壁生长,呈长梭形或多角形,但永生化成纤维细胞体外增殖能力明显高于原代成纤维细胞(P<0.05),在体外培养传代>25代。细胞免疫荧光提示两种细胞均在细胞质内表达Vimentin。回复后成纤维细胞不表达SV40 LTag,其体外增殖能力与原代细胞无明显差异(P>0.05),无致瘤性。结论应用Cre/LoxP系统联合SV40 LTag可以建立可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系。
关键词
永生化
猿猴病毒大T抗原基因
Cre/LoxP
位点
特
异性
重组
酶
系统
Keywords
immortalization
simian virus 40 lange T antigen(SV40 LTag)
cre/loxP site-specific recombinase system
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
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职称材料
题名
拟南芥原生质体瞬时表达快速验证重组酶外源基因删除
3
作者
池俊杰
戴绍军
魏建华
王宏芝
机构
东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心
北京农业生物技术研究中心
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期86-92,共7页
基金
国家高技术研究发展计划(2013AA102702)
文摘
通过在拟南芥原生质体中瞬时表达重组酶删除系统,以拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因的启动子诱导加入马铃薯StLs1基因第2个内含子的重组酶表达,证明瞬时转化质粒DNA中位于识别位点之间的基因元件可以被有效删除。建立了一种快速验证重组酶外源基因删除系统的方法。
关键词
位点特异性重组系统
热激蛋白Hsp18
2启动子
拟南芥原生质体瞬时表达
Keywords
Site-specific recombination system Promoter for heat-shock proteins Hspl$.2 Transient gene expression system of Arabidopsis protoplast
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
高效删除标记基因的Bhlea2植物表达载体的构建
被引量:
1
4
作者
邹璐琳
魏建华
王宏芝
张少斌
机构
沈阳农业大学生物科学技术学院
北京农业生物技术研究中心
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期79-82,共4页
基金
创新能力建设专项(KJCX201102003)
转基因重大专项(2009ZX08009-060B)
+2 种基金
国家高技术研究发展计划"863"计划(2009AA10Z107)
北京主要作物高效育种关键技术的合作研究(2010DFB33740)
辽宁省教育厅高等学校科学技术研究项目(2008663)
文摘
为培育去除选择标记基因的耐旱转基因植物,同时利用Cre/Lox和FLP/frt系统,构建一个能够高效删除标记基因的Bhlea2基因植物表达载体。拟南芥rd29A启动子是在低温、干旱、高盐胁迫下的快速应答启动子,玉米ubiquitin启动子可有效驱动外源基因的转录,拟南芥pAB5启动子是花粉及胚胎等发育早期特异表达的启动子,利用上述启动子构建了表达Bhlea2基因并能够删除标记基因的植物表达载体。该表达载体包括重组酶表达元件pAB5-FLP、Bhlea2抗旱基因表达元件rd29A-Bhlea2和bar标记基因表达元件ubiquitin-bar。
关键词
位点特异性重组系统
标记基因删除
转基因植物
Keywords
Site-specific recombination system Deletion marker gene Transgenic plants
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
柑桔基因工程位点特异性重组系统研究进展
江学友
陈善春
《中国南方果树》
北大核心
2014
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Cre/LoxP系统联合SV40 LTag诱导可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系的建立
李晓航
张佳林
康铁利
李乐
程颖
石蕊
赵宁
刘永锋
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
拟南芥原生质体瞬时表达快速验证重组酶外源基因删除
池俊杰
戴绍军
魏建华
王宏芝
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
高效删除标记基因的Bhlea2植物表达载体的构建
邹璐琳
魏建华
王宏芝
张少斌
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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职称材料
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