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柑桔基因工程位点特异性重组系统研究进展
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作者 江学友 陈善春 《中国南方果树》 北大核心 2014年第6期24-26,共3页
基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有... 基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有效清除选择标记基因,但同样存在删除不完全的缺点。组成型表达启动子驱动Cre/loxP系统表现出极高的删除效率,且极少有嵌合体的发生。FLP/FRT系统已被成功用于转基因植物选择标记基因的删除,但在柑桔上还没有相关的报道。 展开更多
关键词 柑桔基因工程 选择标记基因 位点特异性重组系统 基因删除
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Cre/LoxP系统联合SV40 LTag诱导可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系的建立 被引量:2
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作者 李晓航 张佳林 +5 位作者 康铁利 李乐 程颖 石蕊 赵宁 刘永锋 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期979-982,共4页
目的探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法。方法采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞;逆转录病毒载体(SSR69)转染成纤维细胞,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞;用表达Cre重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞,... 目的探索可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞的建立方法。方法采用胰酶消化法分离培养大鼠皮肤成纤维细胞;逆转录病毒载体(SSR69)转染成纤维细胞,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞;用表达Cre重组酶的腺病毒感染永生化成纤维细胞,筛选获得回复后成纤维细胞。对原代、永生化及回复后成纤维细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态;采用细胞生长曲线法测定细胞增殖能力。免疫荧光染色检测Vimentin在原代及永生化成纤维细胞中的表达情况,平板克隆实验评价回复后成纤维细胞的致瘤性。结果提取了大鼠皮肤成纤维细胞,并筛选出表达SV40 LTag的永生化成纤维细胞,二者形态无明显差异,均贴壁生长,呈长梭形或多角形,但永生化成纤维细胞体外增殖能力明显高于原代成纤维细胞(P<0.05),在体外培养传代>25代。细胞免疫荧光提示两种细胞均在细胞质内表达Vimentin。回复后成纤维细胞不表达SV40 LTag,其体外增殖能力与原代细胞无明显差异(P>0.05),无致瘤性。结论应用Cre/LoxP系统联合SV40 LTag可以建立可复性永生化大鼠皮肤成纤维细胞系。 展开更多
关键词 永生化 猿猴病毒大T抗原基因 Cre/LoxP位点异性重组系统
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拟南芥原生质体瞬时表达快速验证重组酶外源基因删除
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作者 池俊杰 戴绍军 +1 位作者 魏建华 王宏芝 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期86-92,共7页
通过在拟南芥原生质体中瞬时表达重组酶删除系统,以拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因的启动子诱导加入马铃薯StLs1基因第2个内含子的重组酶表达,证明瞬时转化质粒DNA中位于识别位点之间的基因元件可以被有效删除。建立了一种快速验证重组酶外... 通过在拟南芥原生质体中瞬时表达重组酶删除系统,以拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因的启动子诱导加入马铃薯StLs1基因第2个内含子的重组酶表达,证明瞬时转化质粒DNA中位于识别位点之间的基因元件可以被有效删除。建立了一种快速验证重组酶外源基因删除系统的方法。 展开更多
关键词 位点特异性重组系统 热激蛋白Hsp18 2启动子 拟南芥原生质体瞬时表达
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高效删除标记基因的Bhlea2植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 邹璐琳 魏建华 +1 位作者 王宏芝 张少斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期79-82,共4页
为培育去除选择标记基因的耐旱转基因植物,同时利用Cre/Lox和FLP/frt系统,构建一个能够高效删除标记基因的Bhlea2基因植物表达载体。拟南芥rd29A启动子是在低温、干旱、高盐胁迫下的快速应答启动子,玉米ubiquitin启动子可有效驱动外源... 为培育去除选择标记基因的耐旱转基因植物,同时利用Cre/Lox和FLP/frt系统,构建一个能够高效删除标记基因的Bhlea2基因植物表达载体。拟南芥rd29A启动子是在低温、干旱、高盐胁迫下的快速应答启动子,玉米ubiquitin启动子可有效驱动外源基因的转录,拟南芥pAB5启动子是花粉及胚胎等发育早期特异表达的启动子,利用上述启动子构建了表达Bhlea2基因并能够删除标记基因的植物表达载体。该表达载体包括重组酶表达元件pAB5-FLP、Bhlea2抗旱基因表达元件rd29A-Bhlea2和bar标记基因表达元件ubiquitin-bar。 展开更多
关键词 位点特异性重组系统 标记基因删除 转基因植物
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