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检测猪伪狂犬病病毒gE抗体红细胞凝集试验的建立及应用 被引量:11
1
作者 廖文军 吴健敏 +4 位作者 覃绍敏 袁书智 陈凤莲 华俊 谢彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期162-165,共4页
以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)—猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病毒gE抗体的红细胞凝集试验。利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原工作浓度为55μg/mL,血清最佳稀释度为1∶20,作用时间15 min,与猪... 以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)—猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病毒gE抗体的红细胞凝集试验。利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原工作浓度为55μg/mL,血清最佳稀释度为1∶20,作用时间15 min,与猪瘟(CSF)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪乙型脑炎(JE)、猪布氏杆菌病(Brucellosis)阳性血清和PRV gE缺失疫苗接种的猪免疫血清均不出现红细胞凝集现象,与PRV标准阳性血清反应出现肉眼可见的凝集圈。与美国进口的PRV抗体检测gE-ELISA诊断试剂盒检测结果比较,50份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100%。红细胞凝集试验检测方法具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 红细胞凝集试验 ge基因 抗体检测
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猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用 被引量:9
2
作者 廖文军 吴健敏 +4 位作者 谭攀 覃绍敏 陈凤莲 马玲 张伟 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期12-16,32,共6页
以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳... 以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。 展开更多
关键词 狂犬病 金标免疫层析法 ge基因 抗体检测
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三种伪狂犬病病毒gE抗体ELISA检测试剂盒的比较 被引量:6
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作者 董雅琴 刘爽 +3 位作者 郑辉 张志 吴发兴 李晓成 《中国动物检疫》 CAS 2017年第11期79-81,88,共4页
为比较3种品牌(A、B、C)伪狂犬病病毒(PRV)g E抗体ELISA检测试剂盒的临床使用效果,应用中和试验来标定伪狂犬病非免疫猪场的180份临床血清样品,同时用3种试剂盒进行检测,并对试剂盒的重复性、敏感性、特异性以及与中和试验结果的符合度... 为比较3种品牌(A、B、C)伪狂犬病病毒(PRV)g E抗体ELISA检测试剂盒的临床使用效果,应用中和试验来标定伪狂犬病非免疫猪场的180份临床血清样品,同时用3种试剂盒进行检测,并对试剂盒的重复性、敏感性、特异性以及与中和试验结果的符合度等指标进行测定与分析。结果显示:3种试剂盒的批内稳定性均较好,变异系数均小于10%;批间重复性差异较大,变异系数最小者为8.09%,最大者高达21.31%;3种试剂盒的诊断特性良好,敏感性为95.56%~97.78%,特异性为94.44%~100%;各试剂盒检测结果与中和试验结果均完全相符(Kappa值为0.91~0.96)。比较结果表明,3种试剂盒均适用于临床样品的PRV g E抗体检测,其中稳定性及敏感性俱佳的试剂盒C更适用于PRV的持续监测、早期发现、引种检疫及净化效果评估,而特异性与准确性最高的试剂盒B更适用于贵重病畜的诊断淘汰。因此,生产实践中应根据诊断目的合理选择最适试剂盒。 展开更多
关键词 狂犬病 g E抗体 ELISA检测试剂盒 比较
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眉县某猪场猪圆环病毒病与猪伪狂犬病免疫抗体检测与分析
4
作者 闫红军 王勃森 《陕西农业科学》 2024年第11期85-88,共4页
为协助当地动物防疫站和动物卫生监督所对眉县某猪场猪圆环病毒病(PCVD)和猪伪狂犬病(PR)免疫效果评价与监督检查,采集了该场624份血清样品(其中:哺乳仔猪168份,保育猪169份,后备猪144份,种公猪13份,母猪130份),采用间接ELISA抗体检测... 为协助当地动物防疫站和动物卫生监督所对眉县某猪场猪圆环病毒病(PCVD)和猪伪狂犬病(PR)免疫效果评价与监督检查,采集了该场624份血清样品(其中:哺乳仔猪168份,保育猪169份,后备猪144份,种公猪13份,母猪130份),采用间接ELISA抗体检测。结果显示,猪圆环病毒2型疫苗免疫抗体阳性率在81.66%~95.24%之间,平均为86.70%;猪伪狂犬病基因缺失苗免疫抗体阳性率在94.64%~100.00%之间,平均为98.24%。说明该猪场猪圆环病毒病和猪伪狂犬病免疫抗体阳性合格率均达到了国家有关动物疫病免疫计划规定的要求,免疫整体效果较为理想,但仍应定期抽检疫苗质量,持续优化免疫程序。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 狂犬病 免疫抗体 检测 分析
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基于gE蛋白的羊伪狂犬病病毒间接ELISA的建立与应用
5
作者 刘广阔 吴发兴 +4 位作者 于皓同 王凯茸 张锐铮 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期28-33,共6页
为建立羊源伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)抗体的检测方法,从PRV中对gE基因进行克隆,并构建重组载体对gE蛋白进行原核表达,以重组gE蛋白为包被抗原,建立PRV抗体间接ELISA检测方法,并进行临床样本检测。结果显示,重组gE蛋白大小为... 为建立羊源伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)抗体的检测方法,从PRV中对gE基因进行克隆,并构建重组载体对gE蛋白进行原核表达,以重组gE蛋白为包被抗原,建立PRV抗体间接ELISA检测方法,并进行临床样本检测。结果显示,重组gE蛋白大小为42 ku,以包涵体形式表达;Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应原性;重组蛋白作为包被抗原的最佳工作浓度为1μg/mL,待检血清100倍稀释,以HRP标记的兔抗山羊IgG 10000倍稀释作为二抗;检测临床样本时判定阴阳性的临界值为0.284;灵敏性试验结果显示,羊PRV阳性血清稀释2048倍时检测结果仍为阳性;批内变异系数(2.45%~5.00%)与批间变异系数(2.55%~7.41%)均小于10%;采用建立的方法检测其他常见羊源病毒阳性血清结果均为阴性;对收集的376份临床羊血清进行检测,PRV阳性率为10.6%。建立的间接ELISA检测方法可用于羊源样本中伪狂犬病病毒抗体的检测,该方法的建立为羊场PRV抗体检测提供了技术支持。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒 ge蛋白 间接ELISA
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猪伪狂犬病病毒BJC变异株分离鉴定及gB和gE基因序列分析
6
作者 娄昆鹏 李阳 +2 位作者 项伟 徐博 朱国强 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期20-26,共7页
为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gB、gE基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件Geneious Prime... 为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gB、gE基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件Geneious Prime对gB、gE基因进行遗传进化和同源性分析。结果显示,该分离株为PRV强毒株。该病毒在ST细胞生长良好,纯化后的病毒经测定半数组织培养感染量为10^(8.5)TCID_(50)/mL,对6周龄昆明小鼠的LD_(50)为10^(5.8)TCID_(50)。测序结果与预期的PRV gB、gE基因片段相符。遗传进化分析可知与国内代表PRV变异毒株如JS2012、HN1201、ZJ01等处于同一分支,与欧美分离株如Bartha、Kaplan、Becker等亲缘关系较远,处于不同的大分支。氨基酸序列分析表明,BJC株与国外经典毒株和国内早期分离毒株存在多个特征性位点替换,符合国内流行变异毒株特征,BJC株为PRV变异毒株。 展开更多
关键词 狂犬病毒病 分离鉴定 BJC株 gB、ge基因 序列分析
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猪伪狂犬病病毒gE蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:4
7
作者 寇晓晶 高峰 +1 位作者 郭慧琳 刘剑锋 《中国动物检疫》 CAS 2018年第5期91-94,共4页
以原核表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法并进行相应优化,研制出了猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,并与国内市场标杆产品进行比较,发现阳性符合率为88.03%,阴性符合率为91.47%,总体符合率达到89.84%。同时,... 以原核表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法并进行相应优化,研制出了猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,并与国内市场标杆产品进行比较,发现阳性符合率为88.03%,阴性符合率为91.47%,总体符合率达到89.84%。同时,该试剂盒批间、批内变异系数均小于10%,具有较好的重复性。该检测试剂盒的研制,可为猪场猪伪狂犬病毒野毒感染的检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 ge蛋白 间接ELISA试剂盒 符合率
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北疆地区猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体血清学调查报告 被引量:1
8
作者 杨蓓 刘功成 +8 位作者 杨慧敏 刘绒欢 张倩 李江涛 王菲 屈勇刚 成池杰 王闯 张新银 《养猪》 2015年第3期105-106,共2页
为了解新疆北疆地区猪伪狂犬病病毒野毒感染情况,采用阻断ELISA(酶联免疫吸附试验)方法,对2014年6月至2015年3月采集自北疆巴州、石河子、克拉玛依、伊犁地区18个生猪养殖场共1 788份血清样品进行了猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体的检测。结... 为了解新疆北疆地区猪伪狂犬病病毒野毒感染情况,采用阻断ELISA(酶联免疫吸附试验)方法,对2014年6月至2015年3月采集自北疆巴州、石河子、克拉玛依、伊犁地区18个生猪养殖场共1 788份血清样品进行了猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体的检测。结果显示,猪伪狂犬病病毒野毒平均感染率为68.23%(1 220/1 788),各养殖场感染程度不一,感染率最高达100.00%,最低为28.89%。表明北疆地区普遍存在猪伪狂犬病病毒野毒感染,且感染率处于较高水平。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 ge蛋白 ELISA
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猪群进行猪伪狂犬病净化后病毒gE抗体的检测与分析 被引量:2
9
作者 张进隆 唐文雅 +3 位作者 王福厚 贾志江 杨红梅 张潇文 《国外畜牧学(猪与禽)》 2021年第5期55-56,共2页
为了解猪伪狂犬病在规模化猪场的净化效果,采用ELISA对规模化猪场血清检测样品中猪伪狂犬病病毒gE抗体的水平进行判定。结果显示:净化前,3个规模化猪场共检测34份血清样品,其中猪伪狂犬病病毒g E抗体阳性3份,抗体阳性率达8.8%。采取净... 为了解猪伪狂犬病在规模化猪场的净化效果,采用ELISA对规模化猪场血清检测样品中猪伪狂犬病病毒gE抗体的水平进行判定。结果显示:净化前,3个规模化猪场共检测34份血清样品,其中猪伪狂犬病病毒g E抗体阳性3份,抗体阳性率达8.8%。采取净化措施后,3个猪场共检测34份血清样品,未检出猪伪狂犬病病毒gE阳性抗体,净化措施取得明显的效果。 展开更多
关键词 狂犬病 ge抗体 检测 分析
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猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立
10
作者 杨大为 刘书怡 +3 位作者 蔺雅婷 陈虎 张洪亮 李桂梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5439-5448,共10页
【目的】制备猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB蛋白单克隆抗体并建立竞争ELISA检测方法,为PRV的抗体检测及试剂盒开发提供参考。【方法】本研究使用PRV gB蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,使用PEG1500将小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行... 【目的】制备猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB蛋白单克隆抗体并建立竞争ELISA检测方法,为PRV的抗体检测及试剂盒开发提供参考。【方法】本研究使用PRV gB蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,使用PEG1500将小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,用间接ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞,采用有限稀释法经过2轮亚克隆,将阳性杂交瘤细胞通过体内诱生法制备腹水,并通过饱和硫酸铵法对腹水进行纯化制备单克隆抗体,用单克隆抗体建立竞争ELISA检测方法。使用棋盘法对反应条件进行优化,对阴性血清进行检测,计算该方法的临界值,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后与商品化试剂盒同时对临床血清样品进行检测,比较二者的符合率。【结果】获得2D6、2D8两株杂交瘤细胞均为IgG1型,轻链为κ链,建立的竞争ELISA方法单克隆抗体最佳稀释度为1∶400,蛋白最佳包被浓度为1μg/mL,待检血清最佳稀释浓度为1∶4,最佳封闭液为1%BSA,酶标二抗的最佳稀释度为1∶4000。与其他临床常见的猪病病原不发生交叉反应,具有良好的特异性。阳性血清稀释至1∶256仍为阳性,证明该方法灵敏性好。批内和批间的变异系数均<10%,证明建立的竞争ELISA方法具有良好的重复性。与商品化试剂盒比较,总体符合率达93.3%。【结论】本研究成功制备针对PRV gB蛋白的单克隆抗体,并应用单克隆抗体建立了PRV gB抗体竞争ELISA检测方法。 展开更多
关键词 狂犬病病毒(PRV) gB蛋白 单克隆抗体 ELISA
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猪伪狂犬病病毒gG、gE和TK基因多重PCR检测方法的建立及应用
11
作者 吴晓敏 陈润山 +5 位作者 李华明 项维 徐梦然 杨荣荣 雷连成 张付贤 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期7-12,共6页
建立准确鉴别猪群伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)野毒株和基因缺失疫苗株高效多重PCR方法,对PRV gG、gE和TK基因保守区域设计合成特异性引物,优化反应体系和条件,建立多重PCR鉴别检测方法,对临床样品进行检测应用。结果... 建立准确鉴别猪群伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)野毒株和基因缺失疫苗株高效多重PCR方法,对PRV gG、gE和TK基因保守区域设计合成特异性引物,优化反应体系和条件,建立多重PCR鉴别检测方法,对临床样品进行检测应用。结果成功建立了鉴别PRV gG、gE和TK基因缺失疫苗株和野毒株感染的多重PCR检测方法,该方法对PRV gG、gE和TK基因可进行特异性扩增,对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪副猪嗜血杆菌等相关病原均无扩增,对携带gG、gE和TK混合阳性质粒的最低检测限为2.5×10^(-5) ng/μL,具有良好的重复性。用该方法检测53份猪组织样品,检出PRV野毒感染的样品7份,与国标方法和单一PCR法检测结果符合率为100%。建立的猪伪狂犬病病毒野毒株和基因缺失疫苗株多重PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,在生产中可快速、高效鉴别猪群PRV野毒感染和基因缺失疫苗免疫,可为PRV的快速鉴别检测、流行病学调查和防控提供技术支持。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 gG基因 ge基因 TK基因 多重PCR
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猪伪狂犬病病毒gE基因缺失苗免疫试验
12
作者 仉弦 《中国畜禽种业》 2024年第1期130-134,共5页
为了进一步掌握猪伪狂犬病病毒gE基因缺失苗的免疫接种效果,并构建合理的免疫接种程序,使用国产猪伪狂犬病病毒gE基因缺失苗,并选择4种不同的免疫接种程序制定4个处理组别,并设计了对照组,对250头繁殖母猪和200头种公猪以及1000头仔猪... 为了进一步掌握猪伪狂犬病病毒gE基因缺失苗的免疫接种效果,并构建合理的免疫接种程序,使用国产猪伪狂犬病病毒gE基因缺失苗,并选择4种不同的免疫接种程序制定4个处理组别,并设计了对照组,对250头繁殖母猪和200头种公猪以及1000头仔猪分别进行免疫接种试验并进行抗体检测,证明疫苗的免疫效果。结果表明,本次所使用的疫苗均能够产生良好的免疫保护效果,无论是跟胎免疫还是1年2次免疫,或者每间隔4个月进行免疫,均能够取得良好的免疫接种效果,种猪的免疫抗体合格率达到100%,仔猪在49日龄前抗体合格率也能够达到100%。75日龄之后,仔猪的抗体呈现逐渐消失的态势,120日龄基本消失。在今后猪伪狂犬病疫苗免疫接种过程中,为了增强猪群的免疫能力,避免野毒株传入,建议仔猪在首次免疫接种之后进行第2次强化免疫接种,而种公猪和繁殖母猪在春秋两季进行免疫接种之后,若不给仔猪进行免疫,仔猪在35日龄之后抗体水平会逐渐下降,直到全部为阴性,不能够抵抗野毒株的侵袭,因此该种方法不宜推广应用。 展开更多
关键词 狂犬病病毒ge基因缺失苗 免疫接种 接种效果
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伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析 被引量:11
13
作者 王勤 郭万柱 +2 位作者 徐志文 汪铭书 王小玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期389-393,共5页
根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到... 根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经酶切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。 展开更多
关键词 狂犬病 病毒 Fa株 ge基因 克隆 序列分析 PCR扩增
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猪伪狂犬病病毒gE蛋白在野毒诊断中的应用进展 被引量:21
14
作者 马力 杨丽梅 +6 位作者 徐倩倩 王艳 张颖 张志美 郭时金 沈志强 王艳萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期249-253,共5页
猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因缺失弱毒疫苗在中国的大规模免疫应用,对预防和控制猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)起到了重要作用,同时亟需建立与gE基因缺失弱毒疫苗配套的鉴别诊断技术,淘汰净化野毒感染猪,减少免疫猪被... 猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因缺失弱毒疫苗在中国的大规模免疫应用,对预防和控制猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)起到了重要作用,同时亟需建立与gE基因缺失弱毒疫苗配套的鉴别诊断技术,淘汰净化野毒感染猪,减少免疫猪被误杀的可能,逐步实现PRV的净化。随着分子生物学与免疫学技术的日臻进步,基于PRV gE蛋白的分子生物学和血清学诊断方法不断发展与完善。文章就近年来基于gE蛋白的各种分子生物学和血清学诊断方法的最新研究现状及发展前景进行综述,以期为中国PRV的诊断与防控提供科学依据。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 ge蛋白 野毒 诊断
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貂源伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE基因分子特征 被引量:9
15
作者 芮萍 刘曜综 +3 位作者 马增军 王秋悦 杨彩然 刘谢荣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1268-1272,共5页
2014年以来,我国多个毛皮动物养殖场不同日龄的貂出现神经症状、腹泻和急性死亡等,采集昌黎县病死貂的脑组织通过细胞培养、病毒蚀斑纯化、病毒的形态结构观察、动物接种试验分离到1株伪狂犬病病毒,命名为Mink 1。病料接种MDCK细胞能够... 2014年以来,我国多个毛皮动物养殖场不同日龄的貂出现神经症状、腹泻和急性死亡等,采集昌黎县病死貂的脑组织通过细胞培养、病毒蚀斑纯化、病毒的形态结构观察、动物接种试验分离到1株伪狂犬病病毒,命名为Mink 1。病料接种MDCK细胞能够产生典型的细胞病变,病毒粒子在电镜下呈圆形、有囊膜、直径约为150nm,病毒悬液接种家兔能引起家兔奇痒、麻痹死亡。利用PCR方法从病死动物脑组织中扩增PRVgE基因,gE基因序列分析表明,从貂的病料中扩增的gE基因与2012年猪伪狂犬分离株的相似性高达99.4%,进化树位于一个相对独立的分支。与经典毒株相比,在142—144位和1 487—1 490位两处同时存在GAC和ACG连续碱基的插入。以上试验结果证实该病例是由伪狂犬病病毒感染所引致。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 分离鉴定 ge基因
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应用Cre-loxP系统构建伪狂犬病病毒gE/TK双缺失株 被引量:12
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作者 梁苑燕 胡艳芬 +3 位作者 张小荣 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1802-1809,共8页
为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本... 为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本,以相同方法构建gE/TK双缺失株rPRV-gE-/TK-。荧光检测和PCR结果显示成功构建了gE单缺失株和gE/TK双缺失株;病毒生长曲线测定可见rPRV-gE-在PK15细胞上的增殖速度与野生株相似,而rPRV-gE-/TK-较为缓慢;rPRV-gE-/TK-对小鼠的半数致死量大于1×105 TCID50,显著高于rPRV-gE-和野生株;缺失株免疫小鼠强毒攻击后能提供80%的保护。这些结果表明以Cre/loxP系统可重复使用构建伪狂犬病病毒多基因缺失株,为研制伪狂犬病病毒基因缺失苗和载体疫苗提供了快速筛选的技术平台。 展开更多
关键词 狂犬病 ge基因 TK基因 重组病毒
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猪伪狂犬病病毒流行株gE蛋白表达及其多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 曲哲会 赵瑜 +4 位作者 张喜文 连慧香 赵云焕 陈斌 郭晓秋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第2期631-639,共9页
本研究旨在获得重组伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白及其多克隆抗体。利用PCR方法从PRV感染猪的肺脏、脑和扁桃体混合组织中扩增PRV gE基因,连接至克隆载体pMD18-T(pMD-gE)后进行测序与进化树分析。以pMD-gE为模板,利用PCR方法扩增其膜外结构... 本研究旨在获得重组伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白及其多克隆抗体。利用PCR方法从PRV感染猪的肺脏、脑和扁桃体混合组织中扩增PRV gE基因,连接至克隆载体pMD18-T(pMD-gE)后进行测序与进化树分析。以pMD-gE为模板,利用PCR方法扩增其膜外结构域部分基因(gE-outside),将其连接至原核表达载体pET-30a(+),转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,构建重组质粒pET-gE-outside。将重组质粒pET-gE-outside转化大肠杆菌Rosetta TM(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting进行表达产物的分析与鉴定。经亲和层析技术纯化重组PRV gE蛋白并免疫小鼠,通过间接ELISA和Western blotting分别进行三免3周血清中鼠抗PRV gE多克隆抗体效价的测定和鉴定。PCR和测序结果表明,本研究成功克隆了PRV gE基因,与国内2011年以后流行毒株属于相同分支。SDS-PAGE和Western blotting结果证实,PRV gE-outside基因在原核表达系统获得正确表达,分子质量约为55 ku,且可与猪抗PRV多克隆抗体发生免疫反应。经亲和层析纯化的gE-outside蛋白浓度为1.23 mg/mL。将其免疫小鼠,三免3周的小鼠血清中鼠抗PRV gE-outside多克隆抗体效价为1∶204800,并可与gE-outside蛋白发生免疫反应。综上,本研究制备了重组PRV gE蛋白和鼠抗PRV gE蛋白多克隆抗体,可为PRV感染机制研究及建立快速、高效免疫学检测技术提供技术指导和材料。 展开更多
关键词 狂犬病病毒(PRV) ge蛋白 原核表达 多克隆抗体
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伪狂犬病病毒BJ/YT株毒力相关基因gE和TK序列分析 被引量:15
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作者 钟承 刘蕾 +5 位作者 张乐天 王巨实 王安琦 陆宝生 杨万莲 吕艳丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期73-79,共7页
本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒(PRV)BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%~100.0%和98.3%~100.0%;TK基... 本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒(PRV)BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%~100.0%和98.3%~100.0%;TK基因核苷酸和氨基酸同源性分别为99.2%~99.9%和99.0%~100.0%。BJ/YT株与同期河北猪源分离株进化关系较近,各毒株之间同源性高,并且存在一致的核苷酸突变位点;与其他参考序列比对分析结果显示,BJ/YT株主要毒力基因存在变异位点,但这些位点均不在已知的主要功能区和抗原表位区内。因此,从分子流行病学角度来看,BJ/YT毒株是近年北京及其周边地区PRV流行毒株,但gE和TK基因的变异对流行毒株的毒力无明显影响。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 BJ/YT株 ge基因 TK基因 序列分析
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黑龙江省某规模化猪场伪狂犬病病毒gE和gB抗体的检测与分析 被引量:3
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作者 李世念 刘婉宁 +1 位作者 丁重阳 王金涛 《黑龙江八一农垦大学学报》 2022年第1期32-37,共6页
为调查黑龙江省某规模化猪场猪伪狂犬病野毒感染与疫苗免疫情况,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)对今年4月份和7月份随机采集于该场的395份血清样本进行猪伪狂犬病病毒gE和gB抗体检测。结果表明:该规模化猪场两次猪伪狂犬病病毒gE抗体检测... 为调查黑龙江省某规模化猪场猪伪狂犬病野毒感染与疫苗免疫情况,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)对今年4月份和7月份随机采集于该场的395份血清样本进行猪伪狂犬病病毒gE和gB抗体检测。结果表明:该规模化猪场两次猪伪狂犬病病毒gE抗体检测阳性率均为0,说明猪场现阶段不存在猪伪狂犬病野毒感染;两次检测基础猪群伪狂犬病病毒gB抗体阳性率均较为理想;3周龄仔猪gB抗体阳性率均为100%,说明此阶段猪只母源抗体水平较高,猪只保护效果较好;4月份检测中8周龄保育猪只猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性率仅为25%,此时猪只几乎无保护;同时两次检测中不同阶段育肥猪gB抗体阳性率逐渐升高,在4月份检测20周龄育肥猪时为90%,7月份检测22周龄育肥猪时为93%,说明经过两次疫苗免疫后抗体水平逐渐上升,并对机体提供保护。 展开更多
关键词 狂犬病 ge抗体 gB抗体 酶联免疫吸附试验 黑龙江省
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生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析 被引量:9
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作者 杨涛涛 刘崇灵 +2 位作者 刘晓波 赵墩 余兴龙 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期303-306,共4页
为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物... 为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。 展开更多
关键词 狂犬病 gB抗体 中和抗体 酶联免疫吸附测定
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