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猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法的建立
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作者 刘梅芬 马震原 +9 位作者 王淑娟 闫若潜 班付国 赵雪丽 谢彩华 王东方 柴茂 刘影 杨海波 王翠 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期141-147,共7页
为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的... 为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。PRV gB抗体竞争酶联免疫检测方法经优化后的最佳条件为:gB蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/mL、包被量100μL/孔,酶标抗体的最佳稀释浓度为1∶1000,样品检测时间为30 min(抗原抗体反应)+15 min(底物显色);敏感性结果显示,PRV gB标准阳性血清(Z89)经1∶512稀释后经检测仍为阳性;特异性结果显示,猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、大肠杆菌抗体阳性血清的检测结果均为阴性;批内、批间重复试验结果显示,批内、批间变异系数分别为0.24%~9.45%、0.58%~11.61%,均小于12%。通过对采集的184份临床血清检测结果进行比较,该方法与商品化试剂盒的阳性符合率为96.23%,阴性符合率为96.95%,总符合率96.74%。本研究在国内首次建立PRV gB竞争酶联免疫检测方法,为PRV gB抗体快速检测提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 竞争酶联免疫
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表达猪圆环病毒2d型Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒的构建
2
作者 焦显芹 马晓 +3 位作者 田润博 刘颖 马世杰 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2278-2286,共9页
【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以P... 【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以PCV2d KF1株DNA为模板扩增ORF 2基因。经限制性内切酶Bam HⅠ酶切后将ORF 2基因引入到含有绿色荧光蛋白(EGFP)基因的PRV转移载体pG中,获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将质粒pG-PCV2d-EGFP和PRV三基因缺失毒株gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)PRV NY DNA共转染至ST单层细胞中拯救重组病毒,并利用CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除重组病毒中EGFP基因。经EGFP基因测序、PCR和Western blotting对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经8轮绿色荧光蚀斑筛选,纯化得到重组病毒rPRV-PCV2d-EGFP。CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除EGFP基因后,经3轮筛选没有绿色荧光的蚀斑,获得重组病毒rPRV-PCV2d。EGFP基因测序结果表明,rPRV-PCV2d中EGFP基因被剪截了1251 bp,PCR和Western blotting结果显示,rPRV-PCV2d携带的ORF 2基因能在ST细胞中转录与表达。【结论】本研究成功构建表达PCV2d Cap蛋白的重组病毒rPRV-PCV2d,为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病病毒 重组病毒活载体疫苗
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猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究
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作者 王林青 张刘辉 +3 位作者 陈曦艋 马世杰 宋月 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1815-1824,共10页
【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表... 【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表位区的重组PRV毒株,并探究其生物学特性,为开发同时预防CSFV和PRV的二联疫苗提供参考。【方法】首先使用基因工程技术将包含CSFV E2蛋白B/C/D/A 4个表位区的一段基因插入pG-EGFP重组质粒的BamHⅠ位点,构建重组质粒pG-E2AD-EGFP;然后将质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV NY-gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)的ST细胞,在ST细胞内发生同源重组,利用蚀斑纯化法拯救出带绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。使用CRISPR/Cas9敲除载体敲除EGFP基因,经蚀斑纯化得到无荧光的重组病毒rPRV-E2AD。利用PCR扩增和Western blotting检测重组病毒rPRV-E2AD的E2基因A-D表位区表达情况。通过半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测不同理化性质处理后病毒增殖情况,对重组病毒培养特性、理化特性进行评价。【结果】通过细胞内同源重组和病毒蚀斑纯化,得到了同时表达CSFV E2AD抗原和EGFP的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。通过CRISPR/Cas9技术敲除EGFP基因,得到了无EGFP基因表达的重组病毒rPRV-E2AD。Western blotting检测结果显示,该毒株表达蛋白大小约27 ku,与预期CSFV E2AD抗原大小一致。rPRV-E2AD毒株与亲本株在ST、IPEC-J2、PK-15、Vero细胞中生长特性基本一致,均在感染后12 h引起细胞融合,36 h出现细胞脱落。理化特性检测结果显示,重组毒株与亲本株在相同理化条件处理下,培养特性相似。【结论】本研究成功获得重组病毒rPRV-E2AD,且外源基因不影响亲本株的增殖特性,试验结果为研发重组CSFV E2基因活载体疫苗提供了候选毒株,也为PRV活载体疫苗的开发提供了研究基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 伪狂犬病病毒(PRV) 重组病毒 E2基因
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太子参多糖经Let-7d-3p下调伪狂犬病病毒感染小鼠的炎症基因转录水平
4
作者 罗诗师 陈蓓蕾 +9 位作者 张蕾 冯启贤 吴瑞森 陈佳祺 王媛 简子昕 许丽惠 陈秋勇 马玉芳 王全溪 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2438-2450,共13页
本研究旨在探究太子参多糖(Radix pseudostellariae polysaccharide,RPP)调控微小核糖核酸(microRNA,miRNA)Let-7d-3p对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染引起炎症基因表达的影响及其机理。体外培养猪肾细胞(porcine kidney 15,... 本研究旨在探究太子参多糖(Radix pseudostellariae polysaccharide,RPP)调控微小核糖核酸(microRNA,miRNA)Let-7d-3p对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染引起炎症基因表达的影响及其机理。体外培养猪肾细胞(porcine kidney 15,PK-15),使用不同浓度RPP(0.5~32.0 mg·mL^(-1))处理PK-15细胞,通过细胞增殖与活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞存活率。接着将PK-15细胞分为空白组、PRV组、0.5 mg·mL^(-1)RPP组、1.0 mg·mL^(-1)RPP组、2.0 mg·mL^(-1)RPP组,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-17的mRNA转录水平。转染Let-7d-3p抑制物至PK-15细胞,经0或0.5 mg·mL^(-1)RPP干预后,采用qPCR检测Let-7d-3p和炎症因子mRNA转录水平。选择15只健康小鼠随机分为空白组、PRV组、RPP(10 mg·kg^(-1))组(每组5只),qPCR检测小鼠肾组织中Let-7d-3p和炎症因子mRNA转录水平。结果显示,在0~4.0 mg·mL^(-1)浓度RPP无细胞毒性。与空白组相比,PRV感染PK-15细胞会显著上调炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平(P<0.01),显著下调Let-7d-3p转录水平(P<0.01)。与PRV组相比,三个浓度的RPP作用细胞后均显著上调Let-7d-3p的转录水平(P<0.01),同时显著下调3个炎症因子的mRNA转录水平(P<0.01)。抑制Let-7d-3p后,与PRV组相比Let-7d-3p抑制组的IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平呈现显著上调(P<0.01)。而与PRV+RPP组相比,抑制Let-7d-3p后加入RPP干预,细胞炎症因子的mRNA转录水平显著上调(P<0.01)。体内试验结果表明,与空白组相比,PRV感染组小鼠肾中Let-7d-3p的转录水平显著下降(P<0.01),且炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平显著上调(P<0.01)。与PRV组相比,RPP处理小鼠后肾脏中Let-7d-3p转录水平显著上升(P<0.01),炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的转录水平显著下降(P<0.01)。体内体外结果表明,RPP可通过Let-7d-3p下调PRV感染引起的炎症基因转录水平,在mRNA水平上发现RPP具有一定的抗炎效用,为后续研究太子参多糖缓解PRV引起的炎症提供思路。 展开更多
关键词 太子参多糖 伪狂犬病病毒 Let-7d-3p 炎症
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伪狂犬病病毒CD8^(+)T细胞表位的鉴定
5
作者 黄香梅 王旭英 +9 位作者 耿鑫梅 奚媖牡 廖奕洁 张广欣 莫筱可 陈樱 欧阳康 韦祖樟 黄伟坚 覃一峰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期52-58,共7页
伪狂犬病病毒(PRV)是危害养猪业的重要病原,但目前对其感染后诱导的细胞免疫尤其是T细胞抗原表位的鉴定方面研究较少。该研究以C57BL/6小鼠作为PRV感染的动物模型,利用生物信息学软件预测并合成了16条PRV gB、gC和gD蛋白上的H-2b限制性C... 伪狂犬病病毒(PRV)是危害养猪业的重要病原,但目前对其感染后诱导的细胞免疫尤其是T细胞抗原表位的鉴定方面研究较少。该研究以C57BL/6小鼠作为PRV感染的动物模型,利用生物信息学软件预测并合成了16条PRV gB、gC和gD蛋白上的H-2b限制性CD8^(+)T细胞表位,经ELISpot、胞内细胞因子染色和CFSE细胞增殖试验检测发现,位于gD蛋白上的多肽^(371)CVYIFFRL^(378)可显著激活CD8^(+)T细胞产生IFN-γ,并促进CD8^(+)T细胞明显增殖,说明该表位属于PRV特异性CD8^(+)T细胞表位。将该表位氨基酸序列与NCBI上16株参考毒株及作者实验室2株PRV毒株的gD蛋白氨基酸序列进行序列比对,发现研究鉴定的T细胞表位高度保守,提示该表位可刺激机体产生对不同亚型PRV感染的交叉保护力。研究结果将为PRV表位疫苗的研制及PRV感染与免疫机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 CD8^(+)T细胞表位 表位疫苗
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猪伪狂犬病病毒gE基因遗传变异及密码子使用偏好性分析
6
作者 陈志安 章蓓雯 +9 位作者 何敏嘉 陈美椿 翁成桢 黄欣欣 李鸿喜 曾仲文 陈宝良 邱龙新 陈洪博 李晓冰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3264-3275,共12页
【目的】了解国内猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的流行现状、流行毒株的遗传情况以及PRV gE基因的密码子使用偏好性和影响因素。【方法】本研究针对2019—2023年中国分离到的106条PRV gE基因序列,利用Mega 7.0软件构... 【目的】了解国内猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的流行现状、流行毒株的遗传情况以及PRV gE基因的密码子使用偏好性和影响因素。【方法】本研究针对2019—2023年中国分离到的106条PRV gE基因序列,利用Mega 7.0软件构建系统发育树,通过Launch DnaSP 6.0软件进行基因选择压力和基因流分析,采用CodonW 1.4.2和SPSS 27.0.1软件进行密码子分析。【结果】遗传进化分析结果表明,国内流行的PRV毒株为基因Ⅱ型,可进一步分为基因型2.1和基因型2.2。基因流分析显示,基因Ⅱ型中基因型2.1和2.2核苷酸多样性(Pi)分别为0.006和0.002;种群间遗传分化系数(Fst)为0.381,同义替换率(Ks)和基因流量化指标(Z)分别为1.353和6.637。基因选择压力分析显示,基因Ⅱ型中基因型2.1和2.2的非同义突变与同义突变比值(dN/dS)分别为1.808和1.362。密码子碱基分析结果表明,基因Ⅱ型的2个亚型中,GC3含量均>50%,基因型2.1和2.2的不同基因编码区有效密码子数(ENC)值分别为30.04和30.06。密码子使用偏好性分析显示,基因型2.1和2.2的相关系数分别为0.115和0.173。相对同义密码子使用度(RSCU)分析显示,基因型2.1和2.2中高表达的密码子第3位均为G/C碱基,低表达的密码子第3位主要为A/U碱基;共25个密码子的RSCU>1,为优先使用密码子,其中13个具有高GC含量,16个以碱基C结尾。【结论】国内PRV流行株以基因Ⅱ型为主,其具有独特的碱基组成,GC含量较高、AU含量相对较低,表现出较低的偏好性,密码子使用受突变压力与自然选择的双重作用,其中自然选择起主导性作用。研究结果为国内猪伪狂犬病的流行趋势研判及防控策略制定提供了科学依据与技术支撑。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒(PRV) GE基因 遗传多样性 密码子 偏好性
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猪伪狂犬病病毒分离鉴定及gE和gC基因遗传进化分析
7
作者 武月 石兴亚 +4 位作者 张帅 赵云环 郭立明 左玉柱 范京惠 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2266-2277,共12页
【目的】探究伪狂犬病病毒(PRV)野毒株的变异情况及流行趋势,为PRV新型疫苗的研究提供数据参考。【方法】采集河北省保定市规模化养殖场经Bartha-K61疫苗免疫猪中疑似感染PRV的病料组织,通过PCR方式进行病原检测,将仅PRV阳性的组织滤液... 【目的】探究伪狂犬病病毒(PRV)野毒株的变异情况及流行趋势,为PRV新型疫苗的研究提供数据参考。【方法】采集河北省保定市规模化养殖场经Bartha-K61疫苗免疫猪中疑似感染PRV的病料组织,通过PCR方式进行病原检测,将仅PRV阳性的组织滤液接种PK-15细胞进行病毒分离与纯化,通过间接免疫荧光试验和电镜观察对分离到的病毒进行鉴定,测定分离毒株的病毒滴度并绘制生长曲线,对分离毒株进行血清中和试验、动物致病性研究及gE、gC基因序列分析。【结果】分离株在PK-15细胞中产生典型的拉丝、圆缩、聚集和脱落等病变。纯化后的病毒传代培养至F10代,经PCR隔代检测均能扩增出大小约为742 bp的目的条带,将分离株命名为BD-HB-2024。间接免疫荧光试验鉴定可见绿色荧光标记的细胞;透射电镜下观察到病毒颗粒直径约为150 nm,呈圆球状,符合PRV典型粒子特征。依照Reed-Muench法测定该毒株的半数组织培养感染剂量(TCID_(50))为105.55/0.1 mL。血清中和试验发现,抗Bartha-K61株的血清对该分离株的中和抗体效价为1∶11.22,而抗变异株血清的中和抗体效价为1∶89.13。该毒株对小鼠有一定的致病性,F10代病毒对小鼠的半数致死量(LD_(50))为10-2.5 TCID_(50)/0.1 mL。通过与国内PRV变异毒株gE、gC基因序列比对发现,核苷酸序列相似性分别为99.8%~99.9%和99.8%~100%。遗传进化树分析表明,该分离毒株与经典毒株SC、Italy2014和Kaplan等相似性较低,亲缘关系较远;与国内近几年分离到的变异株HNB、HLJ8、JM和SX1911等相似性较高,亲缘关系较近且位于同一进化分支,比对氨基酸序列后发现符合国内变异株的典型变化。【结论】本试验证实了该养殖场存在PRV的感染,并成功分离到1株PRV变异毒株,该研究为后续新型疫苗的研发和免疫防控方案的制备提供了参考依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(PRV) 变异株 分离鉴定 遗传进化
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螺旋藻多糖对伪狂犬病病毒感染小鼠肝脏和肺脏氧化应激的调节作用
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作者 赵雯 王玲力 +1 位作者 曹迷霞 胡庭俊 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期28-32,共5页
为探究螺旋藻多糖(PSP)对伪狂犬病病毒(PRV)感染小鼠肝脏和肺脏氧化应激的调节作用,将120只Balb/c小鼠随机分为5组,分别为螺旋藻多糖高剂量组、中剂量组、低剂量组、PRV组和空白对照组。测定小鼠肝脏和肺脏SOD、iNOS酶活性和MDA、NO含量... 为探究螺旋藻多糖(PSP)对伪狂犬病病毒(PRV)感染小鼠肝脏和肺脏氧化应激的调节作用,将120只Balb/c小鼠随机分为5组,分别为螺旋藻多糖高剂量组、中剂量组、低剂量组、PRV组和空白对照组。测定小鼠肝脏和肺脏SOD、iNOS酶活性和MDA、NO含量;HE染色观察小鼠肝脏和肺脏病理变化;免疫组化检测小鼠肝脏和肺脏中iNOS表达情况。结果显示,与PRV组相比,高剂量和中剂量能显著降低小鼠肝脏和肺脏组织iNOS酶活性及MDA、NO水平(P<0.05),显著升高SOD酶活性(P<0.05);HE染色结果显示,高、中、低剂量小鼠肝脏和肺脏病理变化有不同程度减轻;免疫组化结果显示,高、中、低剂量处理PRV感染小鼠后,肝脏和肺脏中iNOS表达有不同程度降低,高剂量组效果最佳。表明螺旋藻多糖能够减轻PRV感染小鼠肝脏和肺脏的损伤,缓解PRV感染小鼠引起的氧化应激。 展开更多
关键词 螺旋藻多糖 伪狂犬病病毒 氧化应激 肝脏 肺脏
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猪伪狂犬病病毒gE基因荧光定量PCR检测方法的建立与应用
9
作者 黄喜荣 曹佳佳 +5 位作者 邱飞铭 阮静学 江子墨 蒋桢 席梓恒 戴爱玲 《福建畜牧兽医》 2025年第1期18-23,共6页
为了能快速鉴别猪伪狂犬病病毒流行株,根据猪伪狂犬病病毒gE基因前半段95 bp~210 bp区域处设计一对特异性引物及探针,优化反应条件后,建立一种可鉴别猪伪狂犬病病毒gE缺失疫苗株与流行株的Taqman荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法对... 为了能快速鉴别猪伪狂犬病病毒流行株,根据猪伪狂犬病病毒gE基因前半段95 bp~210 bp区域处设计一对特异性引物及探针,优化反应条件后,建立一种可鉴别猪伪狂犬病病毒gE缺失疫苗株与流行株的Taqman荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法对pMD-PRV gE阳性标准质粒的最低检出下限为4.4×10^(1)拷贝/μL;该方法特异性强,对猪常见病毒性疾病(猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型等)均无交叉反应,将PRV流行株和疫苗株(Bartha-K61株、HB2000株、C株、Ea株)同时与某商品化试剂盒对比检测,特异性优于某商品化荧光定量PCR检测试剂盒;组内和组间重复性试验的变异系数均小于1.6%,重复性好。应用本研究建立的荧光定量PCR检测方法对165份临床样品进行检测,阳性率为2.42%(4/165),选取已知3份阳性的30份临床样品,与商品化检测试剂盒比对,符合率100%。因此,本研究建立的PRV gE基因荧光定量PCR检测方法可用于猪伪狂犬病病毒流行株的快速诊断和流行病学调查,为PR的控制与净化提供技术支持。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 荧光定量PCR 鉴别诊断
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1例疑似猪伪狂犬病病毒疫苗引起免疫耐受的病例分析
10
作者 徐国 魏明寅 +5 位作者 蒋泽修 杨薇 何连华 姜德荣 何江 陈娟 《养殖与饲料》 2025年第6期71-74,共4页
[目的]贵州省某生猪养殖场猪群经过多次伪狂犬病病毒疫苗免疫,但抗体阳性率为0,为确定导致该猪场猪群伪狂犬病病毒抗体水平急剧下降的关键因素。[方法]2023年,采集该养殖场猪群血液样本10份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链反应(... [目的]贵州省某生猪养殖场猪群经过多次伪狂犬病病毒疫苗免疫,但抗体阳性率为0,为确定导致该猪场猪群伪狂犬病病毒抗体水平急剧下降的关键因素。[方法]2023年,采集该养殖场猪群血液样本10份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)扩增技术进行检测,并进行流行病学调查等。[结果]ELISA和病原学检测结果显示,PRV-gB和PRV-gE抗体为阴性,PRV-gD基因PCR检测为阳性,gE全基因检测呈阴性;现场调研发现疫苗质量标准、免疫剂量合理,饲养环境清洁,猪场兽药和饲养管理规范,猪群未表现出任何猪伪狂犬病的临床症状,但对伪狂犬病病毒疫苗进行高频率、高密度免疫;猪只外周血淋巴细胞的增殖活性较低,细胞因子如干扰素-γ、白细胞介素-2等的分泌量也显著减少,且该猪群其他疫苗免疫抗体水平正常。[结论]综合分析T细胞反应弱、调节性T细胞增多,但其他疫苗抗体水平正常等指标发现猪群PRV-gB和PRV-gE抗体水平低可能与猪场高密度免疫,引发猪群的伪狂犬病病毒免疫耐受有关。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 伪狂犬病病毒 ELISA 免疫耐受 流行病学调查 PCR扩增检测
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我国猪伪狂犬病病毒流行病学研究进展
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作者 段雨晴 谭磊 《青海畜牧兽医杂志》 2025年第2期61-63,共3页
本文对PRV的易感动物、基因型和流行病学特征等进行综述,旨在为PRV的防控提供科学依据。
关键词 猪伪狂犬病病毒 病原学 易感动物 流行病学 研究进展
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湖羊感染羊源性伪狂犬病病毒致病特征的研究 被引量：1
12
作者 齐新永 王晓旭 +7 位作者 鞠厚斌 赵洪进 刘健 陆雪林 孙泉云 徐锋 沈莉萍 王建 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期58-64,共7页
为探讨羊源性伪狂犬病病毒分离株SH1407对湖羊的致病性。将7只健康湖羊随机分成试验组和对照组,其中试验组5只,对照组2只。用分离株SH1407对试验组湖羊进行人工攻毒,取发病死亡羊内脏组织用于组织病理学检查和免疫组化分析。湖羊在攻毒... 为探讨羊源性伪狂犬病病毒分离株SH1407对湖羊的致病性。将7只健康湖羊随机分成试验组和对照组,其中试验组5只,对照组2只。用分离株SH1407对试验组湖羊进行人工攻毒,取发病死亡羊内脏组织用于组织病理学检查和免疫组化分析。湖羊在攻毒后3 d开始出现症状,第4 d症状进一步加剧,表现为局部奇痒、体温升高、精神沉郁、食欲废绝等症状,4只发病死亡,存活1只,死亡率达到80%。剖检主要表现为脑膜充血,肺淤血,轻度实变。病理组织学检查:大脑、延髓神经元变性,细胞核溶解、消失,呈病理性细胞凋亡;肺脏呈间质性肺炎病变;脾脏、肾脏出血。免疫组化染色显示,PRV在肝脏、肺脏、大脑、脾脏等组织器官广泛存在,病毒在肝脏中主要存在于库弗氏细胞中,在肺脏中主要存在于Ⅱ型肺泡细胞中,在脾脏中主要存在于巨噬细胞、单核细胞中,而在脑组织中,神经元呈现较强的信号,说明病毒主要存在于神经细胞中。实时荧光定量PCR测定内脏器官病毒载量,肝脏、脾脏、肺脏和脑组织中PRV大量增值,其中PRV在脑组织中大量增值导致中枢神经严重的病理改变。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 病理组织学 免疫组化 病毒载量
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AIFM1分子与猪伪狂犬病病毒UL16蛋白互作抑制病毒的增殖机制研究
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作者 徐晶晶 高飞 +7 位作者 武吉强 程雪飞 刘宇婷 傅欣玲 郑浩 童武 童光志 李国新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期9-17,共9页
凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白,能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢,是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒(PRV)pUL16相互作用,过表达以及RNA干扰试验结果表明,AI... 凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白,能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢,是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒(PRV)pUL16相互作用,过表达以及RNA干扰试验结果表明,AIFM1能抑制PRV的增殖,且pUL16能减弱这种抑制作用。激光共聚焦和流式试验表明,PRV感染细胞时,AIFM1从线粒体易位至细胞核,且AIFM1增强了PRV引起的细胞凋亡。本研究通过对PRV pUL16和宿主蛋白相互作用机制研究,部分地解析了这两种蛋白在PRV复制、包装以及与宿主互作中发挥的作用,为进一步阐明PRV感染机制奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 独特长区16蛋白 凋亡诱导因子1
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猪伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 王瑞宁 王勋 +4 位作者 李鸽 李青梅 李存法 杨苏珍 郭军庆 《河南农业科学》 北大核心 2024年第12期167-173,共7页
为了开发检测猪伪狂犬病病毒(PRV)的免疫诊断试剂,使用HEK293F细胞表达的gE重组蛋白免疫BALB/c小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选阳性杂交瘤细胞株,以... 为了开发检测猪伪狂犬病病毒(PRV)的免疫诊断试剂,使用HEK293F细胞表达的gE重组蛋白免疫BALB/c小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选阳性杂交瘤细胞株,以期获得对PRV反应性良好的抗gE重组蛋白单克隆抗体。结果显示,获得2株(2B5和8F7)稳定分泌抗PRV gE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水单克隆抗体的ELISA效价均为1∶1 000000;单克隆抗体亚型鉴定结果表明,2株单克隆抗体的重链均为IgG1亚型,轻链均为Kappa链。单克隆抗体特异性测定结果显示,2株单克隆抗体仅与PRV反应,不与其他常见病毒发生反应;SDS-PAGE结果显示,纯化后的单克隆抗体均在约50 ku和25 ku处有纯度较高的特异性条带;间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,制备的2株单克隆抗体与转染gE质粒的293T细胞发生特异性反应。根据Western blot结果,筛选获得的2株单克隆抗体均在120 ku附近出现特异条带,表明这2株单克隆抗体均能特异性识别PRV。综上,成功制备了2株特异性强、效价高的抗gE蛋白单克隆抗体,为后期PRV诊断试剂盒的制备提供重要的生物材料。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gE蛋白 单克隆抗体 间接免疫荧光试验
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抗伪狂犬病病毒药物筛选研究进展
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作者 曹洁 罗红彬 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期107-113,共7页
为揭示抗伪狂犬病病毒(PRV)药物筛选的研究趋势及发展方向,基于WOS、CNKI数据库及Citespace软件,从论文年度变化趋势、空间分布特点、关键词聚类、国际研究热点等方面对32年来PRV药物筛选领域的相关论文进行可视化分析。结果表明,1992-2... 为揭示抗伪狂犬病病毒(PRV)药物筛选的研究趋势及发展方向,基于WOS、CNKI数据库及Citespace软件,从论文年度变化趋势、空间分布特点、关键词聚类、国际研究热点等方面对32年来PRV药物筛选领域的相关论文进行可视化分析。结果表明,1992-2023年,抗PRV药物筛选研究论文数量呈现先稳定后快速增长的态势,中国学者在该领域发表论文数量排名第一,河南农业大学是国内该领域的核心研究机构。国内研究主要集中在化学药物、以中草药为代表的天然生物提取物以及干扰素3个方面。国际上经历了从基础探索到CRISPR-Cas9利用的开发研究工具阶段,再到变种PRV的分子机制的深入研究3个阶段的发展历程。 展开更多
关键词 WOS数据库 CNKI数据库 CITESPACE 伪狂犬病病毒 抗病毒
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猪伪狂犬病病毒感染及复制影响因素的研究 被引量：7
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作者 何松 汤德元 +7 位作者 曾智勇 王彬 黄涛 毛茵茗 周飘 陈旭 廖正波 袁盛林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期645-652,共8页
猪伪狂犬病(Porcinepseudorabies,PR)是由PR病毒(PRV)引起猪的病毒性传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失。猪作为PRV唯一的自然宿主,可引起母猪产死胎、木乃伊胎和屡配不孕;公猪睾丸萎缩、精液质量下降,丧失种用功能;新生仔猪高热... 猪伪狂犬病(Porcinepseudorabies,PR)是由PR病毒(PRV)引起猪的病毒性传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失。猪作为PRV唯一的自然宿主,可引起母猪产死胎、木乃伊胎和屡配不孕;公猪睾丸萎缩、精液质量下降,丧失种用功能;新生仔猪高热、出现神经症状且两周龄以内的仔猪病死率可达100%[1]。2011年之前,由于Bartha-K61株疫苗在我国的广泛使用,PR在我国得到了较好的控制。但自从2011年PRV出现变异之后,现有的PR商品化疫苗只能对动物机体提供部分的免疫保护作用并且尚无特效药物治疗[2]。基于此,本文对影响PRV感染与复制的各类因素的最新研究进展作综述,以期为开发高效抗PRV的新型药物或疫苗提供参考依据。 展开更多
关键词 病毒性传染病 重大经济损失 猪伪狂犬病病毒 屡配不孕 仔猪病死率 自然宿主 公猪睾丸 神经症状
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含维生素E乙酸酯佐剂的制备及其对猪伪狂犬病病毒活疫苗免疫效果的影响
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作者 李凤 欧祥龙 +3 位作者 谢长峰 曾焱 周洋 廖永洪 《湖北农业科学》 2024年第S1期181-184,共4页
为探讨以维生素E乙酸酯为主要成分的佐剂对猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)活疫苗免疫效果的影响,制备了2种浓度的维生素E乙酸酯佐剂,测定其粒径、zeta电位并评估了在4℃和37℃贮存条件下的稳定性,评价了制备的佐剂稀释... 为探讨以维生素E乙酸酯为主要成分的佐剂对猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)活疫苗免疫效果的影响,制备了2种浓度的维生素E乙酸酯佐剂,测定其粒径、zeta电位并评估了在4℃和37℃贮存条件下的稳定性,评价了制备的佐剂稀释PRV疫苗后对猪的免疫效果。结果表明,2种佐剂粒径在120 nm左右,zeta电位为-30 mV左右,在4℃保存1年和37℃保存1个月稳定性良好,未出现分层破乳、挂壁等现象,2种佐剂稀释PRV活疫苗免疫仔猪后均表现出比PBS组更好的免疫效果,免疫后1个月即抗体转阳,而PBS组抗体仍为阴性,且含量10%的佐剂对PRV疫苗免疫效果的增强作用更为显著。含维生素E乙酸酯佐剂稀释PRV疫苗能显著缩短免疫后抗体生成的时间,并在较长时间内维持较高的抗体水平,显示出其在活疫苗中的应用潜力。 展开更多
关键词 维生素E乙酸酯 佐剂 猪伪狂犬病病毒 活疫苗 免疫效果
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猪源Rab基因shRNA文库与稳定细胞株的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响
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作者 梁东阁 姚晨 +7 位作者 柴雅静 蔡梦攀 褚贝贝 鲁维飞 王江 曾磊 刘忠虎 明胜利 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1250-1258,共9页
【目的】探究Rab家族蛋白在猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)感染宿主细胞中的作用。【方法】以猪肾上皮细胞(PK15)为试验模型,构建Rab基因shRNA文库,并用嘌呤霉素筛选获得稳定的能够抑制猪源Rab基因表达的细胞株。用实... 【目的】探究Rab家族蛋白在猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)感染宿主细胞中的作用。【方法】以猪肾上皮细胞(PK15)为试验模型,构建Rab基因shRNA文库,并用嘌呤霉素筛选获得稳定的能够抑制猪源Rab基因表达的细胞株。用实时荧光定量PCR检测细胞敲减效率,通过流式细胞术检测敲减Rab基因对PRV增殖的影响;用Western blotting检测PRV-gB蛋白表达量,使用实时荧光定量PCR检测敲减Rab基因后PRV-gB、PRV-TK基因以及相关细胞炎性因子表达量。【结果】试验成功构建包含13种Rab基因敲减细胞系的shRNA文库。流式细胞术检测结果显示敲减Rab基因能显著抑制PRV-GFP增殖(P<0.05);病毒滴度与Western blotting检测结果表明,敲减Rab基因极显著抑制子代病毒的产生以及PRV-gB蛋白的表达(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示,敲减Rab基因会显著或极显著抑制PRV-gB、PRV-TK基因表达(P<0.05;P<0.01);敲减Rab14和Rab27基因后细胞中IFN-β、ISG15、IL-1β、IL-18基因表达量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。【结论】敲减Rab基因能够抑制PRV增殖。研究结果为进一步研究Rab基因在PRV生活周期中发挥的作用奠定基础。 展开更多
关键词 Rab基因 猪伪狂犬病病毒(PRV) 慢病毒 shRNA文库
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伪狂犬病病毒经典疫苗株Bartha-K61对家兔的致病性研究
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作者 包玮玲 郑浩 +11 位作者 李国新 周艳君 单同领 于海 姜一峰 高飞 虞凌雪 刘长龙 李丽薇 孔宁 童武 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期27-32,共6页
已有研究表明伪狂犬经典疫苗株Bartha-K61对小鼠具有较强的致死性,为了研究伪狂犬疫苗株Bartha-K61对兔的致病性,本研究以10^(3)TCID_(50)的剂量接种5只成年家兔,家兔于接种后第3 d出现死亡,并陆续在5 d内全部死亡。对病死兔进行解剖后... 已有研究表明伪狂犬经典疫苗株Bartha-K61对小鼠具有较强的致死性,为了研究伪狂犬疫苗株Bartha-K61对兔的致病性,本研究以10^(3)TCID_(50)的剂量接种5只成年家兔,家兔于接种后第3 d出现死亡,并陆续在5 d内全部死亡。对病死兔进行解剖后发现大脑血管扩张及出血,心脏出现坏死以及肺部气肿、出血、坏死等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片也显示心脏血管扩张,血管周围轻度水肿,脑部胶质细胞增生,细胞数量增多,其他各脏器也都有不同程度的病理变化。通过荧光定量PCR的方法对病死兔各组织的病毒载量进行了测定。结果表明,病死兔的各组织脏器均检测出高水平的病毒DNA,均显著高于对照组。为了进一步研究伪狂犬疫苗株Bartha-K61对家兔的致病性,本研究测定了Bartha-K61对家兔的半死致死量,结果表明:Bartha-K61对家兔的半数致死量为10^(0.3)TCID_(50),以1×TCID_(50)的剂量接种成年家兔后,仍可引起20%的家兔致死,由此可见Bartha-K61对家兔的致死性要显著强于小鼠。因此在使用Bartha-K61过程中应针对不同物种注意生物安全控制。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 Bartha-K61 兔 致病性
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TSG 101基因敲低对猪伪狂犬病病毒体外增殖的影响
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作者 王梦迪 王昱旻 +9 位作者 张震 鲁秀香 王恒 樊文杰 姚晨 刘鹏翔 马延杰 褚贝贝 王江 杨国宇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4110-4120,共11页
本研究旨在使用慢病毒包装敲低技术构建敲低肿瘤易感基因(tumor susceptibility gene 101,TSG 101)的慢病毒质粒及稳转PK15细胞系,并验证该敲低细胞系对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染的影响。针对TSG 101基因构建并筛选,成... 本研究旨在使用慢病毒包装敲低技术构建敲低肿瘤易感基因(tumor susceptibility gene 101,TSG 101)的慢病毒质粒及稳转PK15细胞系,并验证该敲低细胞系对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染的影响。针对TSG 101基因构建并筛选,成功获得重组慢病毒,用获得的重组慢病毒感染PK15细胞,并使用嘌呤霉素进行筛选,获得稳转敲低TSG 101基因的PK15细胞系。通过Real-time PCR以及Western blot方法对所构建的细胞系进行编辑效率检测;使用CCK-8法对筛选出的细胞系进行细胞活力及生长状况检测;通过流式细胞术、Real-time PCR、Western blot以及子代病毒滴度方法验证该细胞系对PRV复制的影响;最后对PRV的吸附、进入以及复制阶段的试验探究敲低TSG 101基因对于PRV感染有影响的阶段。结果表明,1)本研究所构建的细胞系中TSG101的表达明显降低,并将该细胞系命名为sh-TSG101细胞系;2)细胞活性检测结果显示,敲低TSG 101基因对细胞活性及生长情况无显著影响;3)使用PRV-GFP、PRV-QXX感染sh-TSG101,体外试验证明敲低TSG 101对PRV的增殖有显著的抑制作用。4)病毒的吸附、进入以及复制试验证明,敲低TSG 101在PRV的复制阶段有明显的抑制作用。综上,本研究成功构建TSG 101基因敲低的PK15细胞系,体外敲低TSG101能够显著抑制PRV增殖,为PRV等DNA病毒性疾病的防控提供了新思路,并为进一步探究TSG101调控PRV感染的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 肿瘤易感基因101 伪狂犬病病毒 PK15细胞
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