表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK^-突变株的构建 被引量：2

1

作者 范伟兴 宋建兰 +2 位作者 魏荣 陈溥言 赵宏坤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期476-482,共7页

提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRVKa plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L... 提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRVKa plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL25、全部UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸。将L片段和R片段克隆于pBluescriptM13-载体上,获得pSKLR;再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG。提取pSKLRG质粒,经单酶切线性化后用脂质体与PRVBartha-K61株共转染143TK-细胞,在细胞培养液中有5 溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRVBartha-K61毒株:PRVrBGFP。 展开更多

关键词 基因表达 绿色荧光蛋白 伪狂犬病毒 Bartha—K61株 TK^-突变株 基因构建 PCR扩增模板 DNA

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含绿色荧光蛋白基因和猪瘟E_2基因的伪狂犬病毒Bartha-K_(61)株TK基因缺失转移载体的构建 被引量：11

2

作者 范伟兴 张雪莲 +2 位作者 魏荣 赵宏坤 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期3-8,共6页

提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部... 提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部分TK基因 )的可用于同源重组的左臂片段 ( L )和右臂片段 ( R) ,L包括部分 UL 2 5、全部 UL 2 4、部分 TK,R包括部分 TK及部分U L2 2 ,L 和 R的拼接片段中 TK基因内部缺失 2 70个核苷酸。将 L 片段和 R片段克隆于 p Bluescript M13-载体上 ,获得p SKL R;再将绿色荧光蛋白载体 p EGFP- C1上含 GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入 p SKL R的 L 片段和 R片段之间构成转移载体 p SKL KG;又将猪瘟病毒 1.2 3 kb的 E2 ( CSFV- E2 )基因片段插入 p SKL RG的多克隆位点的 Bg1 与 Pst 之间获得转移载体 p SKL 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白基因 伪狂犬病 伪狂犬病毒bartha-k61株 TK基因 EGFP基因 猪瘟病毒E2基因 基因缺失 转移载体 疫苗

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猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株和变异株主要免疫原性基因分析 被引量：13

3

作者 杨涛 张丹英 +1 位作者 赵冉 陈琼 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第4期50-55,共6页

自2011年底以来,我国多个省份暴发了猪伪狂犬病,一些研究院所证实当前猪伪狂犬病毒流行株发生了一定程度的变异,疫苗不能提供完全的保护。为了在分子生物学水平上比较不同厂家猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株,以及与当前流行的猪伪狂犬病... 自2011年底以来,我国多个省份暴发了猪伪狂犬病,一些研究院所证实当前猪伪狂犬病毒流行株发生了一定程度的变异,疫苗不能提供完全的保护。为了在分子生物学水平上比较不同厂家猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株,以及与当前流行的猪伪狂犬病病毒变异株,在主要免疫原性蛋白之间的差异,选取了4个厂家的活疫苗Bartha-K61株,通过二代测序方法进行测序,对Bartha-K61株gB、gC和gD这3种主要免疫原性基因以及推导出的氨基酸序列与变异株之间进行同源性分析。结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株gB蛋白序列中有23处特征性的差异,同源性为96.3%~96.9%;gC蛋白序列中有25处特征性的差异,同源性为92.7%~93.1%;gD蛋白序列中有10处特征性的差异,同源性为96.8%~97.3%;以gB、gC和gD氨基酸序列建立的进化分析结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株分属两个不同进化分支。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病 bartha-k61株 免疫原性基因

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ST传代细胞源猪伪狂犬病毒活疫苗(Bartha-K61株)超剂量免疫的安全性实验 被引量：2

4

作者 林德锐 吴文福 +3 位作者 黄秋雪 李宁 赖月辉 侯高伟 《广东畜牧兽医科技》 2018年第2期48-51,共4页

ST传代细胞生产3批次伪狂犬病毒活疫苗(Bartha-K61株)中试产品,检验合格后对20~25日龄、50~55日龄健康猪以及妊娠后期的母猪,分别采用耳后颈部肌肉注射方式进行超剂量免疫接种,同时设立相应对照组。超剂量免疫后各组猪只精神、食欲、体... ST传代细胞生产3批次伪狂犬病毒活疫苗(Bartha-K61株)中试产品,检验合格后对20~25日龄、50~55日龄健康猪以及妊娠后期的母猪,分别采用耳后颈部肌肉注射方式进行超剂量免疫接种,同时设立相应对照组。超剂量免疫后各组猪只精神、食欲、体温、生产状况等经持续观察记录,均表现为正常。结果表明,ST传代细胞生产猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)对不同日龄猪和妊娠后期母猪进行超剂量免疫接种均是安全的。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病活疫苗(bartha-k61株 传代细胞源) 超剂量免疫

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伪狂犬病C株与Bartha-K61株活疫苗在gE抗体阴性场的免疫效果比较 被引量：3

5

作者 卫秀余 欧伟业 +3 位作者 彭俊平 胡永明 李江 娄昆鹏 《养猪》 2022年第1期106-107,共2页

某伪狂犬病野毒阴性场,分别选用伪狂犬病疫苗C株和Bartha-K61株做仔猪免疫平行对比试验,采用IDEXX伪狂犬病ELISA试剂盒检测抗体滴度和阳性率,评估母源抗体干扰度和维持时间。检测结果表明,某厂家C株伪狂犬病疫苗效果优于某厂家Bartha-K6... 某伪狂犬病野毒阴性场,分别选用伪狂犬病疫苗C株和Bartha-K61株做仔猪免疫平行对比试验,采用IDEXX伪狂犬病ELISA试剂盒检测抗体滴度和阳性率,评估母源抗体干扰度和维持时间。检测结果表明,某厂家C株伪狂犬病疫苗效果优于某厂家Bartha-K61毒株。研究为规模猪场伪狂犬病疫苗毒株的选择提供参考依据。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病 C株 bartha-k61株 免疫效果

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带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究 被引量：16

6

作者 彭金美 王瑜 +4 位作者 田志军 周艳君 陈瑾 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期10-15,共6页

本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载... 本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒Bartha K61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,其绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 Bartha K61株 BAC 重组病毒

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猪伪狂犬病活疫苗Bartha-K61株对流行毒株的免疫效力研究 被引量：4

7

作者 吴文福 黄秋雪 +5 位作者 侯高伟 林益坤 赖月辉 牛贝贝 吉艺宽 李宁 《广东畜牧兽医科技》 2019年第3期40-43,51,52,共6页

本研究通过对不同的免疫剂量免疫仔猪和母猪免疫后所产仔猪进行攻毒,以评估该疫苗对伪狂犬病毒(PRV)流行强毒株的保护效果。取3~4周龄PRV抗体阴性仔猪,以106.0组织半数感染量(TCID50)、106.5TCID50、107.0TCID50剂量接种猪PRV活疫苗(Bar... 本研究通过对不同的免疫剂量免疫仔猪和母猪免疫后所产仔猪进行攻毒,以评估该疫苗对伪狂犬病毒(PRV)流行强毒株的保护效果。取3~4周龄PRV抗体阴性仔猪,以106.0组织半数感染量(TCID50)、106.5TCID50、107.0TCID50剂量接种猪PRV活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源),免后10d连同条件的对照组和母源抗体阳性组用PRV流行强毒(GD株)攻毒,检测免疫后的抗体水平,记录攻毒后的体温、临床症状和病理变化。结果显示:免疫组试验猪在免后7dPRVgB抗体均转阳;各种剂量免疫组和母源抗体阳性组试验猪在PRV流行强毒攻击后,均未出现临床症状和病理变化,而对照组则出现明显的神经症状,体温升高,发病率100%(5/5),死亡率80%(4/5),剖检可见肝脏有白色坏死点和脑充血水肿。研究表明高病毒滴度的猪伪狂犬病活疫苗(BarthaK61株,传代细胞源)免疫猪后可对PRV流行强毒株提供良好的免疫保护。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病活疫苗 bartha-k61株(传代细胞源) 伪狂犬病流行毒株 免疫保护

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利用高效价Bartha-K61株疫苗防控净化猪伪狂犬病的研究与实践 被引量：3

8

作者 陈耀 杨傲冰 +2 位作者 白挨泉 林德锐 马春全 《中国猪业》 2020年第3期54-56,60,共4页

自2011年以来,我国猪场陆续发现PRV变异毒株感染导致的疫情,对我国养猪业造成了巨大的威胁,引起了行业的高度关注。目前,疫苗仍然是防控PRV的最主要手段,本文总结了2个规模种猪场通过高效价Bartha-K61株疫苗免疫防控、净化PRV的相关案例... 自2011年以来,我国猪场陆续发现PRV变异毒株感染导致的疫情,对我国养猪业造成了巨大的威胁,引起了行业的高度关注。目前,疫苗仍然是防控PRV的最主要手段,本文总结了2个规模种猪场通过高效价Bartha-K61株疫苗免疫防控、净化PRV的相关案例,为猪场防控PRV提供参考。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病 bartha-k61株 疫苗 净化

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伪狂犬病病毒(PRV)不同毒株抗原相关性研究 被引量：1

9

作者 程晓霞 车勇良 +6 位作者 王劭 肖世峰 朱小丽 陈仕龙 林锋强 陈少莺 周伦江 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第4期337-340,共4页

为了解PRV不同毒株之间的抗原性差异,评价弱毒FB株预防新型PRV的潜力,以4株PRV(FA、FB、Bartha-K61和FJ2012)毒株及其高免血清为材料,应用交叉中和试验测定PRV不同毒株的抗原性差异,通过FB免疫猪攻毒试验评价弱毒FB株对新型PRV的保护潜... 为了解PRV不同毒株之间的抗原性差异,评价弱毒FB株预防新型PRV的潜力,以4株PRV(FA、FB、Bartha-K61和FJ2012)毒株及其高免血清为材料,应用交叉中和试验测定PRV不同毒株的抗原性差异,通过FB免疫猪攻毒试验评价弱毒FB株对新型PRV的保护潜力。结果表明:中和抗体测定表明兔抗FB株、FA株、Bartha-K61株和FJ2012株高免血清的中和效价分别为1∶54、1∶91、1∶91和1∶215。交叉中和试验显示FB株与FA株、FB株与FJ2012株、FA株与FJ2012株的抗原相关性(R值)均大于0.8,Bartha-K61株与FA株、FB株、FJ2012株的R值均小于0.4,表明FB株与FJ2012株的抗原相关性高于Bartha-K61株与FJ2012株。仔猪免疫攻毒试验显示FB免疫猪能抵抗新型PRV(FJ2012株)的攻毒,保护率100%。提示PRV弱毒FB株有望成为预防新型猪伪狂犬病毒(FJ2012株)的疫苗候选株。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒(PRV) FA株 FB株 bartha-k61株 FJ2012株 抗原相关性 免疫保护

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猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)的免疫程序研究 被引量：1

10

作者 林德锐 吴文福 +4 位作者 黄秋雪 牛晓芸 李宁 邹伟斌 侯高伟 《广东畜牧兽医科技》 2018年第3期38-41,共4页

研制了三批猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源),采用对3~4周龄仔猪首免、一个月后加强免疫1次,妊娠母猪于分娩前3~4周进行一次免疫的免疫程序进行疫苗接种,并在免疫前和免疫后定期采血检测PRV抗体。结果表明:免疫前PRV母源抗体... 研制了三批猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源),采用对3~4周龄仔猪首免、一个月后加强免疫1次,妊娠母猪于分娩前3~4周进行一次免疫的免疫程序进行疫苗接种,并在免疫前和免疫后定期采血检测PRV抗体。结果表明:免疫前PRV母源抗体为阴性的仔猪在首免后7日PRV抗体检测为阳性,21日达到高峰,并在首免后130日PRV抗体仍维持在一个较高水平;免疫前PRV母源抗体检测为阳性的仔猪,在首免后3日和7日时PRV抗体略有下降,但随后上升并在首免后21日达到高峰,直至首免后130日仍为PRV抗体阳性;免疫前PRV抗体为阴性的妊娠母猪,在免疫后3日和7日PRV抗体有一定上升,免疫后14日达到较为理想水平,并于分娩前达到高峰,产仔数也较为理想;免疫前PRV抗体为阳性的妊娠母猪,在免疫后3日和7日PRV抗体水平稍有下降,但随后上升,并在分娩前达到高峰,产仔数也较为理想。综上结果表明,此免疫程序较为适合仔猪和妊娠母猪的免疫。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病活疫苗(bartha-k61株 传代细胞源) 免疫程序

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伪狂犬Bartha-K61株弱毒疫苗临床应用效果研究

11

作者 石淼 王云 周先建 《中国畜牧业》 2019年第16期94-95,共2页

猪伪狂犬病毒属于双链DNA病毒,相对稳定,只有一个血清型,目前为止还未发现抗原性不同的伪狂犬病毒毒株。2011年以来猪伪狂犬病有所抬头,多个地区猪场、实验室检测分离出变异的PRV毒株,它们对易感猪的致病力增强,免疫猪的保护力也相应减弱。

关键词 猪伪狂犬病毒 临床应用效果 弱毒疫苗 K61株 病毒毒株 DNA病毒 实验室检测 相对稳定

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免疫增强剂对猪伪狂犬灭活疫苗的免疫增强作用 被引量：5

12

作者 耿文学 唐波 +3 位作者 华涛 侯继波 张道华 许家荣 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期1828-1833,共6页

为了评价免疫增强剂VA5对猪伪狂犬病毒灭活疫苗的免疫增强作用,将VA5与灭活疫苗混合并制成疫苗。通过常规Bartha-K61株灭活疫苗、含免疫增强剂灭活疫苗和Bartha-K61活疫苗3组免疫效力对比试验,首次免疫后14和35 d对猪进行采血,并且进行... 为了评价免疫增强剂VA5对猪伪狂犬病毒灭活疫苗的免疫增强作用,将VA5与灭活疫苗混合并制成疫苗。通过常规Bartha-K61株灭活疫苗、含免疫增强剂灭活疫苗和Bartha-K61活疫苗3组免疫效力对比试验,首次免疫后14和35 d对猪进行采血,并且进行中和实验以及对相关细胞因子进行检测。结果表明,该免疫增强剂能够显著地提高猪伪狂犬灭活疫苗血清中抗体产生,同时能显著提高猪外周血淋巴细胞(PBMC)中IL-2和IFN-γ mRNA表达。交叉中和试验表明,VA5能够显著地提高猪伪狂犬灭活疫苗对伪狂犬流行变异株的中和作用。试验表明,VA5能够显著提升猪伪狂犬病毒灭活疫苗体液与细胞免疫,为研制免疫效果更好的灭活疫苗提供了依据。 展开更多

关键词 免疫增强剂 伪狂犬病毒灭活疫苗 bartha-k61株 免疫效力

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