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鸡传染性喉气管炎病毒抗原双抗夹心ELISA方法的建立
1
作者 谢晶 于吉锋 +12 位作者 肖璐 吴学婧 叶勇刚 魏勇 李兴玉 曹冶 潘梦 毛从剑 杨竣雁 叶健强 曾子轩 康玮笠 康润敏 《中国动物检疫》 2025年第6期99-105,127,共8页
为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了... 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了性能评估。结果显示:捕获抗体的最佳包被质量浓度为2μg/m L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1:4 000;临界值为0.295 6,当待测样品OD_(450 nm)值大于0.295 6且P/N值大于2时,判为阳性;建立的双抗夹心ELISA方法可特异性检测ILTV抗原,而对其他禽类常见抗原的检测结果均为阴性;最低检测限为49.4 ELD_(50)/0.1 mL,批内和批间变异系数均小于10%。48份临床样品的检测结果显示,该方法与行业标准中PCR方法的符合率为93.75%。结果表明,本研究建立的ILTV双抗夹心ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于ILTV抗原检测。该方法的建立为该病的检测、监测以及防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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鸡传染性喉气管炎病毒分离鉴定及遗传进化分析 被引量：1
2
作者 袁辉 刘丹 +8 位作者 刘敏 吴琼 李凌丹 宾晨 李伟 李国攀 陈红心 周启立 熊涛 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期57-63,共7页
荆州某鸡场出现了疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染,为确定该病病因,用PCR初步检测鸡传染性喉气管炎病毒为阳性;将阳性病料经处理后接种于SPF鸡胚绒毛尿囊膜,传至5代,收集出现痘斑和增厚的绒毛尿囊膜及尿囊液,对其进行PCR检测、病毒... 荆州某鸡场出现了疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染,为确定该病病因,用PCR初步检测鸡传染性喉气管炎病毒为阳性;将阳性病料经处理后接种于SPF鸡胚绒毛尿囊膜,传至5代,收集出现痘斑和增厚的绒毛尿囊膜及尿囊液,对其进行PCR检测、病毒滴度测定及动物回归试验。确定分离到1株ILTV毒株,命名为JZCD202302株。参照GenBank公布的鸡传染性喉气管炎病毒WG株设计了gB、gC、gD、gE、gK、TK基因特异性引物,用MEGA6.0软件绘制了遗传进化树。gB-gC-gD-gE-gK-TK串联进化树分析结果显示,该毒株与澳大利亚疫苗相关野外重组流行毒株7b、ACC78、CL9和实验室疫苗重组株ILTV.157/19亲缘关系最近。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 分离鉴定 进化树分析
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表达鸡传染性喉气管炎病毒gD蛋白的重组嵌合型新城疫病毒La Sota株的构建 被引量：1
3
作者 田静格 徐鸣荷 +16 位作者 王向东 张意航 李岩 刘俊杰 李星雨 韩城昊 张伯顺 卜德新 于春梅 丛雁方 杨盼盼 乔麒龙 王增 李建丽 李永涛 王白玉 赵军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期659-665,共7页
为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa S... 为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa Sota-VIIF/HN的P和M基因之间,将获得的重组感染性克隆pLa Sota-VIIF/HN-gD与辅助质粒pCIneo-NP-P-L共转染BHK-21细胞,拯救出表达gD蛋白的重组嵌合型NDV La Sota株rLaSota-VIIF/HN-gD,并采用血凝试验鉴定正确后,将重组病毒在9日龄SPF鸡胚中连续传至10代,提取10代重组病毒基因组RNA,反转录成c DNA作为模板,以ILTV gD基因插入位点两侧的鉴定引物进行PCR鉴定;采用第10代重组病毒感染BHK-21细胞,以ILTV gD蛋白多克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光试验(IFA);分别对鸡红细胞吸附的重组病毒感染的鸡胚尿囊液上清和从红细胞上解离下来的纯化的重组NDV病毒粒子经western blot鉴定,并对重组病毒对鸡胚的致病性和在鸡胚中的复制动态进行初步研究。PCR结果显示ILTV gD基因能够在重组病毒中稳定存在;IFA和western blot鉴定结果显示,重组病毒能够正确表达ILTV的gD蛋白,而且gD蛋白嵌合表达在重组病毒颗粒上。鸡胚致病性试验和鸡胚中的复制动态试验结果显示,重组病毒保持了La Sota疫苗株的低致病性和良好的复制特性,rLaSota-VIIF/HN-gD的鸡胚平均死亡时间(MDT)为168 h,1日龄雏鸡脑内接种该重组病毒的致病指数(ICPI)为0.20,鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值可达10^(-8.66)/100μL。本研究所制备的重组病毒r LaSota-VIIF/HN-gD为研制基因VII型NDV和ILTV的二联活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 重组嵌合型新城疫病毒 gD蛋白 二联活疫苗
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药理激活p38/MAPK体外抗传染性喉气管炎病毒效应的检测
4
作者 崔露 刘柘一 +3 位作者 张宇 韩宗玺 刘胜旺 李海 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期723-730,746,共9页
鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)是一种严重危害我国和世界养禽业的重要病原。本研究以ILTV-LJS09株感染的鸡LMH细胞系作为研究模型,对该病毒的全基因组转录谱分析,采用基因富集分析(GSEA)分析细胞中的信号通路。结果发现MAPK通路是ILTV感染... 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)是一种严重危害我国和世界养禽业的重要病原。本研究以ILTV-LJS09株感染的鸡LMH细胞系作为研究模型,对该病毒的全基因组转录谱分析,采用基因富集分析(GSEA)分析细胞中的信号通路。结果发现MAPK通路是ILTV感染LMH细胞后最显著激活的通路。进一步采用western blot鉴定,结果显示ILTV感染可以显著激活宿主细胞p38/MAPK信号通路。本研究同时采用脱氢紫堇碱(DHC)和佛波酯(PMA)作为p38/MAPK激活剂,采用特异性荧光定量PCR检测病毒基因组拷贝数,通过测定病毒的TCID_(50)检测病毒滴度,利用荧光定量PCR检测细胞中代谢相关基因的转录水平,使用高内涵成像技术结合Annexin V-FITC/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡,从而探究药理激活p38/MAPK对ILTV感染的影响。病毒特异性荧光定量PCR检测结果显示,DHC和PMA均显著降低ILTV基因组的复制(P<0.05)。TCID_(50)测定结果显示,DHC和PMA还显著抑制ILTV感染性病毒粒子的增殖(P<0.05)。荧光定量PCR检测结果显示,无论DHC还是PMA对感染细胞代谢基因的总体转录水平均无明显影响。高内涵成像技术检测结果显示,DHC和PMA显著加剧ILTV感染细胞的凋亡(P<0.05)。综上所述,本研究结果显示DHC和PMA均能够在不影响感染细胞代谢基因表达的情况下,通过加剧ILTV感染细胞的凋亡有效抑制ILTV的感染。本研究在ILTV体外感染模型中证明药理激活p38/MAPK信号通路具有高效的抗病毒作用,为治疗ILTV的感染提供了新的思路,对其他疱疹病毒感染的防治研究也具有借鉴意义。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 P38丝裂原活化蛋白激酶 转录谱 凋亡
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鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立 被引量：3
5
作者 谢志勤 谢芝勋 +14 位作者 张艳芳 范晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王盛 李丹 韦悠 李小凤 任红玉 阮志华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期381-388,共8页
旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR... 旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果显示,建立方法的最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为56℃。特异性检测结果显示,建立的方法只检出ILTV,没有检出其他病原株。敏感性检测结果显示,采用建立的方法定量检出ILTV重组质粒标准品的最低限为4.6拷贝/μL。对3个连续稀释的pMD18-ILTV重组质粒DNA进行检测,3次重复检测结果的变异系数均小于5%。对83份病鸡喉拭子、肺及脾组织样品进行检测,采用建立的ddPCR检出ILTV阳性样品10份,荧光定量PCR检出ILTV阳性样品9份,ddPCR的阳性检出率(12.05%)高于荧光定量PCR的阳性检出率(10.84%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测ILTV特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量检测ILTV提供更好的技术支撑。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 微滴式数字PCR 定量检测
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1株鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定及致病性评价
6
作者 张亚 胡小飞 +5 位作者 田辉 段佳蕾 田克恭 张云静 张海洋 逄文强 《现代畜牧兽医》 2024年第11期1-5,共5页
研究旨在为当前国内鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)的流行情况调查及相关疫苗研发提供参考。河南省濮阳市某养鸡场的蛋鸡疑似感染ILTV,将阳性病料处理后接种鸡胚绒毛尿囊膜,盲传3代后产物进行PCR鉴定... 研究旨在为当前国内鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)的流行情况调查及相关疫苗研发提供参考。河南省濮阳市某养鸡场的蛋鸡疑似感染ILTV,将阳性病料处理后接种鸡胚绒毛尿囊膜,盲传3代后产物进行PCR鉴定和TK、gD基因序列测定分析,并通过动物回归试验初步研究分离株的致病性。结果显示,盲传3代后绒毛尿囊膜出现痘斑、增厚现象,产物PCR鉴定结果为阳性,将其命名为PY株。PY株TK、gD核苷酸序列与GenBank发表的ILTV序列相似性分别为99.4%~100.0%、99.1%~100.0%。49日龄SPF鸡于攻毒后第3 d出现鸡传染性喉气管炎的典型临床症状,剖检病死鸡可见喉头气管内充满血样黏液。攻毒后鸡发病率为100%、死亡率为30%。研究表明,分离株PY株是一株致病力较强的ILTV。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 TK基因 GD基因 致病性
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应用多重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体的研究 被引量：25
7
作者 谢芝勋 谢志勤 +2 位作者 庞耀珊 刘加波 邓显文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第6期443-446,共4页
本文建立了一种同时检测NDV、IBV、ILTV和MG 4种病原体的多重PCR技术。根据NDV、IBV、ILTV和MG的基因文库 ,设计了 4对分别与NDV、IBV、ILTV和MG某段基因序列互补的引物 ,用这 4对引物对同一样品中的NDV、IBV、ILTV、MGRVA或DNA模板进... 本文建立了一种同时检测NDV、IBV、ILTV和MG 4种病原体的多重PCR技术。根据NDV、IBV、ILTV和MG的基因文库 ,设计了 4对分别与NDV、IBV、ILTV和MG某段基因序列互补的引物 ,用这 4对引物对同一样品中的NDV、IBV、ILTV、MGRVA或DNA模板进行多重PCR扩增 ,结果均同时得到了 4条特异性大小与实验设计相符的 310bp(NDV)、172 0bp(IBV)、6 47bp(ILTV)、和 732bp(MG)多重PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重PCR技术能检出 10pg的IBV、1pg的NDVRNA模板和 10pg的ILTV、1pg的MGDNA模板。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 检测 鸡新城疫病毒 鸡传染性支气管炎病毒 鸡传染性喉气管炎病毒 鸡毒支原体
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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价 被引量：14
8
作者 王云峰 智海东 +5 位作者 王玫 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期426-429,共4页
为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有... 为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有白斑出现 ,说明病毒纯度不够 ;经过 16代纯化的病毒 (rFPV -ILTVgB -C16)对细胞的嗜性加强 ,病毒的效价进一步升高 ,2 0代传代后蓝斑率仍然为 10 0 % ,PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第 5 ,10 ,15 ,2 0代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种 2周龄SPF鸡 ,2 0天后分为两组 ,分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株攻击 ,结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击。鸡体内病毒传代试验表明 ,重组病毒在接种部位仅存在 6天 ,之后就检测不到病毒 ,重组病毒通过SPF鸡连续传代 ,不存在病毒返祖的可能。由此可以得出一个结论 ,rFPV -ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的 ,无论是在体外传代 ,还是在体内均可以稳定遗传 ,不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能 ,完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 鸡痘 重组鸡痘病毒疫苗 遗传稳定性
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传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达 被引量：12
9
作者 张绍杰 倪健强 +4 位作者 孟松树 王柳 仇华吉 王云峰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期321-324,共4页
将克隆到pUC119中的传染性喉气管炎病毒 (ILTV)糖蛋白gB基因 ,通过EcoRI位点亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中 ,构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经 3轮蚀斑... 将克隆到pUC119中的传染性喉气管炎病毒 (ILTV)糖蛋白gB基因 ,通过EcoRI位点亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中 ,构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经 3轮蚀斑纯化 ,获得重组病毒并命名为rpVL_ILTVgB。PCR方法鉴定证明gB基因正确插入到杆状病毒基因组中 ,直接免疫荧光试验和Dot_ELISA结果均表明gB基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得表达 ,表达的gB蛋白将作为鸡传染性喉气管炎的亚单位疫苗和诊断抗原。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 糖蛋白gB 重组杆状病毒 基因 鸡病毒
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传染性喉气管炎病毒烟台株TK基因序列测定及TK蛋白功能初步分析 被引量：10
10
作者 刘文波 周斌 +3 位作者 黄兵 张秀美 张素芳 陈溥言 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第10期75-79,共5页
根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)美国632株TK基因序列设计并合成1对引物,以ILTV烟台株DNA为模板扩增了TK基因,并对其进行了序列测定.将ILTV烟台株的TK基因和TK蛋白分别与ILTV美国632株,英国Thorne株,Beijing E2株,BHV-1,EHV-1,EHV-2,FHV-1... 根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)美国632株TK基因序列设计并合成1对引物,以ILTV烟台株DNA为模板扩增了TK基因,并对其进行了序列测定.将ILTV烟台株的TK基因和TK蛋白分别与ILTV美国632株,英国Thorne株,Beijing E2株,BHV-1,EHV-1,EHV-2,FHV-1,HHV-1,HHV-2,HHV-3,HHV-4,HVT,MDV-1,MDV-2,PRV和SHV-2的TK基因和TK蛋白比较后发现,其TK基因的核苷酸和TK蛋白的氨基酸同源性分别为24.6%～99.5%和15.1%～98.9%,表明不同ILTV毒株之间TK基因和TK蛋白相对保守,但与其他α-疱疹病毒的TK基因和TK蛋白同源性则较低. 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 烟台株 TK基因 同源性分析
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一株鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定及TK基因分析 被引量：8
11
作者 孔聪聪 赵妍 +7 位作者 张晓敏 崔红玉 薛美 胡顺磊 闫帅 李巧玲 牛秀杰 王云峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期955-958,共4页
黑龙江省牡丹江市某养鸡场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。本研究利用特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的567 bp大小片段;将发病鸡喉头及分泌物处理后接种鸡胚... 黑龙江省牡丹江市某养鸡场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。本研究利用特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的567 bp大小片段;将发病鸡喉头及分泌物处理后接种鸡胚,在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上形成痘斑。病毒接种鸡胚肾细胞48 h后电镜下可以观察到典型的疱疹病毒粒子形态,并且该分离株能够与ILTV单克隆抗体发生特异性反应。动物回归试验显示,感染的SPF鸡出现典型ILT症状,并能够从发病鸡体内重新分离到ILTV,由此判定该分离株为ILTV,并将其命名为MDJ0442。根据NCBI登录的ILTV序列(HQ630064)设计引物,以MDJ0442基因组为模板,PCR扩增TK的基因片段,进行测序和序列分析。结果表明,与其他ILTV参考病毒株相比,TK基因的核酸同源性为99.62%。本研究可以为ILTV的流行病学调查和分子生物学研究提供参考。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 分离鉴定 TK基因 序列分析
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鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果观察 被引量：24
12
作者 孟松树 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第3期179-181,共3页
将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gB、gC和gD基因的重组真核表达质粒及空载体质粒分组肌肉注射雏鸡 ,攻毒后观察免疫保护效果。结果表明 ,重组质粒诱导了免疫应答 ,免疫保护率为 79% 。
关键词 鸡 传染性喉气管炎病毒 DNA疫苗 免疫应管
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传染性喉气管炎病毒基因疫苗免疫效应 被引量：8
13
作者 王利丽 王云峰 +5 位作者 孙惠玲 杨春富 都兴洋 王玫 步志高 童光志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期175-183,共9页
以传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株gB和gD基因为目的基因构建真核表达质粒pCAGG-gB和pCAGG-gD。将75只SPF鸡随机分为7组,经肌肉注射接种pCAGG-gB、pCAGG-gD、pCAGG-gB+pCAGG-gD、pCAGG-gB+rFPV-ILTVgB以及rFPV-ILTVgB,并设有生理盐水和空... 以传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株gB和gD基因为目的基因构建真核表达质粒pCAGG-gB和pCAGG-gD。将75只SPF鸡随机分为7组,经肌肉注射接种pCAGG-gB、pCAGG-gD、pCAGG-gB+pCAGG-gD、pCAGG-gB+rFPV-ILTVgB以及rFPV-ILTVgB,并设有生理盐水和空载体(pCAGG)对照组。免疫2周后以500EID50ILTV WG株强毒进行攻击,以评价ILTV基因疫苗以及基因疫苗和重组病毒联合应用对SPF鸡的免疫保护作用。血清抗体的检测表明:在免疫后的2周,各免疫组的鸡只均产生了特异性的ILTV抗体,外周血CD4+T、CD8+T、TCRγδ+T细胞明显高于对照组,并且pCAGG-gB和pCAGG-gD分别诱导了高水平的IL-18和IFN-γ的表达。ILTV强毒攻击后,非免疫鸡全部发病,并在第2天出现死亡。而各质粒免疫组均获得了一定的保护(保护率44%),两种质粒联合免疫(pCAGG-gB和pCAGG-gD)和重组病毒(rFPV-ILTVgB)与质粒(pCAGG-gB)联合免疫的免疫组的保护率(56%)高于单独免疫组,产生高水平细胞因子表达的免疫组的保护率高于对照组。重组鸡痘病毒免疫组的保护率(69%)最高。这些结果表明ILTV的DNA疫苗能够诱导鸡体产生特异性免疫应答,并能对传染性喉气管炎强毒的攻击提供一定的免疫保护。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) DNA疫苗 免疫效力
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鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用 被引量：12
14
作者 谢晶 于吉锋 +7 位作者 周泷 曹冶 林毅 李兴玉 肖璐 叶勇刚 潘梦 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期565-572,共8页
试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplificatio... 试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 环介导的等温扩增技术(LAMP) TK基因
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鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立 被引量：4
15
作者 赵妍 孔聪聪 +10 位作者 张晓敏 崔红玉 石星明 赵晓岩 薛美 胡顺磊 闫帅 牛秀杰 李巧玲 王玫 王云峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期642-646,共5页
为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量... 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 GB基因 TAQMAN REAL-TIME PCR
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鸡人工感染传染性喉气管炎病毒后气管病理组织学观察 被引量：9
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作者 石玉祥 张登荣 +2 位作者 王雪敏 王哲 王艳梅 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12710-12711,共2页
[目的]观察鸡人工感染传染性喉气管炎病毒后气管病理组织学变化,为人工制造鸡传染性喉气管炎病例模型方法研究提供参考。[方法]以健康鸡为对照,应用滴鼻、点眼及气管滴入方式同时进行感染,每只鸡接种100 TCID50传染性喉气管炎病毒液0.5 ... [目的]观察鸡人工感染传染性喉气管炎病毒后气管病理组织学变化,为人工制造鸡传染性喉气管炎病例模型方法研究提供参考。[方法]以健康鸡为对照,应用滴鼻、点眼及气管滴入方式同时进行感染,每只鸡接种100 TCID50传染性喉气管炎病毒液0.5 m l,研究感染鸡的病理组织学变化。[结果]结果表明,按上述方法对鸡进行人工感染后,鸡能够产生所报道的病理变化。[结论]该研究的人工感染方式所引起发病的鸡可以作为患传染性喉气管炎鸡的模型。 展开更多
关键词 鸡 人工感染 传染性喉气管炎病毒 病理组织学
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传染性喉气管炎病毒田间分离株与疫苗株的遗传进化关系分析 被引量：8
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作者 吴天琪 程小果 +3 位作者 郭建友 侯玉超 陈天骜 张小荣 《中国家禽》 北大核心 2015年第12期18-21,共4页
采用PCR方法扩增了22个传染性喉气管炎病毒（ILTV）田间分离株的ICP4基因片段，并与GenBank收录的部分鸡胚源（CEO）弱毒疫苗毒株、细胞培养源（TCO）弱毒疫苗毒株和国内分离强毒株进行了序列比较。结果显示：所有田间分离株和国内近期... 采用PCR方法扩增了22个传染性喉气管炎病毒（ILTV）田间分离株的ICP4基因片段，并与GenBank收录的部分鸡胚源（CEO）弱毒疫苗毒株、细胞培养源（TCO）弱毒疫苗毒株和国内分离强毒株进行了序列比较。结果显示：所有田间分离株和国内近期分离的LJS09毒株所测定，C刚基因片段均为676bp；与国内早期分离的王岗（wG）株7LTCO疫苗株相比，田间分离株和CEO疫苗株在ICP4基因的272～283nt部位均存在12个碱基的缺失；遗传进化树显示，田间分离株与CEO疫苗株的距离较近，处于同一个大分支上，而与TCO疫苗株及WG株的距离相对较远，处于不同分支上。上述结果表明，我国ILTV田间分离株的遗传特性与CEO疫苗株接近。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 分离株 疫苗株 ICP4基因
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鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定 被引量：5
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作者 陈红英 张书松 +3 位作者 崔保安 李新生 金钺 陈文 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期36-37,共2页
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 鸡产蛋下降 鉴定 分离 呼吸道传染病 呼吸困难 经济损失 成年鸡
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鸡传染性喉气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量：10
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作者 王楷宬 王素春 +5 位作者 孙亚伟 樊擎莹 康京丽 汪洋 刘华雷 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 2020年第3期98-102,共5页
为探索适合临床高通量鸡传染性喉气管炎检测的方法,针对鸡传染性喉气管炎病毒gB基因序列保守区域,筛选1对特异性引物和1条特异性探针,建立了实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性评估和临床应用检测。结果显示:筛选出的引... 为探索适合临床高通量鸡传染性喉气管炎检测的方法,针对鸡传染性喉气管炎病毒gB基因序列保守区域,筛选1对特异性引物和1条特异性探针,建立了实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性评估和临床应用检测。结果显示:筛选出的引物和探针与其他禽类常见病毒无交叉反应,检测下限达到100拷贝/反应;对来自13个场的480份临床样本进行检测,检测出17个阳性样品,与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明,此方法特异性强,灵敏度高、耗时少,可用于鸡传染性喉气管炎的快速检测。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 实时荧光PCR检测 方法建立 应用
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PCR扩增TK基因检测鸡传染性喉气管炎病毒的研究 被引量：5
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作者 彭大新 甘军纪 +2 位作者 高崧 吴艳涛 刘金彪 《动物医学进展》 CSCD 2001年第3期59-61,共3页
根据已发表序列设计一对包含鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) TK基因全长核苷酸的 1 2 5 9bp引物 ,对 2株 IL TV强毒和1株 ILTV疫苗毒进行 PCR扩增 ,均能扩增出预期大小的目的片段 ,酶切分析证实了目的片段的特异性 ,而其它禽病原体的扩... 根据已发表序列设计一对包含鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) TK基因全长核苷酸的 1 2 5 9bp引物 ,对 2株 IL TV强毒和1株 ILTV疫苗毒进行 PCR扩增 ,均能扩增出预期大小的目的片段 ,酶切分析证实了目的片段的特异性 ,而其它禽病原体的扩增均为阴性。 PCR检测 IL TV DNA的最小检测量为 75 pg。此方法检测人工接种鸡的气管棉拭样品 ,均能检测到 IL TV。 展开更多
关键词 鸡 传染性喉气管炎病毒 TK基因 检测 PCR扩增
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