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恶性疟原虫传播阻断抗原Pfs25和Pfs48/45基因编码序列的体外扩增 被引量:32
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作者 罗树红 余新炳 +1 位作者 李学荣 陈观今 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第1期3-6,共4页
目的:体外扩增编码恶性疟原虫传播阻断抗原Pfs和Pfs48/45的基因序列,为进一步对其进行克隆和体外高效表达创造条件。方法:特定寡核苷酸引物的设计、合成与纯化;恶性疟原虫FCC1/HN株体外培养;利用碱裂解法从培养的恶性疟原虫FCC1... 目的:体外扩增编码恶性疟原虫传播阻断抗原Pfs和Pfs48/45的基因序列,为进一步对其进行克隆和体外高效表达创造条件。方法:特定寡核苷酸引物的设计、合成与纯化;恶性疟原虫FCC1/HN株体外培养;利用碱裂解法从培养的恶性疟原虫FCC1/HN株提取染色体DNA;PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析。结果:从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中特异扩增出编码Pfs25和Pfs48/45基因序列,其片段大小分别为657bp和1,359bp。而用间日疟原虫基因组DNA为模板作对照,无扩增条带出现。结论:体外扩增编码恶性疟原虫传播阻断抗原Pfs25和Pfs48/45基因序列与预期长度相符合,从而,为该基因的克隆、测序和表达奠定基础。 展开更多
关键词 恶性 疟原虫 传播阻断抗原 pfs25 pfs48/45
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恶性疟原虫传播阻断抗原的化学拼接与克隆
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作者 罗树红 余新炳 +1 位作者 徐劲 陈观今 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第3期10-12,共3页
采用缺口填补法将恶性疟原虫有性期Pfs230和Pfs48/45抗原中的2个T细胞表位,3个B细胞表位以及人白介素-Ⅰ中的一个T细胞激活位点按预设方案,拼接成复合多价基因PfSI。复合基因全长147bP,编码43肽复合抗原,经分离、纯化后,插入质粒p... 采用缺口填补法将恶性疟原虫有性期Pfs230和Pfs48/45抗原中的2个T细胞表位,3个B细胞表位以及人白介素-Ⅰ中的一个T细胞激活位点按预设方案,拼接成复合多价基因PfSI。复合基因全长147bP,编码43肽复合抗原,经分离、纯化后,插入质粒pcDNA3的多克隆位点,构建重组载体pcDNA3/PfSI。再将重组载体转化大肠杆菌JM109,用氨苄青霉素和PCR扩增法筛选阳性克隆,最后用限制性内切酶对阳性克隆进行鉴定。复合基因PfSI拼接、克隆的成功为在体外高效表达恶性疟原虫传播阻断抗原创造了条件。 展开更多
关键词 疟原虫 恶性疟原虫 传播阻断抗原 克隆 化学拼接
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我国云南分离株间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原pvs25基因多态性分析 被引量:6
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作者 刘军 冯辉 +3 位作者 郑丽 杨毅梅 金行一 曹雅明 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期458-460,481,共4页
目的阐明我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原pvs25基因多态性特点。方法收集全年流行区云南省血样31份;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增pvs25基因;Sanger双脱氧链终止法测序;DnaSPversion4.0软件统计学分析。结... 目的阐明我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原pvs25基因多态性特点。方法收集全年流行区云南省血样31份;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增pvs25基因;Sanger双脱氧链终止法测序;DnaSPversion4.0软件统计学分析。结果成功扩增pvs25全长基因31个序列。与标准株SalI比较,检测出4个错义突变位点,5种基因型,4处氨基酸置换。C103G289C389C391为主导基因型,L35E97T130Q131是相应主导氨基酸型,其突变与季节流行区的主导基因型和氨基酸型完全一致。核苷酸多态性π值为0.0014。组间多态性π值比较表明全年流行区明显高于季节流行区。结论我国分离株间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs25只有1种主导基因型和1种主导氨基酸型。有限的基因突变再次提示Pvs25是理想的候选抗原,以Pvs25为基础构建的传播阻断疫苗在我国具有广泛应用的可行性。 展开更多
关键词 间日疟原虫 传播阻断疫苗候选抗原 PVS25 基因多态性
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间日疟原虫云南分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因多态性分析 被引量:2
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作者 冯辉 郑丽 +2 位作者 刘军 杨毅梅 曹雅明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期360-362,293,共4页
目的分析我国疟疾混合流行区云南分离株间日疟原虫(P.v)传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因特点。方法收集云南省血样17份;提取疟原虫基因组DNA;PCR扩增Pvs28基因;基因测序;DnaSPversion4.0软件进行基因多态性分析。结果成功扩增Pvs28全长基... 目的分析我国疟疾混合流行区云南分离株间日疟原虫(P.v)传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因特点。方法收集云南省血样17份;提取疟原虫基因组DNA;PCR扩增Pvs28基因;基因测序;DnaSPversion4.0软件进行基因多态性分析。结果成功扩增Pvs28全长基因17个序列。与标准株Sal-I比较,检测出7个错义突变,7个基因型和7种氨基酸型。云南P.v分离株核苷酸多态性π值为0.0044。若不考虑重复片段拷贝数的差异,云南P.v分离株和湖北P.v分离株Pvs28蛋白主导氨基酸型完全一致,即V14-L52-L98-E105-L116-S140-I223。与泰国P.v分离株比较,我国主导基因型突变位点完全包含在泰国P.v分离株突变位点中。结论以Sal-IPvs28为基础建立的传播阻断疫苗能够克服云南P.v分离株Pvs28抗原多样性而发挥传播阻断作用,提示间日疟原虫传播阻断疫苗在我国具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 间日疟原虫 传播阻断疫苗候选抗原 PVS 28 基因多态性
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我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点分析 被引量:2
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作者 刘军 冯辉 +3 位作者 郑丽 凌静 朱晓彤 曹雅明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期558-560,共3页
目的明确我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点。方法收集疟疾单纯流行区浙江、湖北两省间日疟患者血样,制备血样干滤纸片;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48基因;Sanger双脱氧链终止法测序并分析... 目的明确我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点。方法收集疟疾单纯流行区浙江、湖北两省间日疟患者血样,制备血样干滤纸片;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48基因;Sanger双脱氧链终止法测序并分析。结果成功扩增12例间日疟原虫分离株Pvs48全长基因。与间日疟原虫标准株SalⅠ比较,检测出6个错义突变位点,导致6处氨基酸置换和6种基因型。结论我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48具有保守性。 展开更多
关键词 间日疟原虫 传播阻断疫苗候选抗原 Pvs48
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