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过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖 被引量:4
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作者 张向前 张敏 +6 位作者 张静 王艳梅 虎小毅 孙宏飞 童东东 熊晓蕃 赵正豪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1078-1082,共5页
目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA... 目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pc DNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 miR-26b 真核表达载体 胃癌 mkn-45细胞 细胞增殖
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5-氟尿嘧啶气雾对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响 被引量:4
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作者 林填 余江 +3 位作者 魏志刚 胡彦锋 王亚楠 李国新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1066-1068,共3页
目的通过体外模拟5-氟尿嘧啶(5-Fu)腹腔气雾化疗环境,评价5-Fu雾化对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响。方法运用自主研发的气雾化疗仪将5-Fu雾化,体外模拟腹腔气雾化疗环境,对胃癌细胞进行处理,维持气雾环境压力为8mmHg,作用时... 目的通过体外模拟5-氟尿嘧啶(5-Fu)腹腔气雾化疗环境,评价5-Fu雾化对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响。方法运用自主研发的气雾化疗仪将5-Fu雾化,体外模拟腹腔气雾化疗环境,对胃癌细胞进行处理,维持气雾环境压力为8mmHg,作用时间为30min,并设生理盐水雾化作为对照,处理后用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果 MTT结果显示,5-Fu气雾化疗组杀伤率显著高于生理盐水组[(31.13±3.51)%比(4.65±1.99)%,P<0.001];流式细胞结果显示,与生理盐水组相比,5-Fu气雾化疗组细胞凋亡率升高[(12.00±0.92)%比(2.65±0.52)%,P<0.001)],G1期细胞增多[(51.83±1.95)%比(36.41±2.33)%,P<0.001]、S期细胞减少[(16.72±2.36)%比(45.20±3.27)%,P<0.001],差异均有统计学意义。结论 5-Fu气雾能有效抑制胃癌细胞的增殖并诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期,为气雾化疗的临床应用提供实验依据。 展开更多
关键词 5-氟尿嘧啶 腹腔气雾化疗 胃癌细胞 mkn-45 凋亡
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microRNA-137对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响 被引量:3
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作者 刘晓阳 郑海伦 +1 位作者 任志 张磊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第12期1748-1752,共5页
目的研究miR-137过表达对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响。方法采用RT-PCR法检测5株胃癌细胞和人胃黏膜上皮细胞(GES)中miR-137的表达。构建miR-137慢病毒,并转染MKN-45细胞。通过划痕实验、细胞侵袭小室检测和Transwell侵袭实验以分... 目的研究miR-137过表达对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响。方法采用RT-PCR法检测5株胃癌细胞和人胃黏膜上皮细胞(GES)中miR-137的表达。构建miR-137慢病毒,并转染MKN-45细胞。通过划痕实验、细胞侵袭小室检测和Transwell侵袭实验以分析过表达miR-137对MKN-45细胞迁移侵袭的影响。结果 MKN-45细胞中miR-137的表达丰度明显低于在GES、MKN-74、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。同时成功构建micro up病毒感染的细胞组。划痕实验结果显示,与空白对照组(CON组)和阴性对照组(NC组)比较,micro up组24、48 h后平均迁移率差异有统计学意义(P<0.05);细胞侵袭小室检测结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组的平均迁移率差异有统计学意义(P<0.01);Transwell侵袭实验结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组平均迁移率差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-137过表达能明显抑制人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭能力,有可能成为胃癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 胃癌 miR-137 mkn-45 细胞侵袭
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金龙蛇颗粒对原位移植人MKN-45胃癌组织基因表达谱的影响 被引量:5
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作者 余志红 魏品康 +5 位作者 许玲 胡仙珍 邵志华 施俊 孙大志 陆烨 《中华中医药学刊》 CAS 2007年第9期1934-1938,共5页
目的:利用基因表达谱芯片研究金龙蛇颗粒对MKN-45胃癌的分子机制。方法:抽提经金龙蛇颗粒治疗的裸鼠原位移植人MKN-45胃癌组织和生理盐水阴性对照的瘤组织总RNA并纯化mRNA,分别逆转录并进行荧光标记,制作成cDNA探针,与包含4096个人类基... 目的:利用基因表达谱芯片研究金龙蛇颗粒对MKN-45胃癌的分子机制。方法:抽提经金龙蛇颗粒治疗的裸鼠原位移植人MKN-45胃癌组织和生理盐水阴性对照的瘤组织总RNA并纯化mRNA,分别逆转录并进行荧光标记,制作成cDNA探针,与包含4096个人类基因的cDNA表达谱芯片进行杂交,筛选出两组间差异表达基因。结果:在mRNA水平上,筛选出包括与DNA结合、转录和转录因子、蛋白翻译、细胞周期等相关表达差异的基因共341条,其中44条(比值>2)表达上调(占12.9%),297条(比值<0.5)表达下调(占87.1%)。结论:金龙蛇颗粒可引起MKN-45胃癌组织一系列基因表达的改变,金龙蛇颗粒抗胃癌的基因途径可能是多环节、多层次的结果。 展开更多
关键词 金龙蛇颗粒 基因表达谱芯片 人mkn-45胃癌细胞系 胃肿瘤 中医药
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干扰CTPS基因促进川楝素诱导的人胃癌MKN-45细胞凋亡 被引量:1
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作者 罗海静 潘阳 +4 位作者 陈雯 张伟伟 邵淑丽 杨清竹 李铁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1126-1133,共8页
目的探讨干扰CTPS基因对川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡的影响。方法通过生物信息学分析CTPS基因在人胃癌组织中的表达情况以及CTPS基因高表达的胃癌患者的总生存期。以人胃癌MKN-45细胞为实验材料,构建CTPS基因干扰载体,转染MKN-45细... 目的探讨干扰CTPS基因对川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡的影响。方法通过生物信息学分析CTPS基因在人胃癌组织中的表达情况以及CTPS基因高表达的胃癌患者的总生存期。以人胃癌MKN-45细胞为实验材料,构建CTPS基因干扰载体,转染MKN-45细胞48 h后,采用qRT-PCR和Western blot检测CTPS基因mRNA和蛋白表达情况。用80 nmol/L的川楝素处理干扰CTPS基因的MKN-45细胞48 h,使用MTT实验法检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测γH2AX的表达。结果生物信息学分析发现CTPS在人胃癌组织中高表达,CTPS基因高表达的胃癌患者总生存期短。向MKN-45细胞中分别转染Sh-ctrl空载体和Sh-CTPS干扰载体,qRT-PCR和Western blot检测显示,与转染Sh-ctrl空载体相比,转染Sh-CTPS干扰载体的MKN-45细胞中CTPS mRNA和蛋白表达均降低,其中转染ShCTPS-3干扰效果最显著,分别降低了85.21%和53%(P<0.001)。检测细胞存活率及形态变化显示,与Sh-ctrl组相比,ShCTPS-3组细胞存活率降低(P<0.01),细胞皱缩,形态不规则,呈现凋亡特征,细胞凋亡率升高(P<0.05);在此基础上用80 nmol/L的川楝素处理转染Sh-ctrl和ShCTPS-3的MKN-45细胞48 h,与Sh-ctrl+川楝素组相比,ShCTPS-3+川楝素组细胞存活率降低(P<0.001),细胞出现凋亡小体,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论干扰CTPS基因促进川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡。 展开更多
关键词 CTPS基因 川楝素 胃癌 mkn-45细胞
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归芪白术方含药血清对胃癌MKN-45细胞增殖和IL-17、NF-κB表达的影响 被引量:13
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作者 苏韫 李春波 +3 位作者 龚红霞 薛轩 李婷婷 牛世伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第15期1824-1829,共6页
目的:探讨归芪白术方含药血清通过IL-17/NF-κB信号通路对胃癌MKN-45细胞增殖的影响。方法:制备生药质量浓度6.12 g/ml的归芪白术方药液,将SD大鼠随机分为空白组(蒸馏水),阳性药组(奥沙利铂),归芪白术方高、中、低剂量组(6.12 g/ml、3.0... 目的:探讨归芪白术方含药血清通过IL-17/NF-κB信号通路对胃癌MKN-45细胞增殖的影响。方法:制备生药质量浓度6.12 g/ml的归芪白术方药液,将SD大鼠随机分为空白组(蒸馏水),阳性药组(奥沙利铂),归芪白术方高、中、低剂量组(6.12 g/ml、3.06 g/ml、1.53 g/ml),灌胃后制备归芪白术方含药血清,用10%含药血清干预MKN-45细胞,通过细胞增殖及细胞毒性实验(CCK-8)检测归芪白术方含药血清对MKN-45细胞增殖的影响;通过Western blot检测IL-17、NF-κBp65、p-NF-κBp65、IKK-β和IL-6蛋白的表达情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测IL-17、NF-κBp65、IKK-β和IL-6 mRNA表达的情况。结果:CCK-8实验显示,与空白组比较,归芪白术方含药血清抑制MKN-45细胞增殖,且呈时间与剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组比较,阳性药组和归芪白术方高、中、低剂量含药血清组IL-17、NF-κBp65、p-NF-κBp65、IKK-β和IL-6蛋白表达下降(P<0.05);Real-time PCR实验表明,与空白组比较,阳性药组和归芪白术方高、中、低剂量含药血清组IL-17、NF-κBp65、IKK-β和IL-6 mRNA表达减少(P<0.05)。结论:归芪白术方含药血清可以抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,可能与IL-17/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 归芪白术方 含药血清 胃癌mkn-45细胞 IL-17/NF-κB信号通路
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miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量:3
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作者 高慎硕 张智凯 +6 位作者 尹国庆 张红霞 王绪斌 马岩 刘洪俊 李乐平 郭晓波 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期23-29,共7页
目的:探讨miR-875-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用qPCR法检测胃癌细胞BGC-823、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、AGS、MKN-45和胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-875-5p的表达水平。利用脂质体转染技术,分别将miR-875-5p... 目的:探讨miR-875-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用qPCR法检测胃癌细胞BGC-823、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、AGS、MKN-45和胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-875-5p的表达水平。利用脂质体转染技术,分别将miR-875-5p模拟物/抑制剂(mimic/inhibitor)及其阴性对照质粒(miR-NC/Anti-miR-NC)转染至AGS细胞/MKN-45细胞,构建过表达/抑制miR-875-5p的细胞模型,空白对照组(Control组)不转染。通过CCK-8、克隆形成、Transwell等实验分别检测miR-875-5p表达变化对细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-875-5p与上游刺激因子2(USF2)的靶向关系,WB实验验证miR-875-5p对USF2的调控作用并检测USF2蛋白的表达。构建MKN-45细胞裸鼠移植瘤模型,验证miR-875-5p过表达对MKN-45细胞成瘤能力的影响。结果:miR-875-5p在6种胃癌细胞中表达水平显著低于胃黏膜上皮细胞GES-1(均P<0.01)。与Control组和miR-NC组相比,miR-875-5p mimic组AGS细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著降低(P<0.05或P<0.01);miR-875-5p inhibitor组MKN-45细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著提高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证明,miR-875-5p能够直接靶向USF2基因。体内成瘤实验结果表明,过表达miR-875-5p显著抑制MKN-45细胞移植瘤的生长(均P<0.01)。结论:miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 胃癌 AGS细胞 mkn-45细胞 mi R-875-5p 上游刺激因子2 增殖 迁移 侵袭
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PFN2在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞的增殖和迁移 被引量:4
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作者 胡曙民 史良会 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期215-222,共8页
目的研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法组织层面上,应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平;根据PFN2表达量,将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组(46例)、低表达(48例)组... 目的研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法组织层面上,应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平;根据PFN2表达量,将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组(46例)、低表达(48例)组,以及癌旁组织中PFN2高表达组(26例)、低表达(49例)组;采用χ^(2)检验、Spearman相关性以及Kaplan-Meier生存分析法,分析PFN2蛋白表达水平与患者的临床参数之间关系;细胞功能上,敲低MKN-45细胞中PFN2,将其分为controlsiRNA组与PFN2-siRNA组;过表达MKN-45细胞中PFN2,将其分为control-vector组与PFN2-vector组,选取Transwell实验、CCK-8实验检测PFN2对胃癌MKN-45细胞增殖及迁移影响。结果在胃癌组织中PFN2蛋白表达高于癌旁组织(P<0.01);PFN2蛋白的表达水平和胃癌病人的M分期显著正相关(P<0.05);在胃癌组织中,PFN2表达和VEGFR表达呈正相关关系(P<0.01);PFN2蛋白高表达的胃癌患者预后更差(P<0.01),并且是胃癌预后的独立预测因子(P<0.05);MKN-45细胞中高表达PFN2组较低表达组增殖、迁移能力更强(P<0.001)。结论PFN2蛋白在胃癌组织中高表达,并促进人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移。 展开更多
关键词 胃癌 PFN2 mkn-45细胞
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胃癌组织中G9a表达的预后意义及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:3
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作者 李厚雷 赵昕辉 +6 位作者 刘俊 张翔 贺奋飞 张瑞 李纪鹏 杨安钢 吴宏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期797-802,共6页
目的:探究组蛋白甲基转移酶G9a在胃癌组织中的表达及其与预后的相关性,并观察G9a抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过Kaplan-Meier Plotter和Oncomine数据库分析G9a在胃癌组织中的表达水平及其与预后的相关性。选用人胃癌细胞... 目的:探究组蛋白甲基转移酶G9a在胃癌组织中的表达及其与预后的相关性,并观察G9a抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过Kaplan-Meier Plotter和Oncomine数据库分析G9a在胃癌组织中的表达水平及其与预后的相关性。选用人胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45为研究对象,Western blotting方法检测细胞中G9a蛋白表达水平,以G9a抑制剂BIX01294处理胃癌细胞,观察细胞形态变化,CCK-8法和集落形成实验检测胃癌细胞增殖能力和集落形成率的变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果:G9a在胃癌组织中高表达(P<0.01),其高表达与预后不良呈正相关(P<0.01)。BIX01294能使胃癌细胞体积缩小、细胞间连接消失,甚至细胞皱缩、变圆、脱落等。BIX01294能显著抑制胃癌细胞集落形成和胃癌细胞的增殖(均P<0.05),同时促进胃癌细胞凋亡(P<0.05)。结论:G9a在胃癌组织中高表达,其高水平表达与预后不良呈正相关;抑制G9a的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 胃癌 SGC-7901细胞 mkn-45细胞 甲基转移酶 G9a 增殖 凋亡
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