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人FHL1各LIM结构域融合蛋白的原核表达、纯化及活性检测
被引量：
1
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作者
符静
徐小洁
+7 位作者
刘家宏
范忠义
王涛
宋金洁
吕朝晖
朱建华
叶棋浓
陆菊明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期384-386,389,共4页
目的构建人FHL1各LIM结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4融合蛋白,并对其活性进行检测。方法用PCR法从FHL1真核表达载体中扩增FHL1的LIM1/2、LIM1、LIM2、LIM3和LIM4基因编码序列,将其正确插...
目的构建人FHL1各LIM结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4融合蛋白,并对其活性进行检测。方法用PCR法从FHL1真核表达载体中扩增FHL1的LIM1/2、LIM1、LIM2、LIM3和LIM4基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,通过GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白雌激素受体α(ERα)的相互作用。结果构建得到FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期大小相符的目的蛋白,经Western blot法检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4五个融合蛋白,GST pull-down证明FHL1全长以及FHL1-LIM1/2、-LIM2蛋白可以和ERα相互作用。结论成功克隆FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因,并获得了活性良好的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4蛋白,为研究FHL1在乳腺癌中的作用奠定了实验基础。
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关键词
人fhl1-lim1/2、-lim1、-lim2、-lim3和-lim4基因
原核表达
纯化
ERΑ
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题名
人FHL1各LIM结构域融合蛋白的原核表达、纯化及活性检测
被引量：
1
1
作者
符静
徐小洁
刘家宏
范忠义
王涛
宋金洁
吕朝晖
朱建华
叶棋浓
陆菊明
机构
解放军总医院内分泌科
军事医学科学院生物工程研究所
解放军总医院第一附属医院肿瘤科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期384-386,389,共4页
基金
国家自然科学基金(31100604
30872939
81101065)
文摘
目的构建人FHL1各LIM结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4融合蛋白,并对其活性进行检测。方法用PCR法从FHL1真核表达载体中扩增FHL1的LIM1/2、LIM1、LIM2、LIM3和LIM4基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,通过GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白雌激素受体α(ERα)的相互作用。结果构建得到FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期大小相符的目的蛋白,经Western blot法检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4五个融合蛋白,GST pull-down证明FHL1全长以及FHL1-LIM1/2、-LIM2蛋白可以和ERα相互作用。结论成功克隆FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因,并获得了活性良好的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4蛋白,为研究FHL1在乳腺癌中的作用奠定了实验基础。
关键词
人fhl1-lim1/2、-lim1、-lim2、-lim3和-lim4基因
原核表达
纯化
ERΑ
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人FHL1各LIM结构域融合蛋白的原核表达、纯化及活性检测
符静
徐小洁
刘家宏
范忠义
王涛
宋金洁
吕朝晖
朱建华
叶棋浓
陆菊明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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