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人A组轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其小鼠多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 张卫斌 吕长坤 +2 位作者 杨颖 王向鹏 王明永 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期910-916,共7页
目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖... 目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导VP6表达,采用镍柱(Ni-NTA)亲和层析纯化VP6蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定VP6蛋白;将VP6蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体滴度。结果构建了pET32a-VP6重组表达质粒,VP6蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析法纯化了VP6蛋白,免疫小鼠后获得了多克隆抗体,抗体效价为1∶32000,抗体可以和VP6蛋白发生特异性反应。结论表达和纯化了人A组轮状病毒的VP6蛋白,制备了小鼠抗VP6蛋白的多克隆抗体,为人A组轮状病毒诊断抗原的制备和血清学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 人a组轮状病毒 VP6蛋白 原核表达 多克隆抗体
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人A组轮状病毒VP6蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 张卫斌 吕长坤 +2 位作者 杨颖 王明永 王向鹏 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期932-938,共7页
目的建立基于人A组轮状病毒(Rotavirus group A,RVA)VP6蛋白的间接ELISA抗体检测方法,为RVA抗体检测提供技术支持。方法以RVA的VP6蛋白为诊断抗原,用棋盘滴定方法优化ELISA反应条件,建立检测RVA抗体的间接ELISA方法。收集健康儿童血清和... 目的建立基于人A组轮状病毒(Rotavirus group A,RVA)VP6蛋白的间接ELISA抗体检测方法,为RVA抗体检测提供技术支持。方法以RVA的VP6蛋白为诊断抗原,用棋盘滴定方法优化ELISA反应条件,建立检测RVA抗体的间接ELISA方法。收集健康儿童血清和RVA患者血清,用建立的方法检测血清标本。结果以2µg/mL的VP6蛋白包被酶标板,血清1∶250倍稀释为最佳条件,阴阳性临界值为0.137。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,与Western blotting抗体检测方法符合率为95%。检测370份儿童血清标本,抗体阳性率为81.1%。检测15名RVA患者的急性期和恢复期血清,恢复期血清中RVA抗体滴度相比于急性感染期明显增高。结论建立的ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于RVA抗体检测和RVA感染的辅助诊断。 展开更多
关键词 人a组轮状病毒 VP6蛋白 间接酶联免疫吸附试验 抗体检测
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