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抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达 被引量：9
1
作者 白银 王琰 +3 位作者 周丽君 黄啸 丁义 俞莉章 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期402-406,共5页
目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行... 目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定。结果 :成功构建抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,并实现其真核表达。初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力。结论 :构建的抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想。 展开更多
关键词 人-鼠嵌合抗体 真核表达 单克隆抗体 药物载体 膀胱肿瘤 治疗 膀胱癌
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抗人胃癌3H11人-鼠嵌合抗体的构建及表达 被引量：5
2
作者 李竞 王卓智 +5 位作者 王琰 刘群英 化冰 陈宇萍 朱迎春 董志伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第2期116-120,共5页
为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重... 为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重链表达载体。应用Lipofectin方法先将嵌合轻链表达载体转染到Sp2/0细胞中,经用含霉酚酸的选择培养基筛选及克隆化培养,获得稳定分泌3H11人-鼠嵌合轻链的转染细胞株。再将嵌合重链表达载体转染该细胞系,用含有组氨醇的选择培养基筛选,获得组氨醇抗性细胞株,经亚克隆后得到可稳定分泌人k链和人IgGl的转染细胞系,经ELISA检测该细胞系所分泌的上清含有可与人胃癌细胞系803结合的人IgG抗体活性,RT-PCR结果显示该细胞株有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录,证明已获得分泌3H11人-鼠嵌合抗体的细胞系。 展开更多
关键词 3H11 人-鼠嵌合抗体 胃肿瘤 真核基因 表达
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抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)的构建和表达 被引量：5
3
作者 王硕 蒋琳 +4 位作者 叶庆 朱慧芬 杨敬 邵静芳 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期665-668,共4页
目的 :构建抗CD71人 鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体。方法 :将鼠源性抗CD71单抗 (75 79)重、轻链可变区基因 (VH 和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ Expr和pκ Expr中 ;将嵌合表达载体 (... 目的 :构建抗CD71人 鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体。方法 :将鼠源性抗CD71单抗 (75 79)重、轻链可变区基因 (VH 和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ Expr和pκ Expr中 ;将嵌合表达载体 (Chi75 79 pγ Expr和Chi75 79 pκ Expr)经电转染技术共转染至真核细胞 (SP2 0 )中。结果 :经ELISA法检验阳性转染瘤细胞培养上清 ,证明其表达蛋白产物中同时具有人IgG重链恒定区 (Cγ)和轻链恒定区 (Cκ)蛋白 ;通过间接免疫荧光流式细胞术 (FCM)和间接免疫荧光显微技术 ,证明该表达产物能够特异性识别和结合表达于靶细胞表面的CD71分子。结论 :抗CD71人 鼠嵌合抗体 (D2C)在体外真核细胞表达成功。 展开更多
关键词 CD7l 人-鼠嵌合抗体 构建 表达
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B7-1人-鼠嵌合抗体对小鼠狼疮样肾炎模型的免疫干预效应 被引量：4
4
作者 沈辉 朱玉强 +7 位作者 孔永 王婧 朱华亭 於葛华 蔡磊 朱莹 王志瑶 邱玉华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1200-1205,共6页
目的:在运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型并对其进行生物学鉴定的基础上,探讨B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/D28信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法:取6周龄雌性C57BL/6J小鼠,予一次性腹腔注射Pristane 0.5ml/只,每月定... 目的:在运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型并对其进行生物学鉴定的基础上,探讨B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/D28信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法:取6周龄雌性C57BL/6J小鼠,予一次性腹腔注射Pristane 0.5ml/只,每月定期检测小鼠的尿蛋白、ANA及肾脏病理学改变。取尿蛋白含量达到++,ANA荧光强度达到++的小鼠随机分为3组,每组5只。抗体干预组用B7-1人-鼠嵌合抗体经眼眶静脉序贯给药,阳性对照组注射免疫抑制剂CTX,阴性对照组注射人同型Ig G。每月定期检测尿蛋白及ANA,干预至3个月时,处死小鼠,取肾脏进行H&E染色分析,免疫复合物(IC)检测及透射电镜观察。结果:Pristane诱导至4个月时,80%的小鼠尿蛋白含量达到+^+++,血清ANA荧光强度为++^+++,出现尿蛋白及ANA的小鼠,其肾小球炎性细胞侵润,肾小管上皮样细胞可见水肿样变性、血管充血明显,纤维组织增生。抗体干预后,尿蛋白逐渐由++^+++降为±^++,ANA由++^+++降为+^++。与阴性对照组比较具有统计学差异(P<0.01)。肾脏HE染色分析的结果显示,抗体干预组肾小球炎性细胞侵润及肾小管充血等表现均得到明显改善。免疫荧光染色可见抗体干预组抗原抗体复合物(IC)的荧光强度明显减弱。经透射电镜观察,抗体干预组与阴性对照组相比,肾小球的电子致密物沉积减少,基底膜厚度趋于均匀。结论:B7-1抗体通过抑制B7-1/CD28信号通路下调机体的免疫应答,减少自身抗体的产生,对自身免疫造成的病理损伤具有逆转作用。 展开更多
关键词 B7-1 人-鼠嵌合抗体 降植烷 狼疮样肾炎 尿蛋白 抗核抗体
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组织因子人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建及鉴定 被引量：3
5
作者 张全爱 齐延红 +4 位作者 潘薇薇 何永吉 赵峰梅 杨素萍 赵邑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1149-1151,共3页
目的:构建组织因子人-鼠嵌合抗体的真核共表达载体pCN40-VL-VH,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中进行稳定表达,以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法:从分泌鼠抗人的组织因子mAb的杂交瘤细胞株(克隆号:mTA)中抽提总RNA,经RT-... 目的:构建组织因子人-鼠嵌合抗体的真核共表达载体pCN40-VL-VH,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中进行稳定表达,以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法:从分泌鼠抗人的组织因子mAb的杂交瘤细胞株(克隆号:mTA)中抽提总RNA,经RT-PCR扩增mAb VL和VH的基因序列,构建重组真核表达载体pCN40-VL-VH,并进行酶切鉴定和测序。通过磷酸钙沉淀法转染CHO细胞,以终浓度800μg/LG418筛选阳性细胞,通过间接ELISA、Western blot检测细胞培养上清中嵌合抗体的表达量、活性及特异性。结果:成功构建了抗人组织因子嵌合抗体真核共表达载体pCN40-VL-VH并在CHO细胞中表达。ELISA、Western blot证实,表达的抗组织因子嵌合抗体为人鼠嵌合抗体,该抗体能与重组人TF抗原特异性的结合且表达量为51.25mg/L。结论:成功地构建并在真核细胞中表达了抗人组织因子嵌合抗体,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 组织因子 人-鼠嵌合抗体 真核表达载体 CHO细胞
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抗人p185^(erbB2)人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定 被引量：2
6
作者 姜北海 刘文斌 +2 位作者 孟麟 吴健 寿成超 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期491-495,共5页
目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体... 目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体的免疫原性 ,为进一步的应用研究奠定基础。方法 :RT -PCR扩增p185 erbB2 单抗 1 2的轻、重链可变区基因 ,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中 ,脂质体转染CHO dhfr-细胞。经RT -PCR、间接ELISA、Westernblot检测人 -鼠嵌合抗体的表达水平 ,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定。此外 ,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用。结果 :用RT -PCR、间接ELISA、Westernblot方法证明人 -鼠嵌合抗体在CHO dhfr-细胞中表达 ;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185 erbB2的细胞反应阳性 ,与低表达p185 erbB2 的细胞反应阴性 ;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用。结论 :CHO dhfr-细胞表达的人 -鼠嵌合抗体可与p185 erbB2 特异性结合 ,并可抑制高表达p185 erbB2 的肿瘤细胞生长 ,表明抗人p185 erbB2 人 展开更多
关键词 p185^erbB2 人-鼠嵌合抗体 真核表达载体 CHO 高表达 RT-PCR 乳腺癌细胞 特异性结合 HER2/NEU 重链可变区
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抗TNF-α人-鼠嵌合抗体的构建及表达 被引量：2
7
作者 周丽君 陈晓穗 +4 位作者 王欲晓 朱迎春 张海荣 谢帮铁 王琰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期491-494,共4页
目的 :构建和表达抗TNF α人 鼠嵌合抗体。方法 :将抗TNF α鼠单抗Z8的轻、重链可变区基因插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核细胞表达载体中 ,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,转染真核细... 目的 :构建和表达抗TNF α人 鼠嵌合抗体。方法 :将抗TNF α鼠单抗Z8的轻、重链可变区基因插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核细胞表达载体中 ,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,转染真核细胞 ,通过ELISA、RT PCR、免疫印迹检测TNF α的活性。用L92 9细胞检测嵌合抗体体外中和TNF α的活性。结果 :ELISA鉴定结果表明该嵌合抗体与TNF α特异性结合 ;PT PCR结果显示转染后细胞系有人 鼠嵌合抗体mRNA的转录 ;免疫印迹结果证实有人IgG蛋白的表达 ;体外中和实验证明此嵌合抗体能中和TNF α对L92 9细胞的毒性。结论 展开更多
关键词 TNF-Α 人-鼠嵌合抗体 构建 基因表达
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抗CD71人-鼠嵌合抗体的体外抗肿瘤效应研究 被引量：1
8
作者 王硕 叶庆 +4 位作者 沈关心 蒋琳 张悦 邵静芳 杨敬 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期13-15,共3页
目的　对抗 CD71人 -鼠嵌合抗体体外抗肿瘤效应进行研究。方法　以表达 CD71分子的 3种人类肿瘤细胞( K5 62 ,CEM和 SMMC- 772 1)为靶细胞 ,以正常人外周血单个核细胞 ( PBMC)为效应细胞 ,在效 /靶细胞比为 5 0∶1的条件下 ,测定嵌合抗... 目的　对抗 CD71人 -鼠嵌合抗体体外抗肿瘤效应进行研究。方法　以表达 CD71分子的 3种人类肿瘤细胞( K5 62 ,CEM和 SMMC- 772 1)为靶细胞 ,以正常人外周血单个核细胞 ( PBMC)为效应细胞 ,在效 /靶细胞比为 5 0∶1的条件下 ,测定嵌合抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应 ( ADCC) ;以 CEM和 SMMC- 772 1为靶细胞 ,在有新鲜补体存在下 ,测定嵌合抗体的补体依赖性细胞毒效应 ( CDC)。结果　抗 CD71人 -鼠嵌合抗体 ( D2 C)能够通过识别 CD71分子 ,并通过人抗体 Fc段介导 ADCC。在有新鲜补体存在下 ,介导 CDC。结论　抗 CD71人 -鼠嵌合抗体对 CD71+肿瘤细胞可介导 ADCC和 CDC。 展开更多
关键词 CD71 人-鼠嵌合抗体 抗肿瘤效应
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抗人小细胞肺癌单抗2F7人-鼠嵌合Fab片段基因的构建和表达
9
作者 林琳 鲁驰 +2 位作者 朱明洁 胡晶莹 赵新泰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期173-176,共4页
目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带... 目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带有人恒定区基因的表达载体pSW1 Fab中 ,构建得到pSW1 2F7Fab ,转化受体菌E .coilXL1 Blue ,IPTG诱导表达 ,经Westernblot和ELISA鉴定表达蛋白的活性。结果 :从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆获得了抗体重、轻链可变区基因。测序证实 2F7单抗的重链 (VH)可变区基因全长 36 2bp ,编码 12 0个氨基酸 ;轻链 (VL)可变区基因全长 319bp ,编码10 5个氨基酸。构建的 2F7人 鼠嵌合Fab表达载体诱导后获得了目的蛋白的表达 ,主要分泌在菌液的上清中 ,表达量较高且稳定 ,具有与NCI H1 2 8细胞特异性结合的活性。结论 :构建和表达了抗人小细胞肺癌单抗 2F7人 鼠嵌合Fab片段 ,表达产物具有与抗原结合的特异性 ,为进一步研究和应用打下了基础。 展开更多
关键词 抗人小细胞肺癌单抗 人-鼠嵌合抗体 FAB片段 基因工程
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基因工程抗体的研究 被引量：2
10
作者 黄华梁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第2期142-144,共3页
本文综述了本实验室近年来在基因工程抗体方面所做的工作:①从杂交瘤细胞基因组中筛选和鉴定出抗乙型脑炎病毒单克隆抗体的重链、轻链可变区基因,构建成人—鼠嵌合基因并在骨髓瘤细胞中表达出抗乙型脑炎病毒的人-鼠嵌合抗体;②根据文献... 本文综述了本实验室近年来在基因工程抗体方面所做的工作:①从杂交瘤细胞基因组中筛选和鉴定出抗乙型脑炎病毒单克隆抗体的重链、轻链可变区基因,构建成人—鼠嵌合基因并在骨髓瘤细胞中表达出抗乙型脑炎病毒的人-鼠嵌合抗体;②根据文献中抗CD3单抗的序列,进行了分子设计,设计出改形抗体的分子序列,用合成和PCR补齐的方法构建了改形的单域抗体(V_H)表达载体,并在大肠杆菌中表达;③构建了外分泌型-附着型的表达单链抗体的表达载体;④克隆和测序了抗人肺腺癌、膀胱癌、CD3的单抗重、轻链可变区基因,并正在构建鼠的抗体库. 展开更多
关键词 基因工程抗体 轻链可变区 乙型脑炎病毒 表达载体 人-鼠嵌合抗体 抗CD3单抗 人肺腺癌 分子序列 杂交瘤细胞 基因组
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