为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HM...为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及缺失酸性尾端的突变体蛋白(mrhHMGB1),经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化两种蛋白.通过试管稀释法、琼脂扩散法两种体外抗菌实验观察,并比较rhHMGB1及mrhHMGB1抗菌活性的差异.实验结果显示,rhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为JM109>ATCC25922>DH5α,而mrhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α则均无抗菌活性.实验结果表明,人HMGB1的酸性尾端对其抗菌活性的发挥至关重要,此研究为进一步探讨人HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.展开更多
文摘为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及缺失酸性尾端的突变体蛋白(mrhHMGB1),经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化两种蛋白.通过试管稀释法、琼脂扩散法两种体外抗菌实验观察,并比较rhHMGB1及mrhHMGB1抗菌活性的差异.实验结果显示,rhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为JM109>ATCC25922>DH5α,而mrhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α则均无抗菌活性.实验结果表明,人HMGB1的酸性尾端对其抗菌活性的发挥至关重要,此研究为进一步探讨人HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.
