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题名hMMS2基因对结肠癌细胞耐药逆转的影响
被引量：2
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作者
张蕾
隋御
王婷
李利坚
李元杰
金彩霞
徐方
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机构
宁夏医科大学检验学院
同济大学医学院转化医学研究中心
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出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期346-353,共8页
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基金
国家自然科学基金项目(编号:81060170
31360251)
+1 种基金
教育部"春晖计划"项目(编号:Z2011056)
银川市应用研究开发计划项目(编号:银财发(2012)249)资助
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文摘
为探讨hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)基因对人结肠癌细胞耐药逆转的影响,文章以人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞(THC8307/L-OHP)为实验材料,采用脂质体-质粒转染技术构建了带有干扰目的基因hMMS2的miRNA片段并携带绿色荧光蛋白标记重组质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)的细胞系,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunostaining technique)检测该细胞系的干扰效率。选择hMMS2低表达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞,同时将未曾作过处理的THC8307/L-OHP细胞作为空白对照组,转染绿色荧光蛋白空质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)的THC8307/L-OHP细胞作为阴性对照组,以噻唑蓝比色分析实验(MTT colorimetric analysis assay)、克隆形成实验(Colony formation assay)对3组细胞的存活率和克隆形成率进行检测,结果显示:实验组细胞的奥沙利铂半数抑制浓度(Half inhibition concentration,IC50)、耐药指数(Resistance index,RI)及克隆形成率(Colony-forming efficiency,CFE)均比对照组细胞明显降低(P<0.05),而相对逆转率(Relative reverse efficiency,RRE)增高(P<0.05),提示实验组细胞增殖能力减弱;以罗丹明123实验(Rhodamine 123 assay)结合倒置荧光显微镜、流式细胞仪检测技术等观测细胞的凋亡变化,结果显示,实验组细胞的凋亡率较对照组细胞显著增高(P<0.05);两对照(空白、阴性)组间并无细胞增殖或凋亡的显著性差异。研究结果提示:下调hMMS2基因表达可逆转人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞对L-OHP的耐药性并促进结肠癌细胞的凋亡。
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关键词
RNA干扰
铂类耐药
hMMS2
人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞(thc8307/l-ohp)
细胞凋亡
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Keywords
RNA interference
platinum resistance
hMMS2
human well-differentiated colorectal carcinoma l-ohp-resistant cell line
apoptosis
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分类号
R735.35
[医药卫生—肿瘤]
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