氯化锂对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖、凋亡及Fas、Caspase-3 mRNA表达的影响 被引量：5

1

作者 赵意华 陈清汉 +3 位作者 华海婴 姜玉军 秦建英 任明明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第4期502-505,共4页

目的:研究氯化锂(LiCl)对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:以40、80、150mmol/L的LiCl作用于U2-OS细胞24、48和72h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;作用48h后,流式细胞术法检测细胞凋亡率,并分析细胞周期;R... 目的:研究氯化锂(LiCl)对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:以40、80、150mmol/L的LiCl作用于U2-OS细胞24、48和72h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;作用48h后,流式细胞术法检测细胞凋亡率,并分析细胞周期;RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas、Caspase-3mRNA的表达。结果:随LiCl作用剂量的增加,U2-OS细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率和Fas、Caspase-3mRNA表达量亦增加(F=61157.480,70.828和418.072,P<0.001);细胞周期分析显示细胞被阻滞于S期(P<0.001)。结论:LiCl可能通过促进凋亡基因Fas、Caspase-3的表达,抑制U2-OS细胞增殖并诱导凋亡。 展开更多

关键词 氯化锂 u2-os细胞 增殖 凋亡 骨肉瘤

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Gab2在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达及意义 被引量：8

2

作者 平勇 邸平山 +3 位作者 李卫兵 李凤梅 陈为一 陈萍萍 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期568-571,共4页

目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Gab2)在人骨肉瘤细胞系中的表达及其与人骨肉瘤细胞侵袭转移的关系。方法:应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染给人骨肉瘤U2-OS细胞,采用Western blotting和RT-PCR法检测转染后Gab2的蛋白和mRNA表... 目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Gab2)在人骨肉瘤细胞系中的表达及其与人骨肉瘤细胞侵袭转移的关系。方法:应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染给人骨肉瘤U2-OS细胞,采用Western blotting和RT-PCR法检测转染后Gab2的蛋白和mRNA表达水平;体外细胞趋化运动实验和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:Gab2在人骨肉瘤U2-OS细胞系中高表达,且转染Gab2 siRNA后的细胞(Si Gab2/U2-OS)中Gab2蛋白及mRNA的表达水平低于转染scramble siRNA细胞(Scr/U2-OS)和U2-OS;趋化运动实验发现在10μg/L表皮生长因子(EGF)的诱导下Si Gab2/U2-OS细胞的迁移能力较U2-OS和Scr/U2-OS细胞明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);Si Gab2/U2-OS细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量均比Scr/U2-OS细胞和U2-OS细胞少,Si Gab2/U2-OS细胞的体外侵袭能力显著降低(P<0.01)。结论:利用siRNA干扰技术降低Gab2的表达对人骨肉瘤U2-OS细胞的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 Grb2协同结合蛋白2 小干扰RNA 细胞侵袭 u2-os细胞

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miR-194慢病毒表达质粒的构建及对人骨肉瘤细胞系U2-OS转移的相关研究

3

作者 韩康 赵廷宝 +9 位作者 卞娜 蔡成魁 颜世举 王鑫 马琼 沙浩 董川 杨彤涛 周勇 马保安 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期753-757,共5页

目的:通过构建携带针对miR-194的慢病毒沉默及过表达载体,研究miR-194对骨肉瘤细胞转移的影响。方法:以miR-194前体及成熟体序列为模板,设计引物,进行PCR扩增,酶切后克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒,检测滴... 目的:通过构建携带针对miR-194的慢病毒沉默及过表达载体,研究miR-194对骨肉瘤细胞转移的影响。方法:以miR-194前体及成熟体序列为模板,设计引物,进行PCR扩增,酶切后克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒,检测滴度,最终对人骨肉瘤细胞系U2-OS进行感染。获取稳定感染细胞后,进行Transwell、划痕等实验。结果:1)慢病毒表达质粒构建成功,沉默表达及过表达重组慢病毒的滴度分别为4×108TU/mL及1.5×108TU/mL;2)稳定过表达miR-194的人骨肉瘤细胞系U2-OS的转移能力较其他组有明显降低(P<0.01)。结论:成功构建了miR-194慢病毒表达载体,miR-194的表达水平对U2-OS细胞的转移能力具有显著影响,miR-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点。 展开更多

关键词 骨肉瘤 miR-194 慢病毒 成骨肉瘤细胞系u2-os 转移

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雷公藤甲素通过miR-34b-5p/Notch1轴抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并诱导其铁死亡 被引量：2

4

作者 姜福贵 伍俊峰 +2 位作者 杨标 吴中恒 周平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期579-585,共7页

目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制。方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR... 目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制。方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+anti-miR-34b-5p组、anti-miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组。qPCR法、CCK-8法、铁离子检测试剂、DHE-荧光探针和WB法分别检测各组U2OS细胞中miR-34b-5p的表达、增殖能力、Fe2+水平、ROS水平以及铁死亡相关蛋白(GPX4、SLC7A11及Notch1蛋白)的表达,双萤光素酶报告基因实验验证miR-34b-5p与Notch1的靶向结合关系。结果:TPL可促进U2OS细胞中miR-34b-5p表达,Fer-1和anti-miR-34b-5p则抑制miR-34b-5p的表达(均P<0.05)。TPL明显抑制U2OS细胞的增殖、GPX4、SLC7A11、Notch1蛋白的表达、增加细胞中Fe2+和ROS的含量,Fer-1可逆转TPL对U2OS细胞的作用(均P<0.05)。过表达miR-34b-5p与TPL对U2OS细胞的作用相似(均P<0.05)。miR-34b-5p可靶向结合Notch1(均P<0.05)。miR-34b-5p抑制剂可明显抑制TPL对U2OS细胞的影响,Fer-1可增强miR-34b-5p抑制剂的作用(均P<0.05)。结论:TPL可抑制U2OS细胞的增殖能力并促进其铁死亡,其作用机制可能与miR-34a-5p靶向调节Notch1表达有关。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 骨肉瘤 u2OS细胞 miR-34b-5p NOTCH1 铁死亡

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下调HMGA2基因表达对改善骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验研究 被引量：3

5

作者 曲珊珊 李荣贵 +4 位作者 张海英 王洋 史艳芬 吕慧 李玉林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期228-231,共4页

目的:研究HMGA2表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中的作用,为基因靶向治疗提供理论依据。方法:采用基于DNA的shRNA表达载体HMGA2-shRNA,稳定转染人骨肉瘤U2OS细胞,下调其HMGA2表达水平,并应用RT-PCR技术检测其对HMGA2基因的沉默效果;... 目的:研究HMGA2表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中的作用,为基因靶向治疗提供理论依据。方法:采用基于DNA的shRNA表达载体HMGA2-shRNA,稳定转染人骨肉瘤U2OS细胞,下调其HMGA2表达水平,并应用RT-PCR技术检测其对HMGA2基因的沉默效果;经Cell Counting Kit-8(CCK8)测定、Hoechst33342染色荧光显微镜观察及Boyden小室法分别检测细胞增殖、凋亡及迁移情况;实时定量RT-PCR检测mRNAs表达水平。结果:稳定转染靶向HMGA2的shRNA可特异性下调U2OS细胞HMGA2 mRNA表达水平;其作用结果使细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,自发凋亡率及Caspase 3和Caspas 9基因表达水平显著升高。结论:HMGA2基因异常表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中起重要作用,靶向HM-GA2的基因治疗可能为骨肉瘤治疗带来新希望。 展开更多

关键词 HMGA2基因 SHRNA 骨肉瘤u2OS 细胞增殖 细胞凋亡

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葡萄籽提取物对人骨肉瘤U2OS细胞抑制作用及机制的研究 被引量：1

6

作者 张庆 杨志勇 +2 位作者 魏令 马佳 尹宗生 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期173-176,共4页

目的探讨葡萄籽提取物(GSE)对人骨肉瘤U2OS细胞的抑制作用及其作用机制。方法选用不同浓度的GSE作用于骨肉瘤U2OS细胞,MTT法检测其生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;实时RT-PCR和Western blot... 目的探讨葡萄籽提取物(GSE)对人骨肉瘤U2OS细胞的抑制作用及其作用机制。方法选用不同浓度的GSE作用于骨肉瘤U2OS细胞,MTT法检测其生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;实时RT-PCR和Western blot检测CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结果 MTT结果显示GSE对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性;流式细胞术显示GSE具有诱导U2OS细胞凋亡的作用;Transwell实验显示GSE可以抑制U2OS细胞的迁移作用;RT-PCR和Western blot结果显示GSE可以下调CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结论 GSE具有抑制骨肉瘤U2OS细胞生长及迁移、诱导细胞凋亡的作用。GSE对骨肉瘤细胞的抑制作用可能与下调CDC20表达有关。 展开更多

关键词 葡萄籽提取物 人骨肉瘤u2OS细胞 CDC20

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硫化氢抑制骨肉瘤U2OS细胞的体外生长 被引量：1

7

作者 郭海华 李敬春 +3 位作者 冯鉴强 张泷涓 雍碧城 黄纲 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期358-363,共6页

【目的】探讨硫化氢单独及与顺铂联用对骨肉瘤细胞生长的影响及其可能机制。【方法】分别用0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L NaHS(硫化氢载体)单独或与20 mg/L顺铂共同作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,CCK-8比色法法检测细... 【目的】探讨硫化氢单独及与顺铂联用对骨肉瘤细胞生长的影响及其可能机制。【方法】分别用0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L NaHS(硫化氢载体)单独或与20 mg/L顺铂共同作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,CCK-8比色法法检测细胞存活率;分别用0.4及1.0 mmol/L NaHS作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,1.0 mmol/L NaHS单独或与20 mg/L顺铂联用作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,细胞单克隆形成法检测各组单克隆数;1.0 mmol/L NaHS与20 mg/L顺铂共同作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,Western-Blot法检测Bcl-2、Bax、NFκB蛋白的表达。【结果】硫化氢对U2OS细胞生长的影响:0.2、0.4、0.6、0.8 mmol/L NaHS作用U2OS细胞24 h,细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);1、2、3、4、5 mmol/L NaHS作用U2OS细胞24 h,细胞存活率分别为(90.01±7.49)%、(88.00±4.12)%、(87.26±4.05)%、(85.40±4.39)%和(82.99±4.65)%,与对照组比较,能不同程度抑制U2OS细胞的生长(P<0.05)。0.4 mmol/L NaHS组、1 mmol/L NaHS组细胞单克隆数分别为445.00±25.00、306.00±17.69,与对照组(464.33±8.32)比较,1 mmol/L NaHS组细胞单克隆数减少(P<0.01);0.4mmol/L NaHS组差异无统计学意义(P>0.05)。NaHS与顺铂联用对骨肉瘤细胞的影响:分别用0.8、1、2、3、4、5 mmol/L NaHS联合20 mg/L顺铂共同作用U2OS细胞24 h,细胞存活率分别为(54.13±4.03)%、(54.09±1.13)%、(50.37±4.56)%、(41.44±3.95)%、(40.00±4.34)%和(36.35±3.90)%,与单用顺铂组(59.76±3.15%)比较,存活率下降(P<0.05)。NaHS+顺铂组细胞单克隆数为231.00±13.52,与顺铂组(285.67±11.59)比较,细胞单克隆数下降(P<0.01);NaHS+顺铂组NFκB蛋白表达及Bcl-2/Bax蛋白表达比值较顺铂组下降。【结论】1 mmol/L浓度以上的NaHS能抑制骨肉瘤细胞的生长,0.8 mol/L浓度以上的NaHS通过减少NFκB入核,增加细胞的凋亡,从而增强顺铂对骨肉瘤细胞的抑制作用。 展开更多

关键词 硫化氢 顺铂 骨肉瘤u2OS细胞 抑制 NFΚB

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三七总皂苷通过阻断Notch1通路抑制U2OS骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡 被引量：4

8

作者 徐慧 许涛 +3 位作者 方梦影 周智敏 马童童 常林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期716-721,共6页

目的探讨三七总皂苷(PNS)对U2OS人骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移生物学行为的影响及机制。方法培养U2OS人骨肉瘤细胞,采用(0、200、400、600、800、1000)μg/mL PNS处理细胞后,CCK-8法检测骨肉瘤细胞的增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜... 目的探讨三七总皂苷(PNS)对U2OS人骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移生物学行为的影响及机制。方法培养U2OS人骨肉瘤细胞,采用(0、200、400、600、800、1000)μg/mL PNS处理细胞后,CCK-8法检测骨肉瘤细胞的增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭、TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot法检测U2OS细胞缺刻基因1(Notch1)、发状分裂增强子1(Hes1)的蛋白表达。结果与对照组相比,PNS可以呈剂量依赖性抑制U2OS细胞的增殖与集落形成,细胞凋亡率增加,细胞侵袭、迁移能力减弱,细胞Notch1及Hes1的蛋白水平降低。结论PNS通过阻断Notch1的信号通路抑制U2OS骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡。 展开更多

关键词 三七总皂苷(PNS) u2OS骨肉瘤细胞 缺刻基因1(Notch1)

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lncRNA HIT对骨肉瘤组织和细胞U2OS顺铂抵抗的影响及其机制 被引量：3

9

作者 康宇翔 任志鹏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1296-1302,共7页

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HIT与骨肉瘤细胞顺铂(cisplatin,DDP)抵抗的关系及其上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关机制。方法:选择天津医院骨科2017年6月至2018年6月42例骨肉瘤组... 目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HIT与骨肉瘤细胞顺铂(cisplatin,DDP)抵抗的关系及其上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关机制。方法:选择天津医院骨科2017年6月至2018年6月42例骨肉瘤组织及相应癌旁组织(距癌变边缘>5 cm)标本,采用qRT-qPCR检测骨肉瘤组织及相应癌旁组织中HIT及EMT标志物Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)m RNA的表达水平。构建DDP抵抗的人骨肉瘤U2OS细胞株及人肾上腺293T细胞株作为抵抗组及对照组,采用慢病毒转染两组表达靶向HIT的siRNA载体于抵抗组细胞中作为干扰A组及B组,同时转染HIT过表达载体及空白载体构建HIT过表达的U2OS细胞株及空白U2OS细胞株分别作为过表达组及空白组。MTT实验检测各组细胞DDP半抑制浓度(IC_(50)),qRT-PCR实验检测各组细胞中HIT、Snail及E-cadherin mRNA的表达水平,Western blotting检测各组细胞Snail及Ecadherin的表达水平,RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA-IP)实验检测U2OS及293T细胞中HIT与Snail蛋白分子的结合情况。结果:骨肉瘤组织中HIT及Snail mRNA表达显著高于癌旁组织、E-cadherin mRNA表达显著低于癌旁组织,且骨肉瘤组织中HIT与E-cadherin mRNA表达呈显著负相关(均P<0.01);抵抗组细胞DDP IC_(50)显著高于对照组、干扰A组及B组细胞,过表达组DDP IC_(50)显著高于空白组(均P<0.01);抵抗组细胞HIT表达显著高于对照组,干扰A组及B组细胞HIT表达显著低于抵抗组及对照组,过表达组HIT表达显著高于空白组(均P<0.05或P<0.01);抵抗组细胞Snail、E-cadherin mRNA表达水平显著高于或低于对照组、干扰A组及干扰B组,过表达组E-cadherin mRNA显著低于空白组;抵抗组细胞Snail蛋白表达水平显著高于对照组、干扰A组及B组细胞,E-cadherin蛋白表达水平则显著低于对照组、干扰A组及B组细胞,过表达组Snail蛋白表达水平显著高于空白组(P<0.05或P<0.01);在U2OS及293T细胞中,免疫磁珠介导Anti-snail抗体下拉HIT的表达水平显著高于对照IgG抗体下拉HIT的表达水平(P<0.01)。结论:HIT通过正调控Snail蛋白水平,抑制E-cadherin的转录活性,从而促进骨肉瘤细胞EMT及DDP抵抗的发生。 展开更多

关键词 骨肉瘤 u2OS细胞 293T细胞 长链非编码RNAHIT 顺铂抵抗 上皮间充质转化

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新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤U2OS细胞增殖的抑制作用 被引量：1

10

作者 许丽君 王学鹏 +6 位作者 林伟杰 梁龙铭 赫玉杰 赵正刚 李芳红 周素瑾 赵子建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期233-238,共6页

目的研究高选择性的新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤的抗癌作用。方法CCK-8法检测不同浓度(0、20、40、80、160、240、320、400、480μmol·L^(-1))和不同干预时间(0、24、48、72、96 h)的ZL-n-91对U2OS细胞的增殖抑制作用;... 目的研究高选择性的新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤的抗癌作用。方法CCK-8法检测不同浓度(0、20、40、80、160、240、320、400、480μmol·L^(-1))和不同干预时间(0、24、48、72、96 h)的ZL-n-91对U2OS细胞的增殖抑制作用;平板克隆形成实验检测ZL-n-91对U2OS细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡的影响;Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白CDK2、结果ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的增殖,呈时间及剂量依赖性(P<0.05),其半数抑制浓度IC_(50)为174.1μmol·L^(-1);ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的克隆形成能力(P<0.01);ZL-n-91影响U2OS细胞的周期进程,将U2OS细胞阻滞在G_(0)/G_(1)期,并明显促进细胞凋亡(P<0.01);Western blot结果显示ZL-n-91明显下调U2OS细胞中Bcl-2、CDK2、CDK4、CyclinD1、CyclinE1蛋白的表达(P<0.05)。结论新型选择性磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91显著抑制骨肉瘤细胞U2OS的增殖,促进细胞的周期阻滞和凋亡,可能是治疗骨肉瘤的潜在药物。 展开更多

关键词 骨肉瘤 ZL-n-91 u2OS细胞 增殖 凋亡 周期

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真核细胞表达人骨形态发生蛋白-7的研究进展 被引量：1

11

作者 薛俊英 付加芳 王世立 《济南大学学报（自然科学版）》 北大核心 2017年第5期459-465,共7页

针对目前生物系统表达的人骨形态发生蛋白-7(h BMP-7)产量不能满足市场需求量、活性低、成本高的现状,对目前h BMP-7在酵母表达系统、昆虫、哺乳动物组织细胞的表达状况进行综述,分析其各自的优势和局限性,并对h BMP-7真核系统表达进行... 针对目前生物系统表达的人骨形态发生蛋白-7(h BMP-7)产量不能满足市场需求量、活性低、成本高的现状,对目前h BMP-7在酵母表达系统、昆虫、哺乳动物组织细胞的表达状况进行综述,分析其各自的优势和局限性,并对h BMP-7真核系统表达进行展望,指出h BMP-7是一种有重要价值的生长因子,具有强烈的骨诱导活性,临床上可用于治疗骨折、骨不愈合,未来的研究重点应是h BMP-7表达量的问题。 展开更多

关键词 人骨形态发生蛋白-7 毕赤酵母 哺乳动物细胞 人骨肉瘤细胞u2-os

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