目的:探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette protein E1,ABCE1)基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响。方法:合成靶向ABCE1的siRNA序列(ABCE1-siRNA)以及阴性对照序列(NCsiRNA),电转法转染至EC...目的:探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette protein E1,ABCE1)基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响。方法:合成靶向ABCE1的siRNA序列(ABCE1-siRNA)以及阴性对照序列(NCsiRNA),电转法转染至EC109细胞,分别形成ABCE1-EC109、NC-siRNA-EC109细胞。RT-PCR、Western blotting检测转染后EC109细胞中ABCE1 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检测EC109细胞周期及凋亡,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell法分别检测EC109细胞的增殖、迁移以及侵袭的能力。结果:ABCE1-EC109细胞中ABCE1 mRNA和蛋白表达较NC-siRNAEC109细胞明显降低[(0.47±0.04)vs(0.67±0.05),(0.63±0.09)vs(0.86±0.11);均P<0.05]。与NC-siRNA-EC109细胞相比,ABCE1-EC109细胞的增殖速度明显减慢[(2.20±0.10)vs(2.91±0.13),P<0.05],细胞周期阻滞在G0/G1期细胞数目明显增多[(76.5±3.1)%vs(56.1±2.7)%,P<0.05)];细胞的凋亡率明显升高[(15.46±3.12)%vs(0.54±0.24)%,P<0.01],迁移、侵袭能力均显著下降[迁移:(8.12±0.23)vs(1.91±0.11)μm,P<0.05;侵袭:(42.56±4.68)vs(68.78±6.98)个,P<0.01]。结论:电转法沉默ABCE1基因的表达可促进食管癌EC109细胞的凋亡,抑制其体外增殖、侵袭及迁移。展开更多
目的了解异染色质相关蛋白1-γ(heterochro-Matin-associated protein 1,HP1-γ)在食管癌发生发展各阶段的表达情况,并初步探讨利用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果较传统光镜下评分方法的优势。方法选用含各级别食管癌病变组织的组织芯...目的了解异染色质相关蛋白1-γ(heterochro-Matin-associated protein 1,HP1-γ)在食管癌发生发展各阶段的表达情况,并初步探讨利用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果较传统光镜下评分方法的优势。方法选用含各级别食管癌病变组织的组织芯片,采用免疫组化方法检测其中HP1-γ的表达,并通过激光扫描细胞仪对免疫组化结果进行定量分析。将激光扫描细胞仪分析结果和传统光镜下评分结果进行相关性分析。结果HP1-γ蛋白主要表达于胞核。在正常食管组织、中-重度异型增生、原位癌、食管鳞癌的阳性率分别为37.5%(3/8),100%(21/21)、100%(7/7)和23.7%(9/38),且在正常食管、中-重度异型增生加原位癌、食管鳞癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。激光扫描细胞仪分析结果与传统光镜下评分结果具有高度相关性(P<0.01)。结论HP1-γ蛋白可能在食管正常细胞向恶性细胞转化的过程中起到了一定的抵抗作用。与传统人工评分方法相比,激光扫描细胞仪在分析免疫组化结果时具有高通量、高度客观、准确的优点。展开更多
目的:探讨核仁纺锤体相关蛋白1(nucleolar and spindle-associated protein 1,NUSAP1)在食管癌(esophageal carci⁃noma,ESCA)中的表达情况、临床意义及功能机制,为ESCA的早期诊断和治疗提供新思路。方法:从GEPIA2和TIMER数据库下载ESCA...目的:探讨核仁纺锤体相关蛋白1(nucleolar and spindle-associated protein 1,NUSAP1)在食管癌(esophageal carci⁃noma,ESCA)中的表达情况、临床意义及功能机制,为ESCA的早期诊断和治疗提供新思路。方法:从GEPIA2和TIMER数据库下载ESCA样本与癌旁样本,进行NUSAP1的表达分析,STRING和Cytoscape软件进行NUSAP1相关基因的PPI网络构建,并进行GO、KEGG及GSEA富集分析。TIMER数据库被用来分析NUSAP1与免疫细胞的相关性。最后通过RT-PCR、Western blot和免疫组化验证NUSAP1在ESCA组织和细胞中的表达,使用慢病毒包被的小干扰RNA转染ESCA细胞,进行NUSAP1的表达敲减。通过CKK-8和Ki67免疫荧光评估NUSAP1对ESCA细胞增殖的影响。结果:NUSAP1在ESCA组织和细胞中高表达。NUSAP1的表达与CDK1、B细胞和巨噬细胞浸润正相关,而与CD4+T细胞、CD8+T细胞、中性粒细胞和树突状细胞浸润负相关。GSEA分析发现NUSAP1的高表达组主要富集于Wnt/β-catenin信号通路、过氧化物酶通路、PI3K/Akt/mTOR信号通路。在体外,敲减NUSAP1后抑制了ESCA细胞增殖。结论:NUSAP1在ESCA中高表达,并与ESCA细胞增殖和免疫细胞浸润密切相关。因此,NUSAP1可能有助于ESCA的诊断和治疗。展开更多
文摘目的了解异染色质相关蛋白1-γ(heterochro-Matin-associated protein 1,HP1-γ)在食管癌发生发展各阶段的表达情况,并初步探讨利用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果较传统光镜下评分方法的优势。方法选用含各级别食管癌病变组织的组织芯片,采用免疫组化方法检测其中HP1-γ的表达,并通过激光扫描细胞仪对免疫组化结果进行定量分析。将激光扫描细胞仪分析结果和传统光镜下评分结果进行相关性分析。结果HP1-γ蛋白主要表达于胞核。在正常食管组织、中-重度异型增生、原位癌、食管鳞癌的阳性率分别为37.5%(3/8),100%(21/21)、100%(7/7)和23.7%(9/38),且在正常食管、中-重度异型增生加原位癌、食管鳞癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。激光扫描细胞仪分析结果与传统光镜下评分结果具有高度相关性(P<0.01)。结论HP1-γ蛋白可能在食管正常细胞向恶性细胞转化的过程中起到了一定的抵抗作用。与传统人工评分方法相比,激光扫描细胞仪在分析免疫组化结果时具有高通量、高度客观、准确的优点。
文摘目的:探讨核仁纺锤体相关蛋白1(nucleolar and spindle-associated protein 1,NUSAP1)在食管癌(esophageal carci⁃noma,ESCA)中的表达情况、临床意义及功能机制,为ESCA的早期诊断和治疗提供新思路。方法:从GEPIA2和TIMER数据库下载ESCA样本与癌旁样本,进行NUSAP1的表达分析,STRING和Cytoscape软件进行NUSAP1相关基因的PPI网络构建,并进行GO、KEGG及GSEA富集分析。TIMER数据库被用来分析NUSAP1与免疫细胞的相关性。最后通过RT-PCR、Western blot和免疫组化验证NUSAP1在ESCA组织和细胞中的表达,使用慢病毒包被的小干扰RNA转染ESCA细胞,进行NUSAP1的表达敲减。通过CKK-8和Ki67免疫荧光评估NUSAP1对ESCA细胞增殖的影响。结果:NUSAP1在ESCA组织和细胞中高表达。NUSAP1的表达与CDK1、B细胞和巨噬细胞浸润正相关,而与CD4+T细胞、CD8+T细胞、中性粒细胞和树突状细胞浸润负相关。GSEA分析发现NUSAP1的高表达组主要富集于Wnt/β-catenin信号通路、过氧化物酶通路、PI3K/Akt/mTOR信号通路。在体外,敲减NUSAP1后抑制了ESCA细胞增殖。结论:NUSAP1在ESCA中高表达,并与ESCA细胞增殖和免疫细胞浸润密切相关。因此,NUSAP1可能有助于ESCA的诊断和治疗。
