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抗人钠碘转运体单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与初步鉴定 被引量:1
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作者 袁庆新 刘超 +2 位作者 段宇 仇镇宁 管晓红 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期167-168,F002,共3页
钠碘转运体(sodium iodide symporter,NIS)是甲状腺滤泡细胞膜上的一类特殊糖蛋白.NIS的主要功能是摄取和浓集碘[1,2],它对维持甲状腺稳态、维护人体健康具有重要的意义.
关键词 人钠碘转运体 单克隆抗体 杂交瘤 细胞 甲状腺滤泡细胞膜
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人钠碘转运体基因转染人大细胞肺癌介导^(131)I治疗的实验研究
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作者 郑薇 李玮 +1 位作者 李宁 谭建 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第6期468-469,共2页
背景与目的肺癌是严重危害人民生命和健康的常见病。目前世界上倾向于将两类生物学行为不同的肺癌分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞性肺癌(NSCLC)。而NSCLC中的大细胞肺癌治疗效果多年来一直没有显著提高,一方面由于其生物学特性十... 背景与目的肺癌是严重危害人民生命和健康的常见病。目前世界上倾向于将两类生物学行为不同的肺癌分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞性肺癌(NSCLC)。而NSCLC中的大细胞肺癌治疗效果多年来一直没有显著提高,一方面由于其生物学特性十分复杂、恶性程度高且多药耐药。另一方面还在于约80%大细胞肺癌患者确诊时已属晚期而失去手术机会。所以化疗在大细胞肺癌的治疗中是无可取代的,但多药耐药的出现令人沮丧。于是,我们设想将转基因技术与放射性核素治疗相结合,将hNIS基因转染至人大细胞肺癌H460细胞系中,使原本不摄碘的H460细胞摄取碘。然后利用放射性核素^131I的辐射生物效应,干扰H460细胞的生物代谢,抑制肿瘤细胞增值活性,最终使癌细胞死亡。 展开更多
关键词 ^131I治疗 人钠碘转运体 大细胞肺癌 基因转染 实验研究 放射性核素治疗 非小细胞性肺癌 介导
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裸鼠模型的人钠/碘转运体基因转染人大细胞肺癌介导放射性核素显像 被引量:3
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作者 郑薇 谭建 +2 位作者 李玮 李宁 许静 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2009年第1期7-9,共3页
目的在动物体内实验观察人钠/碘转运体(hNIS)基因转染人大细胞肺癌介导放射性核素显像是否可行。方法①利用重组质粒以脂质体转染法将hNIS基因转染入人大细胞肺癌H460细胞系中,获得稳定表达hNIS的细胞株(hNIS-H460)。②用hNIS-H460细胞... 目的在动物体内实验观察人钠/碘转运体(hNIS)基因转染人大细胞肺癌介导放射性核素显像是否可行。方法①利用重组质粒以脂质体转染法将hNIS基因转染入人大细胞肺癌H460细胞系中,获得稳定表达hNIS的细胞株(hNIS-H460)。②用hNIS-H460细胞株建立大细胞肺癌荷瘤裸鼠模型,进行放射性核素99mTcO4-显像和131I显像。结果①体外实验表明hNIS-H460细胞株可以摄取碘。②裸鼠大细胞肺癌(hNIS-H460)移植瘤的99mTcO4-和131I显像结果较清晰。结论转染后的hNIS-H460细胞具有一定的摄碘能力。裸鼠大细胞肺癌(hNIS-H460)移植瘤可以进行99mTcO4-和131I显像;99mTcO4-显像的质量优于131I显像。 展开更多
关键词 人钠/转运体基因 转染 放射性核素 人大细胞肺癌
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hNIS转基因介导^(131)碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:5
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作者 钟兴 弓健 +1 位作者 曾祥凤 徐浩 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期387-392,共6页
目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可... 目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG。采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况。CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况。结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS。CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8min。131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01)。结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 人钠/同向转运体 基因转染 放射性同位素
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重组pDC316-MCMV/hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能 被引量:4
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作者 周泉波 陈汝福 +3 位作者 李志花 周嘉嘉 唐启彬 陈积圣 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期383-386,407,共5页
【目的】克隆人的钠/碘同向转运体(hNIS)基因可编码序列,并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(又称Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因,并克隆... 【目的】克隆人的钠/碘同向转运体(hNIS)基因可编码序列,并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(又称Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上,获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV/hNIS。采用脂质体转染的方法,把pDC316-MCMV/hNIS重组质粒(实验组)或pDC316空质粒(对照组)分别导入到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞,转染后48h采用RT-PCR方法检测转染细胞内的hNIS mRNA水平,转染后第2、3、4天分别检测肿瘤细胞对125I的吸收功能。【结果】序列分析结果证实克隆片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致。实验组转染后48h,在CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞及SK-OV-3细胞内均能检测到hNIS mRNA高水平表达,对照组基本无hNIS mRNA表达。转染后第3天细胞吸碘达到高峰,实验组CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和SK-OV-3细胞对125I的吸收量分别比对照组高24倍、17倍和13倍。【结论】从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染肿瘤细胞后,能使肿瘤细胞发挥高水平吸碘功能,为进一步运用放射性核素体内靶向治疗非甲状腺肿瘤奠定了基础。 展开更多
关键词 人钠/同向转运体 逆转录聚合酶链反应 基因转染 放射性同位素
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基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系制备
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作者 郭睿 李彪 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1566-1572,共7页
目的构建含早期生长应答因子1(Egr1)辐射敏感启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)基因重组杆状病毒,为进一步延长核素在细胞中的滞留时间,提高hNIS介导的恶性肿瘤放射性核素基因靶向治疗疗效提供理论基础。方法空载体pFB取自质粒pFB-CMV... 目的构建含早期生长应答因子1(Egr1)辐射敏感启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)基因重组杆状病毒,为进一步延长核素在细胞中的滞留时间,提高hNIS介导的恶性肿瘤放射性核素基因靶向治疗疗效提供理论基础。方法空载体pFB取自质粒pFB-CMV-EGFP,Egr1启动子取自质粒PGL3-Egr1-luc,hNIS取自质粒pcDNA3.1-CMV-hNIS,构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-Hnis;同时构建含CMV启动子的质粒pFB-CMV-hNIS作为阳性对照,并将杆状病毒空载体质粒pFB-0作为阴性对照。随后制备各组杆状病毒,扩增收集重组杆状病毒并进行滴度测定。为进一步鉴定病毒功能,一方面通过体外感染U87脑胶质瘤细胞并采用131I刺激,通过免疫荧光检测131I刺激后的hNIS蛋白表达;另一方面通过摄碘实验进一步验证所表达的hNIS蛋白的摄碘功能和特性。结果成功构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS和pFB-CMV-hNIS;转座成功并提取了重组Bacmid;重组Bacmid转染Sf 9细胞后扩增收集的重组杆状病毒滴度可以达到1×1010pfu/mL。体外感染U87细胞后,免疫荧光检测表明131I刺激后可增加hNIS的表达,感染细胞表达的hNIS蛋白位于细胞膜上,且具有摄碘的功能。结论成功构建了重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS及pFB-CMV-hNIS,获得高滴度的重组杆状病毒Bac-Egr1-hNIS、Bac-CMV-hNIS和Bac-0并得到验证;建立了基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系,为进一步提高核素靶向治疗疗效奠定了重要的理论基础。 展开更多
关键词 人钠同向转运体 早期生长应答因子1 重组杆状病毒 正反馈
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