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人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中的表达及产物纯化 被引量：1
1
作者 李校堃 吴晓萍 +3 位作者 郑青 黄亚东 许华 姚成灿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2001年第5期98-101,共4页
目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β1的基因工程菌 ,优化产物分离纯化的条件 .方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β1的cDNA ,将该cDNA片段插入经改造的pBV 2 2 0表达载体pBL 2的表达框架中 ,构建了表达菌株RR1/pBL 2 -TGF - β1.... 目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β1的基因工程菌 ,优化产物分离纯化的条件 .方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β1的cDNA ,将该cDNA片段插入经改造的pBV 2 2 0表达载体pBL 2的表达框架中 ,构建了表达菌株RR1/pBL 2 -TGF - β1.4 2℃温控诱导表达 .采用谷胱甘肽法 ,对重组蛋白进行复性 .通过阳离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白 .用MTT法测定重组蛋白的活性 .结果 :所构建的表达菌株 ,其TGF - β1的表达量约为 15 %.重组蛋白的复性率达到30 %.经纯化获得了银染一条带的重组蛋白 .测活表明重组蛋白具有较强的生物活性 .结论 :人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中实现了高效表达 ,获得了具有生物活性的重组TGF - β1. 展开更多
关键词 人转化生长因子β1 分离纯化 基因克隆 基因表达 重组蛋白 生物活性 大肠杆菌
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重组人转化生长因子β1在CHO/dhfr^-细胞中的稳定表达和纯化
2
作者 刘春凤 张宁 +2 位作者 周婷 王世媛 陈清西 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期67-71,共5页
构建了含重组人转化生长因子β1(rhTGF-β1)基因的真核表达载体,并利用阳离子脂质体介导的方法,将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中,通过氨甲喋呤(MTX)加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β... 构建了含重组人转化生长因子β1(rhTGF-β1)基因的真核表达载体,并利用阳离子脂质体介导的方法,将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中,通过氨甲喋呤(MTX)加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β1的细胞株.于14L细胞发酵罐进行扩大培养,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测得表达量在3mg/L左右.采用亲和层析、反相层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化,获得的rhTGF-β1试制品的纯度大于97%,得率在25%以上.通过基质辅助激光解析电离化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhTGF-β1的分子量为25.470ku,与理论分子量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,与理论的氨基酸序列一致.rhTGF-β1具有抑制水貂肺上皮细胞Mv-1-Lu增殖的活性,测定其比活为3.2×107 IU/mg,与商品化的rhTGF-β1标准品相当.本研究为进一步规模化制备rhTGF-β1奠定了基础. 展开更多
关键词 重组人转化生长因子β1 表达 纯化
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兔髓核细胞体外培养和重组人转化生长因子-β1对其代谢影响的研究 被引量：5
3
作者 张传志 周跃 +4 位作者 李长青 周琳 郭国宁 曹国勇 李华壮 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第4期280-283,i0001,共5页
目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10n... 目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10ng/ml)组。利用倒置显微镜、扫描电镜、RT-PCR、3H-proline掺入法观察髓核细胞形态学、基因表达水平和总胶原合成的变化。结果:B、C组兔髓核细胞由A组的多角形转为类圆形;与A组相比,B组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖基因表达水平升高(P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。与B组相比,C组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖、核心蛋白多糖基因表达水平增高(P<0.01、P<0.01、P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。结论:兔髓核细胞由单层培养转到Ⅱ型胶原支架上培养时其基因表达和总胶原合成增强。rhTGF-β1(10ng/ml)可增强立体培养的兔髓核细胞基因表达和总胶原合成。 展开更多
关键词 组织工程 细胞培养 髓核细胞 重组人转化生长因子-β1 兔
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重组人转化生长因子-β1对大鼠正畸牙移动模型成骨细胞分化及ERK/MAPK信号通路的影响 被引量：5
4
作者 林维龙 吴晓沛 +1 位作者 何薇薇 安峰 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期118-123,共6页
目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、r... 目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、rhTGF-β1高剂量组。模型组、rhTGF-β1低、中、高剂量组建立大鼠正畸牙移动模型,各组从造模第1天开始给药,rhTGF-β1(低、中、高)剂量组于双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下分别注射1.25、2.5、5 ng/mL的rhTGF-β1溶液0.1 mL,对照组注射0.1 mL生理盐水,每2 d给药1次,持续14 d。游标卡尺测量大鼠上颌第一磨牙移动距离;苏木精-伊红染色观察大鼠牙周及牙槽骨组织病理形态;酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平;Western blot检测大鼠牙周及牙槽骨组织成骨相关蛋白[骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)]和ERK/MAPK通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙张力侧牙周组织膜纤维拉伸变长,组织间隙变宽,基质增生,成骨细胞数量大量减少近乎消失,呈现病理损伤,上颌第一磨牙移动距离、血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平明显升高,血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,rhTGF-β1低、中、高剂量组大鼠牙张力侧牙周及牙槽骨组织病理损伤逐步减轻,血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平依次降低,上颌第一磨牙移动距离、血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平依次升高(P<0.05),且各组之间呈剂量依赖性。结论:rhTGF-β1可减轻大鼠正畸牙移动模型炎症反应,促使成骨分化,加速正畸牙移动,可能与抑制ERK/MAPK信号通路激活有关。 展开更多
关键词 重组人转化生长因子-β1 大鼠正畸牙移动模型 ERK/MAPK信号通路 成骨细胞分化
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人转化生长因子-β1基因转染对人牙龈成纤维细胞成骨特性的影响 被引量：9
5
作者 储庆 吴织芬 +3 位作者 王勤涛 何海丽 万玲 刘玲侠 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期264-267,共4页
目的观察并评价基因转染后牙龈成纤维细胞(GF)表达外源目的基因人转化生长因子-β1(hTGF-β1)对其分化、成骨特性的影响。方法采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测方法检测转染对GFALP活性的影响,免疫组化染色及图像分析评价基因转染后骨钙素(... 目的观察并评价基因转染后牙龈成纤维细胞(GF)表达外源目的基因人转化生长因子-β1(hTGF-β1)对其分化、成骨特性的影响。方法采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测方法检测转染对GFALP活性的影响,免疫组化染色及图像分析评价基因转染后骨钙素(OC)、骨桥素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、骨结合素(ON)含量的变化,体外矿化结节形成实验检测转染后细胞成骨特性的变化。结果转染后GF的ALP活性较未转染组有显著的提高(P<0.05),并且与牙周膜成纤维细胞(PDLCs)的ALP活性接近(P>0.05)。OC含量检测显示转染后GF的OC含量与未转染组和PDLCs组相比,其差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫组化染色后,转染组GF所表达的OPN、ON、BSP含量均高于未转染组GF(P<0.05),而与PDLCs间差异无统计学意义(P>0.05)。第21天和第24天时,在矿化液作用下PDLCs及转染GF在倒置显微镜下可见致密的结节形成,von Kossa染色可见紫色的矿化结节形成。未转染GF未见结节形成。而转染GF在未经矿化液诱导情况下,虽出现显著的细胞聚集,但von Kossa染色未见紫色矿化结节形成。结论转染pcDNA3-hTGF-β1后的GF可表达一定的成骨细胞特性,但这种成骨特性有限。 展开更多
关键词 人转化生长因子-β1 基因转染 牙龈成纤维细胞 成骨
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重组hTGF-β_1基因转染骨髓间充质干细胞及其表达
6
作者 夏万尧 丁文龙 +5 位作者 刘伟 钟梅芳 王丹茹 周广东 崔磊 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1185-1188,1222,共5页
目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染猪BMSCs。转染后72 h,RT-PCR检测BMSCs的hTGF-β1mRNA表达;免... 目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染猪BMSCs。转染后72 h,RT-PCR检测BMSCs的hTGF-β1mRNA表达;免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附定量测定(ELISA法)hTGF-β1蛋白表达;MTT法测定水貂肺上皮细胞(MV-1-Lu)的生长抑制率,以验证转染后所表达的hTGF-β1蛋白的生物学活性。结果转染后72 h,BMSCs能有效表达hTGF-β1mRNA,胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,其蛋白表达量是转染adeno-lacZ的2.65倍(P<0.05);MTT法检测结果显示,转染adeno-hTGF-β1的BMSCs所分泌的hTGF-β1蛋白对MV-1-Lu细胞的生长有显著抑制作用。结论重组adeno-hTGF-β1能够被导入BMSCs,并表达有生物学活性的hTGF-β1蛋白。为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 基因转染 腺病毒 人转化生长因子β1
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rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的细胞活性研究 被引量：3
7
作者 阳爱民 陈江 +4 位作者 闫福华 刘习红 梅雪霜 孙晓宝 葛凤华 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期783-785,共3页
目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体... 目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体外培养的Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)的增殖和碱性磷酸酶的含量的影响不同。结论:rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性有剂量依赖性,和细胞浓度也有关。 展开更多
关键词 重组人骨形成蛋白-2 人转化生长因子-β1 胶原 复合材料 细胞浓度
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rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性研究 被引量：1
8
作者 阳爱民 陈江 闫福华 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2008年第2期155-157,共3页
目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体... 目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体外培养的Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)的增殖和碱性磷酸酶的含量的影响不同。结论:rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性有剂量依赖性。 展开更多
关键词 重组人骨形成蛋白-2 人转化生长因子-β1 胶原 复合材料
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