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ERRα对hiPSCs衍生心肌细胞ATP合成的调控作用 被引量:2
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作者 周琴 张心愿 +7 位作者 叶亮 许皓 谢敏 张颖 谭彬 易勤 田杰 朱静 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期596-603,共8页
目的探讨雌激素受体α(ERRα)在人诱导多能干细胞衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)中对腺苷三磷酸(ATP)合成的调控作用。方法采用时序性短暂激活/抑制Wnt信号通路的方法诱导未分化人诱导多能干细胞(hiPSCs)分化为心肌细胞。使用免疫荧光法分别检... 目的探讨雌激素受体α(ERRα)在人诱导多能干细胞衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)中对腺苷三磷酸(ATP)合成的调控作用。方法采用时序性短暂激活/抑制Wnt信号通路的方法诱导未分化人诱导多能干细胞(hiPSCs)分化为心肌细胞。使用免疫荧光法分别检测hiPSCs中多能性标志物性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、阶段特异性胚胎抗原4(SSEA4)及肿瘤抗性抗原1-60(TRA-1-60),以及hiPSC-CMs中心肌特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)、缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达情况;RT-qPCR检测hiPSCs及hiPSCs-CMs中心肌肌钙蛋白T2(TNNT2)、肌球蛋白重链6(MYH6)mRNA的表达水平;Western blotting检测ERRα、细胞色素C(CytC)及线粒体丙酮酸载体1(MPC1)的蛋白表达水平。此外,用ERRα特异性抑制剂XCT790处理hiPSC-CMs后,采用Western blotting检测ERRα、CytC与MPC1蛋白表达的变化,试剂盒检测hiPSC-CMs的细胞活力、胞内ATP含量及线粒体膜电位的改变。结果免疫荧光检测显示,hiPSCs表达SOX2、SSEA4及TRA-1-60,而hiPSC-CMs表达cTnT及Cx43;与hiPSCs相比,hiPSC-CMs中TNNT2及MYH6 mRNA的表达水平明显增高(82.820±2.005 vs.1.001±0.029,90982.000±1968.000 vs.1.003±0.053),胞内ATP含量及ERRα、CytC、MPC1蛋白表达水平明显增高[分别为(9.905±1.286)nmol/mg prot vs.(4.582±0.141)nmol/mg prot,5.392±0.313 vs.1.050±0.076,8.954±0.293 vs.1.071±0.067,2.605±0.088 vs.1.031±0.091],差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,10μmol/L XCT790能有效抑制hiPSC-CMs中的ERRα蛋白活性且无细胞毒性,并可降低胞内ATP含量及线粒体膜电位[分别为(4.903±1.158)nmol/mg prot vs.(9.310±0.980)nmol/mg prot,1.407±0.022 vs.1.977±0.093],同时下调MPC1及CytC蛋白的表达水平(分别为0.705±0.019 vs.0.897±0.011,0.594±0.021 vs.0.797±0.025),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论hiPSCs分化为心肌细胞后,ATP含量的增加与ERRα表达增加有关,在hiPSC-CMs中ERRα可通过调控线粒体膜电位及CytC、MPC1蛋白的表达而调控ATP的合成。 展开更多
关键词 诱导多能干细胞 人诱导多能干细胞衍生心肌细胞 雌激素受体Α 腺苷三磷酸
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齐墩果酸对hiPSCs衍生心肌细胞成熟的促进作用及机制 被引量:1
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作者 谢敏 周琴 +7 位作者 颜亮 叶亮 张心愿 许皓 易勤 谭彬 田杰 朱静 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期319-326,共8页
目的探讨齐墩果酸(OA)促进丙酮酸激酶(PK)同工型转换在人诱导多能干细胞(hiPSCs)衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)成熟过程中的作用。方法通过时序性激活和抑制Wnt信号通路,诱导未分化hiPSCs向心肌细胞分化,在诱导第19天将hiPSC-CMs分为空白对照... 目的探讨齐墩果酸(OA)促进丙酮酸激酶(PK)同工型转换在人诱导多能干细胞(hiPSCs)衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)成熟过程中的作用。方法通过时序性激活和抑制Wnt信号通路,诱导未分化hiPSCs向心肌细胞分化,在诱导第19天将hiPSC-CMs分为空白对照组(添加B27的RPMI 1640培养基)、DMSO组(添加DMSO 2μl/ml)、OA加药组(添加5 mmol/L的OA 2μl/ml),所有培养基每2 d更换1次,共处理7 d。免疫荧光及RT-qPCR检测hiPSCs中干性因子及hiPSC-CMs中心肌特异性标志物的表达情况;Western blotting检测各组PK、线粒体融合蛋白(MFN2)的表达情况;Mito-Tracker染色检测各组细胞线粒体形态,电镜观察各组线粒体超微结构;EDU染色检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期。结果免疫荧光染色结果显示,hiPSCs表达干性因子Nanog、Sox2,hiPSC-CMs表达心肌特异性标志物cTnT、Cx43、α-actinin。RT-qPCR检测结果显示,与诱导前的hiPSCs比较,hiPSC-CMs心肌相关基因TNNI3、MYH6、MYH7的表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与空白对照组、DMSO组比较,OA加药组细胞面积、肌节长度增加,细胞圆度指数降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与空白对照组、DMSO组比较,OA加药组丙酮酸激酶1与丙酮酸激酶2比值(PKM1/PKM2)及MFN2的表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。电镜观察见OA加药组线粒体融合变长;Mito-Tracker染色结果显示,OA加药组线粒体形成更成熟的网状结构。EDU染色结果显示,与空白对照组、DMSO组比较,OA加药组细胞增殖率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组、DMSO组比较,OA加药组多核细胞数有所增加。结论OA可促进hiPSC-CMs细胞结构、线粒体结构及形态的成熟,也可促进细胞多核化,并可通过调节PK同工型转换促进hiPSC-CMs的成熟。 展开更多
关键词 齐墩果酸 丙酮酸激酶 人诱导多能干细胞衍生心肌细胞 诱导多能干细胞 线粒体
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小檗碱激活SGK1保护舒尼替尼导致心肌损伤
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作者 李从欣 李雪靖 +2 位作者 郄素会 阎伟 高媛 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第2期384-390,共7页
目的在人诱导多功能干细胞衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)和新生大鼠心肌细胞(NRVMs)水平,观察血清糖皮质激素调节激酶1(SGK1)在舒尼替尼导致心肌损伤中的作用及小檗碱潜在其中的保护作用。方法采用酶联免疫吸附法检测舒尼替尼及小檗碱给药对h... 目的在人诱导多功能干细胞衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)和新生大鼠心肌细胞(NRVMs)水平,观察血清糖皮质激素调节激酶1(SGK1)在舒尼替尼导致心肌损伤中的作用及小檗碱潜在其中的保护作用。方法采用酶联免疫吸附法检测舒尼替尼及小檗碱给药对hiPSC-CMs人氨基端前脑钠素(NTproBNP)和心肌肌钙蛋白I(cTn-I)水平的影响;采用激酶活性光度法定量检测舒尼替尼及小檗碱给药对hiPSC-CMs SGK1活性的影响;免疫印迹(Western blot)检测NRVMs中SGK1的表达情况;并应用SGK1阻断剂进行SGK1阻断后检测上述指标。结果舒尼替尼和SGK1抑制剂显著升高了hiPSC-CMs的NT-proBNP水平(P<0.01),小檗碱给药激活SGK1可以显著降低NT-proBNP和cTn-I水平(P<0.01),SGK1抑制剂给药抵抗小檗碱的保护作用(P<0.01)。舒尼替尼和SGK1抑制剂显著降低hiPSC-CMs SGK1活性(P<0.01),小檗碱给药激活SGK1可以显著保护舒尼替尼导致的hiPSC-CMs SGK1活性抑制(P<0.01)。舒尼替尼和SGK1抑制剂显著降低NRVMs中SGK1蛋白表达(P<0.01),小檗碱给药激活SGK1可以显著保护舒尼替尼导致的SGK1蛋白表达下调(P<0.01)。结论舒尼替尼抑制SGK1活性导致心肌损伤,小檗碱激活SGK1具有保护作用。 展开更多
关键词 舒尼替尼 心肌损伤 人诱导多功能干细胞衍生心肌细胞 新生大鼠心肌细胞 小檗碱 血清糖皮质激素调节激酶1
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糖尿病心肌病体内与体外模型研究进展 被引量:2
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作者 刘倩 姚雨峰 +1 位作者 蔡琳 张冬卉 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第8期131-136,共6页
糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是由持续高血糖状态引起心脏结构和功能损伤的心肌病变,是糖尿病最常见的并发症,其表型独立于高血压和冠心病等心脏疾病而显著增加糖尿病患者心力衰竭的发生风险。糖尿病心肌病实验模型的开... 糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是由持续高血糖状态引起心脏结构和功能损伤的心肌病变,是糖尿病最常见的并发症,其表型独立于高血压和冠心病等心脏疾病而显著增加糖尿病患者心力衰竭的发生风险。糖尿病心肌病实验模型的开发将有助于深入研究其分子机理,进而开发糖尿病心肌病的诊疗新方案。本文总结了目前领域内常用的糖尿病心肌病动物模型和体外细胞研究模型,介绍了诱导性多能干细胞来源的人源心肌细胞糖尿病心肌病模型的优势,以期为糖尿病心肌病研究中模型的选取提供新的思路。 展开更多
关键词 糖尿病性心肌 动物模型 心肌细胞 人诱导性多能干细胞衍生心肌细胞 人工程组织心脏
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