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人血管生成素-1基因真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达
被引量：
3
1
作者
萧鸿
刘帅
+4 位作者
李群秀
张克剑
侯阳
宋慧娟
刘学政
《眼科研究》
CSCD
北大核心
2010年第9期846-850,共5页
目的构建人血管生成素-1(Ang-1)基因的真核表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中的表达,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变(DR)的血管渗漏提供实验依据。方法提取人胎盘组织中的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)...
目的构建人血管生成素-1(Ang-1)基因的真核表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中的表达,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变(DR)的血管渗漏提供实验依据。方法提取人胎盘组织中的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增Ang-1编码区序列,亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1。将pEGFP-N1-Ang-1导入UC-MSCs,然后应用含质量分数10%胎牛血清的DMEM培养基对人UC-MSCs进行培养,荧光显微镜下观察Ang-1在人UC-MSCs中的表达,Western blot法检测重组体的表达。结果 RT-PCR法成功克隆人Ang-1基因编码区序列,纯度为1.82;PCR扩增的片段长度为1.5 kb,与预期片段大小相近。双酶切鉴定法可识别重组pEGFP-N1-Ang-1转染质粒,目的基因与预期基因序列的同源性为100%。人UC-MSCs转染的pEGFP-N1/Ang-1质粒能够表达Ang-1蛋白,呈现绿色荧光。转染pEGFP-N1的人UC-MSCs和对照组人UC-MSCs均未见相应的Ang-1蛋白表达。结论成功地克隆出人的Ang-1基因并构建了真核表达载体pEGFP-N1-Ang-1,为将Ang-1基因转染至人UC-MSCs治疗DR奠定了基础。
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关键词
人血管生成素-1
PEGFP
-
N
1
pEGFP
-
N
1
-
Ang
-
1
人脐带间充质干细胞
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职称材料
题名
人血管生成素-1基因真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达
被引量：
3
1
作者
萧鸿
刘帅
李群秀
张克剑
侯阳
宋慧娟
刘学政
机构
辽宁医学院附属第一医院教务科
辽宁医学院人体解剖学教研室
高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室
出处
《眼科研究》
CSCD
北大核心
2010年第9期846-850,共5页
基金
辽宁省科学技术计划项目(2003225007)
文摘
目的构建人血管生成素-1(Ang-1)基因的真核表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中的表达,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变(DR)的血管渗漏提供实验依据。方法提取人胎盘组织中的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增Ang-1编码区序列,亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1。将pEGFP-N1-Ang-1导入UC-MSCs,然后应用含质量分数10%胎牛血清的DMEM培养基对人UC-MSCs进行培养,荧光显微镜下观察Ang-1在人UC-MSCs中的表达,Western blot法检测重组体的表达。结果 RT-PCR法成功克隆人Ang-1基因编码区序列,纯度为1.82;PCR扩增的片段长度为1.5 kb,与预期片段大小相近。双酶切鉴定法可识别重组pEGFP-N1-Ang-1转染质粒,目的基因与预期基因序列的同源性为100%。人UC-MSCs转染的pEGFP-N1/Ang-1质粒能够表达Ang-1蛋白,呈现绿色荧光。转染pEGFP-N1的人UC-MSCs和对照组人UC-MSCs均未见相应的Ang-1蛋白表达。结论成功地克隆出人的Ang-1基因并构建了真核表达载体pEGFP-N1-Ang-1,为将Ang-1基因转染至人UC-MSCs治疗DR奠定了基础。
关键词
人血管生成素-1
PEGFP
-
N
1
pEGFP
-
N
1
-
Ang
-
1
人脐带间充质干细胞
Keywords
Ang
-
1
plasmid pEGFP
-
N
1
recombinant plasmid of pEGFP
-
N
1
-
Ang
-
1
human umbilical mesenchymal stem cells
分类号
R587.2 [医药卫生—内分泌]
R774.1 [医药卫生—眼科]
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题名
作者
出处
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被引量
操作
1
人血管生成素-1基因真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达
萧鸿
刘帅
李群秀
张克剑
侯阳
宋慧娟
刘学政
《眼科研究》
CSCD
北大核心
2010
3
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