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人血清对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性检测
1
作者
谭淑敏
李杰
+4 位作者
王小飞
舒特俊
陈剑清
张耀洲
于威
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期482-487,共6页
对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在E.coli中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层...
对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在E.coli中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层析纯化后制备兔多克隆抗体;利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒vBm-pon1,并感染家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定人血清PON1在蚕体内成功表达,并获得了纯度较高的重组人血清PON1。以对氧磷为底物,对2个表达系统获得的重组人血清PON1的酶活性进行检测,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组人血清PON1的酶活性要明显高于在E.coli中表达的人血清PON1蛋白。推测家蚕杆状病毒表达系统比原核表达系统多了糖基化、磷酸化等蛋白质修饰功能。进一步试验验证家蚕幼虫表达的重组人血清PON1去糖基化后其酶活性丧失,表明糖基修饰对于维持PON1的生物学功能至关重要。
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关键词
家蚕杆状病毒表达系统
人血清对氧磷酶1
酶
活性
糖基化
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职称材料
题名
人血清对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性检测
1
作者
谭淑敏
李杰
王小飞
舒特俊
陈剑清
张耀洲
于威
机构
浙江理工大学生物化学研究所
浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期482-487,共6页
基金
国家高技术发展计划"863"项目(No.2011AA100603)
浙江省自然科学基金面上项目(No.207217)
文摘
对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)是生物体内存在的一种广谱的非专一性酯酶,在水解有机磷杀虫剂及降解神经毒剂中发挥重要作用。利用已构建的含人血清pon1基因的原核表达载体pET-28a-pon1,在E.coli中诱导表达人血清PON1,通过Ni-NTA亲和层析纯化后制备兔多克隆抗体;利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒vBm-pon1,并感染家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定人血清PON1在蚕体内成功表达,并获得了纯度较高的重组人血清PON1。以对氧磷为底物,对2个表达系统获得的重组人血清PON1的酶活性进行检测,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组人血清PON1的酶活性要明显高于在E.coli中表达的人血清PON1蛋白。推测家蚕杆状病毒表达系统比原核表达系统多了糖基化、磷酸化等蛋白质修饰功能。进一步试验验证家蚕幼虫表达的重组人血清PON1去糖基化后其酶活性丧失,表明糖基修饰对于维持PON1的生物学功能至关重要。
关键词
家蚕杆状病毒表达系统
人血清对氧磷酶1
酶
活性
糖基化
Keywords
Silkworm baculovirus expression system
Human serum paraoxonase
1
Activity analysis
Giycosylation
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人血清对氧磷酶1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及活性检测
谭淑敏
李杰
王小飞
舒特俊
陈剑清
张耀洲
于威
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014
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