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miR-556影响人脑胶质母细胞瘤细胞生长及其转录组学分析
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作者 邢丽波 柴春娥 +2 位作者 王尔鸿 王子言 陆东东 《生物学杂志》 北大核心 2025年第5期46-52,共7页
研究旨在探究miR-556对人脑胶质母细胞瘤细胞(U-87 MG)生长、基因转录水平和基因功能的影响。通过慢病毒感染U-87 MG细胞,筛选稳定过表达miR-556的细胞系;通过定量和普通RT-PCR分别验证细胞中前体miR-556(Pre-miR-556)和成熟miR-556的... 研究旨在探究miR-556对人脑胶质母细胞瘤细胞(U-87 MG)生长、基因转录水平和基因功能的影响。通过慢病毒感染U-87 MG细胞,筛选稳定过表达miR-556的细胞系;通过定量和普通RT-PCR分别验证细胞中前体miR-556(Pre-miR-556)和成熟miR-556的表达量;通过CCK-8测定细胞的体外增殖能力;通过结晶紫染色测定细胞集落形成能力;通过高通量RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术发现细胞中基因组转录水平及信号通路的改变。成功构建稳定表达miR-556的U-87 MG细胞系;与对照组(rLV)相比,实验组(rLV-miR-556)U-87 MG细胞的体外增殖能力和集落形成能力显著增加(P<0.01);与rLV组相比,rLV-mir-556组显示2028个差异基因,其中,165个基因上调表达,1863个基因下调表达;miR-556主要通过上调[STBX]HMOX1、SERPINB2、ATOH8和下调MACF1、PEG10、HIF1A[ST]等基因的转录,从而改变基因表达(转录)、跨膜运输、RNA聚合酶Ⅱ转录、翻译后蛋白的修饰、蛋白质代谢、免疫系统、疾病等信号通路。miR-556提高了人脑胶质母细胞瘤细胞的体外生长能力,影响了人脑胶质母细胞瘤细胞中基因的转录水平和功能,研究为肿瘤的防治提供基础资料。 展开更多
关键词 miR-556 人脑胶质母细胞瘤 慢病毒表达质粒 细胞增殖 转录组学
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人脑胶质母细胞瘤细胞系U87的单克隆细胞构建及异质性研究
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作者 蒋迎娣 殷莹 +7 位作者 浦浙宁 张博 龚玲丽 胡亚玲 纪丽 汪京京 张真豪 邹健 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1150-1157,共8页
目的人胶质母细胞瘤细胞细胞系U87被作为胶质母细胞瘤(GBM)异质性研究的模型,但从基因水平探讨其异质性来源的研究较少。文章旨在构建人胶质母细胞瘤细胞系U87单克隆细胞株,检测不同单克隆细胞株的表型和遗传背景差异,并探讨产生表型差... 目的人胶质母细胞瘤细胞细胞系U87被作为胶质母细胞瘤(GBM)异质性研究的模型,但从基因水平探讨其异质性来源的研究较少。文章旨在构建人胶质母细胞瘤细胞系U87单克隆细胞株,检测不同单克隆细胞株的表型和遗传背景差异,并探讨产生表型差异的分子机制。方法利用小分子荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)作为筛选标记,有限稀释法构建U87单克隆细胞株,并挑选具有典型形态特征的2株单克隆化细胞,经短串联重复序列(STR)鉴定后进行后续研究。采用CCK-8、EdU掺入法增殖实验和和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;肿瘤干细胞成球实验检测细胞成球能力;免疫荧光和CCK-8法黏附实验检测细胞黏附能力;3D侵袭实验检测细胞侵袭能力;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞对化疗药物的敏感性;转录组测序(RNA-seq)对细胞进行测序及生物信息学分析;qRT-PCR验证富集通路中代表性差异基因mRNA表达量。结果构建了形态较为均一U87单克隆细胞株CF5和G11。其中CF5小而短粗,G11大而细长。CCK-8增殖实验结果显示,CF5细胞增殖能力较U87、G11明显增强,U87较G11明显增强(P<0.001)。EdU掺入法增殖实验结果显示,CF5 EdU阳性细胞比例(0.54±0.05)较G11细胞(0.35±0.03)、U87(0.44±0.03)明显增加,U87较G11明显增强(P<0.01)。肿瘤干细胞成球实验显示,CF5干细胞成球能力较U87、G11明显增强,U87较G11明显增强(P<0.01)。免疫荧光法黏附实验显示,黏附1 h后G11黏附面积较U87、CF5明显增强,U87较CF5明显增强(P<0.001)。3D培养侵袭实验结果显示,G11细胞侵袭能力较U87、CF5明显增强,U87较CF5明显增强(P<0.05)。交互分析发现CF5相对G11和U87均下调的基因159个,均上调的基因303个;G11相对CF5和U87均下调的基因有281个,上调的基因则有116个;通路富集分析显示CF5和G11在细胞外基质相关的通路有最高的富集度,细胞外基质相关通路与肿瘤侵袭、耐药等功能表型密切相关。结论成功构建从形态、功能表型到基因背景具有显著差异的U87单克隆细胞株CF5、G11,为研究GBM异质性和基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 人脑胶质母细胞瘤细胞系U87 单克隆细胞株 肿瘤异质性 表型 转录组测序
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肾上腺素促进胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁徙和侵袭及其潜在机制
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作者 翁梅琳 王敬 +2 位作者 杜春春 许平波 钟静 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期180-186,192,共8页
目的探讨肾上腺素对胶质母细胞瘤细胞系U87MG和U251增殖、迁徙和侵袭的影响。方法用不同浓度的肾上腺素(0.1、1、10、50、100μmol/L)处理U87MG和U251胶质母细胞瘤细胞株,分别采用MTT实验、细胞划痕实验和transwell侵袭实验观察细胞的... 目的探讨肾上腺素对胶质母细胞瘤细胞系U87MG和U251增殖、迁徙和侵袭的影响。方法用不同浓度的肾上腺素(0.1、1、10、50、100μmol/L)处理U87MG和U251胶质母细胞瘤细胞株,分别采用MTT实验、细胞划痕实验和transwell侵袭实验观察细胞的增殖、迁徙和侵袭情况。所有实验均以不加肾上腺素处理的细胞为对照组。qRT-PCR、Western blot和明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达和活性。结果与空白对照相比,肾上腺素能促进U251的增殖,促进U87MG和U251的迁徙和侵袭能力,且具有剂量依赖性;β肾上腺素能受体(βadrenoreceptor,β-AR)阻滞剂普萘洛尔能抑制肾上腺素促进胶质母细胞瘤细胞迁徙和侵袭的作用;MMP-9表达和活性随着肾上腺素浓度升高而增加。结论肾上腺素能促进胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁徙和侵袭,这种效应可能和MMP-9的表达增加相关,且能被β-AR阻滞剂抑制。 展开更多
关键词 肾上腺素 迁徙 侵袭 人脑胶质母细胞瘤细胞
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