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Aumolertinib可体内外抑制人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞的增殖
被引量：
2
1
作者
李娟
王爱莲
+4 位作者
李宁
祝英泽
李坤
刘浩
高自清
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期1604-1610,共7页
目的评估新型第3代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂Aumolertinib对人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞增殖的影响,探索Aumolertinib在眼科肿瘤治疗中的应用潜力。方法不同浓度Aumolertinib(0、2、4、6、8、10μmol/L)处理MUM-2B细胞。用CCK-...
目的评估新型第3代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂Aumolertinib对人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞增殖的影响,探索Aumolertinib在眼科肿瘤治疗中的应用潜力。方法不同浓度Aumolertinib(0、2、4、6、8、10μmol/L)处理MUM-2B细胞。用CCK-8法检测Aumolertinib对MUM-2B细胞存活率的影响;细胞集落克隆形成实验检测Aumolertinib对MUM-2B细胞的增殖抑制作用;利用流式细胞分析技术检测Aumolertinib对MUM-2B细胞凋亡坏死、线粒体膜电位、活性氧、细胞周期分布的影响;建立人脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B裸鼠荷瘤模型,设置空白组,给药组(40 mg/kg),考察Aumolertinib在体内的抗肿瘤活性。结果CCK-8和细胞集落克隆形成实验的结果表明,Aumolertinib显著抑制MUM-2B细胞的增殖,并呈浓度依赖性。凋亡坏死分析结果显示,当Aumolertinib浓度增加到8μmol/L时,MUM-2B细胞的总凋亡率可达到76.65%。同时,MUM-2B细胞内ROS水平也随Aumolertinib浓度增加显著增多。此外,Aumolertinib能够有效降低MUM-2B细胞的线粒体膜电位,诱导MUM-2B细胞发生G1期周期停滞。体内研究表明,Aumolertinib有效抑制肿瘤增长,而不会使动物体质量明显减轻。结论Aumolertinib对人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞在体外、体内试验中均发挥有效的抗肿瘤作用,在脉络膜黑色素瘤的治疗方面具有潜在用途。
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关键词
人脉络膜黑色素瘤
Aumolertinib
表皮生长因子受体
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职称材料
人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1的三维培养及血管生成拟态机制的研究
被引量：
1
2
作者
高文
陈陆霞
何彦津
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2017年第9期828-831,共4页
目的通过体外三维培养人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1,观察其生成血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)时,PI3K、Eph A2蛋白的表达,探讨VM发生的可能机制。方法体外三维培养OCM-1细胞,于三维培养7 d进行过碘酸-雪夫反应(periodic acid s...
目的通过体外三维培养人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1,观察其生成血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)时,PI3K、Eph A2蛋白的表达,探讨VM发生的可能机制。方法体外三维培养OCM-1细胞,于三维培养7 d进行过碘酸-雪夫反应(periodic acid schiff reaction,PAS)染色,观察PAS阳性的环状结构的形成(即其形成VM的能力),于1 d、4 d、7 d进行PI3 K和Eph A2免疫组织化学染色并观察其结果。结果OCM-1细胞三维培养4 d,细胞大部分呈多角形,胞浆较丰富,核圆形,可见核仁,少部分肿瘤细胞长梭形,可见3~5个长梭形细胞彼此连接围成半环状结构。7 d后,肿瘤细胞几乎均变成长梭形,沿着胶原支架生长,细胞伸出长的突起,彼此之间相互接触围成环状结构。PAS染色可见瘤细胞大多呈弥散排列,肿瘤细胞模仿机体血管生成而形成瘤细胞条索并围成管道,一层细胞外基质(PAS阳性物质)围成环状结构。与培养1 d的细胞相比,培养4 d和7 d的PI3K和Eph A2蛋白表达量均明显增加(均为P<0.05),并随着时间的推移增加(7 d>4 d>1 d,P<0.05)。结论Eph A2和PI3 K可能在三维培养人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1的VM形成过程中具有重要作用。
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关键词
人脉络膜黑色素瘤
细胞
血管生成拟态
三维培养
内皮细胞受体蛋白酪氨酸激酶2
磷脂酰肌醇-3-激酶
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职称材料
乳酸脱氢酶A促进人脉络膜黑色素瘤细胞的生长
被引量：
1
3
作者
刘园园
朱晓雨
+3 位作者
吴亚更
刘莹
徐小洁
刘丹
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2018年第6期519-522,共4页
目的成功构建带有Flag标签的人乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的真核表达载体,初步检测LDHA基因对人脉络膜黑色素瘤(choroidal melanoma,CM)MUM-2B细胞生长功能的影响。方法将军事科学院传代培养的人CM系随机分为实验组和...
目的成功构建带有Flag标签的人乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的真核表达载体,初步检测LDHA基因对人脉络膜黑色素瘤(choroidal melanoma,CM)MUM-2B细胞生长功能的影响。方法将军事科学院传代培养的人CM系随机分为实验组和对照组,实验组MUM-2B细胞瞬时转染构建成功带有Flag标签的人LDHA重组质粒(Flag-LDHA),对照组MUM-2B细胞瞬时转染Flag空载质粒;以带有GST标签的Flag-LDHA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增LDHA基因,并将其插入到Flag载体,应用菌液PCR、双酶切和测序方法鉴定重组质粒,鉴定成功后瞬时转染人CM,通过Western blot鉴定其表达;CCK8法检测并绘制生长曲线。结果PCR技术扩增得到长约1000 bp的LDHA基因的编码区序列,并成功克隆至Flag载体上;与对照组相比,实验组菌液PCR结果为阳性,双酶切鉴定结果为切开两条长约4000 bp的Flag载体和1000 bp的LDHA基因条带,测序鉴定结果为插入的序列与LDHA基因的编码序列完全一致。Western blot检测结果显示,与对照组相比,实验组MUM-2B细胞成功表达LDHA蛋白;CCK8法检测结果显示,实验组MUM-2B细胞较对照组MUM-2B细胞生长快。结论成功构建了Flag-LDHA真核表达载体,并发现LDHA基因能够促进人CM MUM-2B细胞的生长,为研究LDHA在人CM的发生发展中的功能奠定基础。
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关键词
乳酸脱氢酶A
真核表达
人脉络膜黑色素瘤
MUM-2B细胞
克隆
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职称材料
题名
Aumolertinib可体内外抑制人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞的增殖
被引量：
2
1
作者
李娟
王爱莲
李宁
祝英泽
李坤
刘浩
高自清
机构
蚌埠医学院第一附属医院眼科
蚌埠医学院药学院//安徽省生化药物工程技术研究中心
安徽科技学院生命与健康科学学院生物医药与健康研究院
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期1604-1610,共7页
基金
蚌埠医学院转化医学重点专项(BYTM2019011)
蚌埠医学院校级大学生创新创业训练计划项目(bydc2021074)。
文摘
目的评估新型第3代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂Aumolertinib对人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞增殖的影响,探索Aumolertinib在眼科肿瘤治疗中的应用潜力。方法不同浓度Aumolertinib(0、2、4、6、8、10μmol/L)处理MUM-2B细胞。用CCK-8法检测Aumolertinib对MUM-2B细胞存活率的影响;细胞集落克隆形成实验检测Aumolertinib对MUM-2B细胞的增殖抑制作用;利用流式细胞分析技术检测Aumolertinib对MUM-2B细胞凋亡坏死、线粒体膜电位、活性氧、细胞周期分布的影响;建立人脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B裸鼠荷瘤模型,设置空白组,给药组(40 mg/kg),考察Aumolertinib在体内的抗肿瘤活性。结果CCK-8和细胞集落克隆形成实验的结果表明,Aumolertinib显著抑制MUM-2B细胞的增殖,并呈浓度依赖性。凋亡坏死分析结果显示,当Aumolertinib浓度增加到8μmol/L时,MUM-2B细胞的总凋亡率可达到76.65%。同时,MUM-2B细胞内ROS水平也随Aumolertinib浓度增加显著增多。此外,Aumolertinib能够有效降低MUM-2B细胞的线粒体膜电位,诱导MUM-2B细胞发生G1期周期停滞。体内研究表明,Aumolertinib有效抑制肿瘤增长,而不会使动物体质量明显减轻。结论Aumolertinib对人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞在体外、体内试验中均发挥有效的抗肿瘤作用,在脉络膜黑色素瘤的治疗方面具有潜在用途。
关键词
人脉络膜黑色素瘤
Aumolertinib
表皮生长因子受体
Keywords
human choroidal melanoma
aumolertinib
epidermal growth factor receptor
分类号
R739.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1的三维培养及血管生成拟态机制的研究
被引量：
1
2
作者
高文
陈陆霞
何彦津
机构
天津中医药大学第一附属医院眼科
天津市眼科医院
天津医科大学眼科医院
出处
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2017年第9期828-831,共4页
文摘
目的通过体外三维培养人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1,观察其生成血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)时,PI3K、Eph A2蛋白的表达,探讨VM发生的可能机制。方法体外三维培养OCM-1细胞,于三维培养7 d进行过碘酸-雪夫反应(periodic acid schiff reaction,PAS)染色,观察PAS阳性的环状结构的形成(即其形成VM的能力),于1 d、4 d、7 d进行PI3 K和Eph A2免疫组织化学染色并观察其结果。结果OCM-1细胞三维培养4 d,细胞大部分呈多角形,胞浆较丰富,核圆形,可见核仁,少部分肿瘤细胞长梭形,可见3~5个长梭形细胞彼此连接围成半环状结构。7 d后,肿瘤细胞几乎均变成长梭形,沿着胶原支架生长,细胞伸出长的突起,彼此之间相互接触围成环状结构。PAS染色可见瘤细胞大多呈弥散排列,肿瘤细胞模仿机体血管生成而形成瘤细胞条索并围成管道,一层细胞外基质(PAS阳性物质)围成环状结构。与培养1 d的细胞相比,培养4 d和7 d的PI3K和Eph A2蛋白表达量均明显增加(均为P<0.05),并随着时间的推移增加(7 d>4 d>1 d,P<0.05)。结论Eph A2和PI3 K可能在三维培养人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1的VM形成过程中具有重要作用。
关键词
人脉络膜黑色素瘤
细胞
血管生成拟态
三维培养
内皮细胞受体蛋白酪氨酸激酶2
磷脂酰肌醇-3-激酶
Keywords
human choroidal melanoma cell line
vasculogenic inimicry
3-dimen-tional culture
EphA2
PB K
分类号
R774 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
乳酸脱氢酶A促进人脉络膜黑色素瘤细胞的生长
被引量：
1
3
作者
刘园园
朱晓雨
吴亚更
刘莹
徐小洁
刘丹
机构
锦州医科大学附属第一医院
寿县县医院
军事医学科学院
出处
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2018年第6期519-522,共4页
基金
国家自然科学基金资助(编号:81670602
81472589)~~
文摘
目的成功构建带有Flag标签的人乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的真核表达载体,初步检测LDHA基因对人脉络膜黑色素瘤(choroidal melanoma,CM)MUM-2B细胞生长功能的影响。方法将军事科学院传代培养的人CM系随机分为实验组和对照组,实验组MUM-2B细胞瞬时转染构建成功带有Flag标签的人LDHA重组质粒(Flag-LDHA),对照组MUM-2B细胞瞬时转染Flag空载质粒;以带有GST标签的Flag-LDHA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增LDHA基因,并将其插入到Flag载体,应用菌液PCR、双酶切和测序方法鉴定重组质粒,鉴定成功后瞬时转染人CM,通过Western blot鉴定其表达;CCK8法检测并绘制生长曲线。结果PCR技术扩增得到长约1000 bp的LDHA基因的编码区序列,并成功克隆至Flag载体上;与对照组相比,实验组菌液PCR结果为阳性,双酶切鉴定结果为切开两条长约4000 bp的Flag载体和1000 bp的LDHA基因条带,测序鉴定结果为插入的序列与LDHA基因的编码序列完全一致。Western blot检测结果显示,与对照组相比,实验组MUM-2B细胞成功表达LDHA蛋白;CCK8法检测结果显示,实验组MUM-2B细胞较对照组MUM-2B细胞生长快。结论成功构建了Flag-LDHA真核表达载体,并发现LDHA基因能够促进人CM MUM-2B细胞的生长,为研究LDHA在人CM的发生发展中的功能奠定基础。
关键词
乳酸脱氢酶A
真核表达
人脉络膜黑色素瘤
MUM-2B细胞
克隆
Keywords
lactate dehydrogenase A
eukaryotic expression
human choroidal melanoma MUM-2B cells
clone
分类号
R773.4 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Aumolertinib可体内外抑制人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞的增殖
李娟
王爱莲
李宁
祝英泽
李坤
刘浩
高自清
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1的三维培养及血管生成拟态机制的研究
高文
陈陆霞
何彦津
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2017
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
乳酸脱氢酶A促进人脉络膜黑色素瘤细胞的生长
刘园园
朱晓雨
吴亚更
刘莹
徐小洁
刘丹
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2018
1
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职称材料
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