COX-2基因对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长及Notch信号通路的影响及其作用机制 被引量：8

1

作者 郭彩霞 于洪涛 +1 位作者 石红梅 商玉立 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期54-59,共6页

目的探讨抑制环氧合酶-2(COX-2)基因表达对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5活力、胶原合成和转化及Notch信号通路的影响。方法将MRC-5细胞分为对照组、TGF-β1组、NC组和COX-2-siRNA组,各组细胞处理48 h,Western blotting检测COX-... 目的探讨抑制环氧合酶-2(COX-2)基因表达对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5活力、胶原合成和转化及Notch信号通路的影响。方法将MRC-5细胞分为对照组、TGF-β1组、NC组和COX-2-siRNA组,各组细胞处理48 h,Western blotting检测COX-2、胶原合成相关的COL-Ⅰ和COL-Ⅲ、 EMT标志物α-SMA及Notch信号通路受体Notch1及配体Jagged1的蛋白表达;CCK8法检测各组细胞活力。结果 TGF-β1组COX-2的表达显著高于对照组,COX-2-siRNA组COX-2的表达显著低于TGF-β1组(P<0.05),NC组COX-2的表达与TGF-β1组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,TGF-β1组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与TGF-β1组比较,COX-2-siRNA组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论抑制COX-2基因表达中可能通过降低MRC-5细胞活力、抑制细胞胶原合成和转化,并下调Notch信号通路,从而对肺纤维化起保护作用。 展开更多

关键词 COX-2基因 肺间质纤维化 人胚肺成纤维细胞 增殖 NOTCH信号通路

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槲皮素抑制人胚肺成纤维细胞ERK1/2的激活和PDGF的表达 被引量：3

2

作者 彭海兵 张娜 +3 位作者 刘晓光 王建行 赵霞 刘燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期42-44,47,共4页

目的探讨槲皮素对人胚肺成纤维细胞(HELF)表达血小板源性生长因子(PDGF)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的调节作用。方法以支气管肺泡灌洗法收集硅肺患者肺泡巨噬细胞(AM),在体外用含有SiO2(50μg/mL)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培... 目的探讨槲皮素对人胚肺成纤维细胞(HELF)表达血小板源性生长因子(PDGF)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的调节作用。方法以支气管肺泡灌洗法收集硅肺患者肺泡巨噬细胞(AM),在体外用含有SiO2(50μg/mL)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养18 h,收集AM上清液,加入不同浓度槲皮素。用组织贴块法获取培养HELF,将HELF分为5组:空白对照组、AM组、SiO2联合AM处理组、槲皮素(10、20、40)μmol/L组。WST-1法检测HELF增殖情况,Western blot法检测HELF中PDGF的表达,免疫细胞化学法检测HELF中p-ERK1/2的表达。结果与SiO2联合AM处理组、AM组相比,各浓度槲皮素组都能抑制HELF增殖,且随浓度增大抑制作用增强,差异有统计学意义(P<0.01)。各种浓度槲皮素均能降低HELF中PDGF的表达、减少HELF中p-ERK1/2的量,呈现剂量-效应关系,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论槲皮素可以抑制人胚肺成纤维细胞PDGF表达和ERK1/2的激活。 展开更多

关键词 槲皮素 SiO 血小板源性生长因子 细胞外调节蛋白激酶1 2 肺泡巨噬细胞 人胚肺成纤维细胞

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敲减HMGA2基因抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长及胶原合成 被引量：5

3

作者 李鹏 刘咏梅 刘振华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1648-1653,共6页

目的:探讨敲减高迁移率族蛋白A2( HMGA2 )基因表达对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞活力、凋亡、胶原合成和氧化应激的影响。方法:实验分为空白组、TGF-β1组、阴性转染对照组和HMGA2 siRNA(si-HMGA2)组。Western blot... 目的:探讨敲减高迁移率族蛋白A2( HMGA2 )基因表达对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞活力、凋亡、胶原合成和氧化应激的影响。方法:实验分为空白组、TGF-β1组、阴性转染对照组和HMGA2 siRNA(si-HMGA2)组。Western blot 检测HMGA2、AKT和p-AKT蛋白水平;MTT法及流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率;RT-qPCR检测Ⅰ型胶原蛋白(COL -Ⅰ)和COL-Ⅲ的mRNA表达;DCFH-DA探针检测细胞活性氧簇(ROS)的含量。结果:与空白组比较,TGF-β1组HMGA2和p-AKT的蛋白水平、细胞活力及COL -Ⅰ和COL-Ⅲ的mRNA表达均明显升高,细胞凋亡率及ROS水平则明显降低( P <0.05);与TGF-β1组比较,si-HMGA2组HMGA2和p-AKT的蛋白水平、细胞活力及COL -Ⅰ和COL-Ⅲ的mRNA表达均明显降低,细胞凋亡率及ROS水平则明显升高( P <0.05)。结论:敲减HMGA2 基因可抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长和胶原合成,促进细胞凋亡及ROS产生,其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多

关键词 人胚肺成纤维细胞 HMGA2 基因 转化生长因子β1 细胞凋亡 PI3K/AKT信号通路

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黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究 被引量：4

4

作者 刘裕 孙晓莉 +2 位作者 乐效翚 张燕冬 魏新华 《首都医学院学报》 1993年第4期265-275,共11页

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代... 以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代。扫描电镜下可见细胞随增龄而由扁平长梭形变为圆球形,伪足、微绒毛递增,细胞胞体变小,细胞凹陷增多且逐步加深。透射电镜显示细胞增龄变化主要为细胞核逐渐变小,核进行性凹陷加深,核膜从部分融合到全部崩解;异染色质渐增,而常染色质递减;核仁变小且疏松;线粒体减少,嵴少,基质凝聚,肿胀,空泡化;粗面内质网减少,脱粒,游离核糖核蛋白体增多;高尔基复合体减少,其囊泡排列紊乱且肿胀;溶酶体递减;脂褐质递增.黄芪组细胞衰老过程中细胞器的变化与上述非黄芪组细胞的衰老变化规律基本相同;但其改变程度显然较轻,变化速率相对缓慢.特别是黄芪组细胞之高尔基复合体、中心体特别发达,虽细胞已衰老而它们却不甚衰老.研究证明黄芪具抗衰延寿的良好效应,以其做为抗衰老延寿命的药物值得高度重视和大力开发. 展开更多

关键词 黄芪 胚肺 二倍体 成纤维细胞 衰老

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蜂毒素对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及其机制探讨 被引量：3

5

作者 于明哲 李俊 +3 位作者 黄成 徐涛 吴小琴 李小枫 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期918-922,共5页

目的研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1mRNA的表达变化;Western blot法检... 目的研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1mRNA的表达变化;Western blot法检测Cyclin D1、CDK4、p21及E2F-1蛋白表达。结果与对照组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降;同时Western blot结果提示蜂毒素(1,2,4 mg.L-1)可以明显降低Cyclin D1、CDK4及E2F-1表达,而上调p21表达。结论蜂毒素能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与干扰该细胞G0/G1期相关基因的转录相关且抑制Cyclin D1/E2F信号转导。 展开更多

关键词 蜂毒素 人胚肺成纤维细胞 增殖抑制 增殖 CYCLIN D1 E2F

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p38MAPK信号通路在人胚肺成纤维细胞表达Ⅰ型胶原中的调控作用 被引量：3

6

作者 彭海兵 王献华 冯莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期820-822,共3页

目的：探讨p38MAPK信号通路在调控人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖和Ⅰ型胶原表达中的作用。方法：收集矽肺患者肺泡巨噬细胞（AM），在体外用含有SiO2的DMEM培养液和不含SiO2的DMEM培养液培养18h，然后收集培养的AM上清液。用该上清培养H... 目的：探讨p38MAPK信号通路在调控人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖和Ⅰ型胶原表达中的作用。方法：收集矽肺患者肺泡巨噬细胞（AM），在体外用含有SiO2的DMEM培养液和不含SiO2的DMEM培养液培养18h，然后收集培养的AM上清液。用该上清培养HELF，WST-1法检测HELF增殖情况，用免疫细胞化学法检测HELF中Ⅰ型胶原的表达。结果：经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达（平均A值为0．304±0．032），与空白对照组（平均4值为0．153±0.021）、对照组（平均吸光度值为0．213±0．021）比较增加，差异有统计学意义（P〈0．01）；预处理组加入了10μmol／L p38 MAPK特异性抑制剂SB203580后，HELF增殖能力和Ⅰ型胶原的表达下降（平均A值为0．176±0．020），与处理组相比差异明显（P〈0．01）。结论：经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达，p38MAPK信号通路在此过程中起重要的调控作用。 展开更多

关键词 SIO2 P38MAPK 肺纤维化 肺泡巨噬细胞 人胚肺成纤维细胞 Ⅰ型胶原

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骨形成蛋白-2基因转染对成纤维细胞表型影响的实验研究 被引量：2

7

作者 王磊 刘少华 +2 位作者 张梅 曲迅 魏奉才 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期257-260,共4页

目的探讨腺病毒载体介导的骨形成蛋白-2(Ad-BMP-2)基因转染人胚肺成纤维细胞(HELFs)后,对HELFs的表型特别是矿化能力的影响。方法原代培养HELFs,并用Ad-BMP-2进行转染。观察转染前后HELFs的形态学变化;用四唑盐比色法、碱性磷酸酶染色... 目的探讨腺病毒载体介导的骨形成蛋白-2(Ad-BMP-2)基因转染人胚肺成纤维细胞(HELFs)后,对HELFs的表型特别是矿化能力的影响。方法原代培养HELFs,并用Ad-BMP-2进行转染。观察转染前后HELFs的形态学变化;用四唑盐比色法、碱性磷酸酶染色、蛋白印迹以及体外矿化实验,检测转染BMP-2基因后HELFs增殖活性、碱性磷酸酶活性、BMP-2蛋白表达和矿化能力的变化。结果HELFs经Ad-BMP-2转染后,胞体变大,由单一细长梭形转变为多种形态,由单层生长变为复层生长;转染后HELFs增殖受到明显抑制;碱性磷酸酶染色见大部分细胞呈现阳性反应;蛋白印迹检测到明显的BMP-2蛋白条带;细胞经茜素红S染色后出现桔红色的矿化结节。结论经Ad-BMP-2转染后,HELFs向成骨细胞表型转变,具有了矿化能力。 展开更多

关键词 骨形成蛋白-2 腺病毒载体 人胚肺成纤维细胞

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SIRT1蛋白可延缓人胚肺成纤维细胞衰老

8

作者 李倩 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期254-254,共1页

关键词 肺成纤维细胞 细胞衰老 同源蛋白 人胚肺 延缓 SIR2 应激状态 去乙酰化酶

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人成纤维细胞转录因子Sp1Sp3对p16^(INK4a)基因的调控 被引量：4

9

作者 吴军峰 童坦君 张宗玉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期88-93,共6页

p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5... p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5个GC盒 (分别命名为GC Ⅰ～GC Ⅴ ) .将上述片段插入到荧光素酶报告载体pGL3 Basic ,分别对 5个GC盒进行点突变后转染人胚肺二倍体成纤维细胞 (2BS)发现 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ位点的突变体显著下调p16 INK4a启动子的活性 ,而Ⅲ、Ⅴ位点突变体无明显作用 .电泳迁移率变动分析 (EMSA)证实 ,GC Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅳ能与转录因子Sp1和Sp3结合 ,而且结合条带可被转录因子Sp1和Sp3的抗体所拮抗 .共转染Sp1有助于增加启动子的活性 ,而共转染Sp3则有较弱的抑制作用 ,证明p16 INK4a的转录受到Sp1与Sp3的调控 . 展开更多

关键词 人成纤维细胞转录因子Sp1/Sp3 人胚肺二倍体成纤维细胞(2bs) 电泳迁移率变动分析(EMSA) 细胞周期蛋白依赖激酶(cdk)

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有丝分裂诱导基因6(MIG-6)可诱导人成纤维细胞发生提前衰老

10

作者 赵林 卓德祥 毛泽斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期918-922,共5页

年老细胞许多基因表达发生变化,其中有些基因的表达可以诱导成纤维细胞早衰.癌基因诱导的衰老(oncogene-induced senescence,OIS)是由一些连续癌症基因的信号,以阻止细胞增殖造成的反应.有丝分裂诱导基因6(mitogen-inducible gene-6,MIG... 年老细胞许多基因表达发生变化,其中有些基因的表达可以诱导成纤维细胞早衰.癌基因诱导的衰老(oncogene-induced senescence,OIS)是由一些连续癌症基因的信号,以阻止细胞增殖造成的反应.有丝分裂诱导基因6(mitogen-inducible gene-6,MIG-6)是一个抑癌基因,是ErbB RTK通路的负调控因子,抑制肿瘤细胞增殖.本文以人胚肺二倍体成纤维细胞为对象,研究MIG-6蛋白在细胞衰老中的作用.通过Western印迹发现,在老年细胞中MIG-6表达升高.利用逆转录病毒载体将MIG-6基因转入年轻的人胚肺二倍体成纤维细胞中,通过Western印迹方法检测是否过表达MIG-6,然后通过SA-β-gal染色检测其阳性率,发现转染MIG-6基因后的成纤维细胞SA-β-gal染色率明显高于对照组,生长缓慢.实验结果证实,MIG-6蛋白可以诱导人二倍体成纤维细胞提前衰老. 展开更多

关键词 有丝分裂诱导基因6(MIG-6) 细胞衰老 人胚肺二倍体成纤维细胞

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H_2O_2诱导的2BS早老细胞中自噬体增多 被引量：2

11

作者 谢步善 韩秀丽 +3 位作者 陈丽婷 何维清 白俊海 毛泽斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期753-758,共6页

自噬在细胞复制性衰老中起着重要的作用.然而,早老细胞中的自噬现象基本无相关的报道.本文通过外源性过氧化氢(H2O2)的诱导,构建人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞)早老模型.首先,通过SA-β-gal染色,验证细胞早老;从形态学和特异标志分子... 自噬在细胞复制性衰老中起着重要的作用.然而,早老细胞中的自噬现象基本无相关的报道.本文通过外源性过氧化氢(H2O2)的诱导,构建人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞)早老模型.首先,通过SA-β-gal染色,验证细胞早老;从形态学和特异标志分子及雷帕霉素作用的靶位点(mTOR)信号通路不同角度检测自噬的变化,其中形态学检测包括丹(磺)酰戊二胺(MDC)自噬分子定量法及电镜自噬超微结构的观察;特异标志分子LC3的检测包括GFP-LC3自噬定位法和免疫印迹法检测LC3;及检测mTOR信号通路下游激酶p70S6蛋白的表达变化.结果表明,过氧化氢诱导的早老细胞中自噬体相对年轻细胞明显增多,且具有保护早老细胞的作用. 展开更多

关键词 自噬 人胚肺二倍体成纤维细胞 早老 过氧化氢

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钩藤散对衰老细胞增殖的影响 被引量：1

12

作者 黄厚才 钟荣铃 杨德功 《中兽医医药杂志》 2009年第6期28-29,共2页

关键词 细胞增殖 防衰老 钩藤 成纤维细胞 调控作用 生活水 二倍体 人胚肺

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PKIB抑制PKA活性调节细胞衰老 被引量：1

13

作者 韩秀丽 陈丽婷 +2 位作者 谢步善 白俊海 毛泽斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1041-1046,共6页

人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂(PKIB)是一种新的耐热蛋白.实验证明,PKIB对PKA催化亚单位具有抑制作用.为研究PKIB在细胞衰老中的功能,以年轻和年老人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞株)为实验对象,通过实时-PCR发现,在年老细胞中,PKIB表达... 人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂(PKIB)是一种新的耐热蛋白.实验证明,PKIB对PKA催化亚单位具有抑制作用.为研究PKIB在细胞衰老中的功能,以年轻和年老人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞株)为实验对象,通过实时-PCR发现,在年老细胞中,PKIB表达高于年轻细胞;用PKA活化剂处理年轻和年老细胞,结果显示,在年老细胞中PKA活性变化较年轻细胞小.通过免疫共沉淀实验证实,在年老细胞中,PKIB与PKA催化亚单位结合较年轻细胞中多;进一步通过在年轻细胞中过表达PKIB,检测细胞PKA活性,发现PKA活性明显降低,进一步证实了在人胚肺二倍体成纤维细胞中PKIB对PKA活性的抑制作用;利用Western实验结果证实,PKA催化亚单位在年轻细胞中的表达高于年老细胞.以上结果证明,在2BS细胞中,PKA活性受PKIB的抑制;这种抑制作用与细胞的衰老有一定的关联作用. 展开更多

关键词 人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂(PKIB) 细胞衰老 PKA 人胚肺二倍体成纤维细胞

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益气养阴法及其组方抗细胞衰老的实验研究

14

作者 唐新征 张炜宁 何芝 《海南医学院学报》 CAS 2010年第8期960-963,共4页

目的:研究益气养阴法及其组方对体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为中药组、维生素E组、生理盐水组,采用益气养阴中药、维生素E胶丸、生理盐水分别灌胃3组大鼠,提取含药血清,将提取的血清培养... 目的:研究益气养阴法及其组方对体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为中药组、维生素E组、生理盐水组,采用益气养阴中药、维生素E胶丸、生理盐水分别灌胃3组大鼠,提取含药血清,将提取的血清培养二倍体人胚肺成纤维细胞(MRC-5)。从第28代开始在培养液中加入10%含药血清培养细胞,观察细胞形态、细胞群体倍增曲线、细胞传代次数、细胞生长曲线情况,并进行组间对比分析。结果:中药组与维生素E组及生理盐水组比较,中药组细胞开始出现衰老的时间及细胞死亡的时间明显延迟,差异有统计学意义(P<0.01);用含药血清培养后,中药组细胞密度较维生素E组及生理盐水组明显增高(P<0.01);中药组细胞传代代数与维生素E组比较差异有统计学意义(P<0.05);而生理盐水组细胞传代代数,明显低于中药组及维生素E组(P<0.01)。结论:益气养阴中药组方可以显著延长体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞的寿命,同时能增强衰老细胞的增殖分裂能力,从而延缓细胞的衰老。 展开更多

关键词 益气养阴 二倍体 人胚肺成纤维细胞 衰老

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