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生长抑素类似物诱导人胆管癌SK-ChA-1细胞调亡及调亡相关基因表达的研究
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作者 陈华 何振平 +1 位作者 马宽生 杨忠 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1444-1446,共3页
目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)抑制人胆管癌生长时对SK ChA 1细胞调亡调控基因bcl 2和bax的作用。方法 用DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测AnnexinV标记凋亡细胞技术研究SMS诱导细胞凋亡的情况 ;用免疫组化和原位杂交分析SM... 目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)抑制人胆管癌生长时对SK ChA 1细胞调亡调控基因bcl 2和bax的作用。方法 用DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测AnnexinV标记凋亡细胞技术研究SMS诱导细胞凋亡的情况 ;用免疫组化和原位杂交分析SMS凋亡调控基因bcl 2和bax的影响。结果 SMS处理SK ChA 1细胞后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞增多 ,DNA凝胶电泳显示典型的凋亡梯状图谱 ,同时SMS可使细胞bcl 2蛋白表达下降 ,使bax蛋白和mRNA表达升高。结论 SMS能诱导SK ChA 1细胞发生凋亡 ,bax和bcl 2凋亡基因介导了SMS对SK ChA 展开更多
关键词 生长抑素 胆管癌 sk-cha-1细胞 细胞凋亡 基因表达
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生长抑素类似物对胆管癌SK-ChA-1细胞株及其相关基因表达的影响
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作者 陈华 何振平 +1 位作者 马宽生 杨忠 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期598-600,共3页
目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995抑制人胆管癌增殖时对SK ChA 1细胞细胞周期及cyclinD1 和p16蛋白的影响。方法 采用血清饥饿法将SK ChA 1细胞同步化 ,同步化释放后SMS2 0 1 995处理 48h收取不同时相细胞 ,以流式细胞仪 (flowcyt... 目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995抑制人胆管癌增殖时对SK ChA 1细胞细胞周期及cyclinD1 和p16蛋白的影响。方法 采用血清饥饿法将SK ChA 1细胞同步化 ,同步化释放后SMS2 0 1 995处理 48h收取不同时相细胞 ,以流式细胞仪 (flowcytometer)分析细胞周期相分布 ;并同时用免疫组化和原位杂交检测cyclinD1 和p16基因表达水平。结果 SMS处理SK ChA 1细胞后 6、12h可抑制SK ChA 1细胞经血刺激由G0 G1 进入S期。CyclinD1 蛋白表达在SMS处理SK ChA 1细胞后 6h明显减弱。p16蛋白在细胞周期各时相呈稳定性低表达。SK ChA 1细胞cyclinD1 和p16mRNA各时相表达无明显变化。结论 SMS诱导的cyclinD1 蛋白量降低可能与SMS干扰细胞G1 S期转换 ,阻遏SK ChA 展开更多
关键词 生长抑素 人胆管癌sk-cha-1细胞 细胞周期 基因表达
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FDCSP对胆管癌预后和细胞增殖、细胞周期相关蛋白表达的影响
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作者 王志清 姚明辰 +2 位作者 李赫阳 姚晓含 王发展 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期526-530,共5页
目的:探讨滤泡树突状细胞分泌蛋白(FDCSP)对胆管癌预后和细胞增殖、细胞周期相关蛋白表达的影响。方法:基于癌症基因组图谱(TCGA)的TCGA-CHOL数据集分析FDCSP mRNA在胆管癌与癌旁正常组织中表达的差异。采用免疫组化法检测9例胆管癌与... 目的:探讨滤泡树突状细胞分泌蛋白(FDCSP)对胆管癌预后和细胞增殖、细胞周期相关蛋白表达的影响。方法:基于癌症基因组图谱(TCGA)的TCGA-CHOL数据集分析FDCSP mRNA在胆管癌与癌旁正常组织中表达的差异。采用免疫组化法检测9例胆管癌与癌旁正常组织中FDCSP蛋白的表达。使用R软件绘制FDCSP高表达(n=17)与低表达(n=18)胆管癌患者的生存曲线并行Log-rank检验。利用脂质体介导的siRNA转染构建体外敲低FDCSP基因的胆管癌细胞(HuCCT-1和CCLP1),采用RT-qPCR和Western blot法检测FDCSP的表达,采用克隆形成和CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CCND1)、细胞周期蛋白E1(CCNE1)、P27、P21的表达。结果:胆管癌组织中FDCSP mRNA的表达高于癌旁正常组织。胆管癌组织中FDCSP蛋白的表达高于癌旁正常组织[(10.69±2.18)%vs(65.07±3.40)%,P<0.001]。FDCSP基因高表达的胆管癌患者预后较差(P<0.001)。敲低FDCSP基因后,FDCSP mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05);细胞增殖能力和克隆形成数下降(P<0.05);CCND1、CCNE1蛋白的表达下调,P27、P21蛋白的表达上调(P<0.05)。结论:FDCSP基因高表达的胆管癌患者预后较差;敲低FDCSP可能通过调控细胞周期相关蛋白抑制胆管癌细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 胆管癌 滤泡树突状细胞分泌蛋白 预后 HuCCT-1细胞 CCLP1细胞 细胞增殖 细胞周期
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IDH1基因在肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其初步机制 被引量:1
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作者 林美佳 雷宇清 +3 位作者 叶洲杰 朱丽萍 王心睿 黄雄飞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期194-203,共10页
目的探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在肝内胆管癌(iCCA)细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其可能的分子机制。方法采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IDH1基因敲除的HuCCT1细胞(HuCCT1^(IDH1-/-));CCK-8法和克隆形成实验检测IDH1野生型HuCCT1(Hu... 目的探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在肝内胆管癌(iCCA)细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其可能的分子机制。方法采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IDH1基因敲除的HuCCT1细胞(HuCCT1^(IDH1-/-));CCK-8法和克隆形成实验检测IDH1野生型HuCCT1(HuCCT1^(WT))细胞和HuCCT1^(IDH1-/-)细胞的增殖能力;细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。生物信息学方法分析上述两种HuCCT1细胞的转录组测序结果,Western blotting验证转录组信息通路相关蛋白的表达。结果与HuCCT1细胞比较,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞增殖和克隆形成数目明显减少(P<0.05),阻滞在G_(2)/M期细胞的比例明显增加(P<0.01),划痕愈合率明显降低(P<0.01),迁移细胞数目(P<0.001)和侵袭细胞数目(P<0.05)明显减少;q RT-PCR检测结果显示,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞IDH1、Vimentin、MMP-9和调控G_(2)/M期增殖相关基因Cyclin A2、Cyclin B1及CDK1 mRNA表达水平降低(P<0.05),编码E-cadherin的CDH1 mRNA表达水平升高(P<0.01);Western blotting检测结果显示,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞中E-cadherin表达水平升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin及MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。转录组测序结果显示,HuCCT1^(WT)与HuCCT1^(IDH1-/-)存在1476个差异表达基因(DEGs);基因本体论(GO)分析显示上述DEGs显著富集在炎症反应、细胞信号转导和细胞代谢等生物学过程;KEGG通路分析显示上述DEGs显著富集在Wnt、MAPK、Rap1、Hippo、TNF等与肿瘤细胞增殖和侵袭转移密切相关的信号通路。Western blotting验证结果显示,与HuCCT1^(WT)比较,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞Wnt信号通路的Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论IDH1基因参与调控iCCA细胞HuCCT1的迁移、侵袭及EMT过程,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 肝内胆管癌 异柠檬酸脱氢酶1 细胞迁移 细胞侵袭 转录组
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CCK对胆管癌细胞增殖及P21^(WAF1)、P27^(KIP1)基因表达的影响 被引量:1
5
作者 马宽生 罗昆仑 +2 位作者 何振平 王曙光 董家鸿 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期93-95,共3页
目的 探讨胆囊收缩素 (Cholecystokinin ,CCK)促进胆管癌细胞增殖的可能机制。方法 采用细胞增殖计数法及流式细胞仪分析CCK对胆管癌细胞生长、增殖及细胞周期的影响 ,RT PCR、Western印迹法检测CCK对P2 1WAF1 、P2 7KIP1 基因表达的... 目的 探讨胆囊收缩素 (Cholecystokinin ,CCK)促进胆管癌细胞增殖的可能机制。方法 采用细胞增殖计数法及流式细胞仪分析CCK对胆管癌细胞生长、增殖及细胞周期的影响 ,RT PCR、Western印迹法检测CCK对P2 1WAF1 、P2 7KIP1 基因表达的影响。结果 CCK具有显著促进无血清培养的胆管癌细胞的生长和增殖 ,加速细胞周期的进程 ,P2 1WAF1 、P2 7KIP1 mRNA和蛋白水平表达明显降低。结论 CCK促进胆管癌细胞增殖可能与下调细胞周期相关蛋白P2 1WAF1 、P2 7KIP1 展开更多
关键词 CCK P21^WAF1 P27^KIP1 细胞周期 胆管癌 细胞增殖
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反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响
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作者 左石 邹声泉 +4 位作者 刘民锋 董泾青 郭伟 罗剑 徐立宁 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-9,共5页
目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑... 目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。 展开更多
关键词 DNMT1基因 DNMT3b基因 反义RNA 胆管癌 DNA甲基化 细胞凋亡
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生长抑素类似物诱导人胆管癌细胞株凋亡及对胞内游离钙的影响 被引量:2
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作者 陈华 何振平 +1 位作者 马宽生 王曙光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期588-590,共3页
目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长 ,以及与细胞内游离钙的关系。方法 采用人胆管癌细胞系SK ChA 1,应用MMT比色法 ,AnnexinV FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等方法进行检测和... 目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长 ,以及与细胞内游离钙的关系。方法 采用人胆管癌细胞系SK ChA 1,应用MMT比色法 ,AnnexinV FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等方法进行检测和观察。结果 在SMS作用下SK ChA 1细胞生长受抑制。SMS处理SK ChA 1细胞后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞增多。细胞凋亡的同时细胞内游离钙浓度升高。结论 SMS可能通过诱导SK ChA 1细胞 [Ca2 + ]i依赖性细胞凋亡 ,抑制胆管癌生长。 展开更多
关键词 生长抑素 人胆管癌sk-cha-1细胞 细胞凋亡 细胞内游离钙
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circ_0000615通过靶向miR-432-5p调控胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭
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作者 关沧海 王海存 +3 位作者 于少博 高欣 姜兴明 孙东升 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期527-533,共7页
目的:探讨circ_0000615在胆管癌细胞中的表达及其对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响和可能的调控机制。方法:通过qPCR检测circ_0000615在正常胆管上皮HIBEC细胞和胆管癌CCLP-1、QBC939、TFK-1和RBE细胞中的表达水平。双荧光素酶... 目的:探讨circ_0000615在胆管癌细胞中的表达及其对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响和可能的调控机制。方法:通过qPCR检测circ_0000615在正常胆管上皮HIBEC细胞和胆管癌CCLP-1、QBC939、TFK-1和RBE细胞中的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000615与miR-432-5p的靶向关系。将si-NC、si-circ_0000615(si-circ-1、si-circ-2)、inhibitor-NC和inhibitor-miR-432-5p转染至CCLP-1和QBC939细胞,转染细胞分为si-NC组、si-circ-1组、si-circ-2组、si-NC+inh-NC组、si-NC+inh-miR-432-5p组和si-circ-1+inh-miR-432-5p组,通过CCK-8、EdU和Transwell实验检测各转染组胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果:在胆管癌细胞中circ_0000615呈高表达而miR-432-5p呈低表达(P<0.05或P<0.01);双荧光素酶报告基因实验证实circ_0000615与miR-432-5p之间存在靶向关系(P<0.01);敲减circ_0000615可明显抑制CCLP-1、QBC939细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05或P<0.01);下调miR-432-5p可部分逆转敲减circ_0000615对胆管癌CCLP-1和QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论:circ_0000615通过靶向miR-432-5p调控胆管癌细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 胆管癌 CCLP-1细胞 QBC939细胞 环状RNA_0000615 miR-432-5p 增殖 迁移 侵袭
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circAGFG1靶向miR-4429对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其可能的机制 被引量:2
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作者 王全晖 袁守信 张元浩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期128-134,共7页
目的:探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的33例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR法检测组织中circAGFG1和miR-4429表达水平... 目的:探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的33例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR法检测组织中circAGFG1和miR-4429表达水平。体外培养胆管癌QBC939细胞,分别转染si-circAGFG1、miR-4429 mimic、共转染si-circAGFG1与anti-miR-4429后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell法分别检测对细胞迁移和侵袭的影响,WB法检测对细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-4429之间的靶向调控关系。结果:胆管癌组织中circAGFG1的表达量高于癌旁组织(3.89±0.26 vs 1.00±0.08,P<0.05),而miR-4429的表达量低于癌旁组织(0.28±0.03 vs 1.00±0.05,P<0.05)。干扰circAGFG1或过表达miR-4429后,QBC939细胞增殖水平、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及细胞中N-cadherin蛋白表达均显著降低(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circAGFG1可靶向结合miR-4429,且干扰circAGFG1会促进QBC939细胞中miR-4429表达(均P<0.05)。下调miR-4429表达能够逆转干扰circAGFG1对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响(均P<0.05)。结论:circAGFG1在胆管癌组织中表达升高,其可能通过靶向抑制miR-4429促进胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 胆管癌 QBC939细胞 circAGFG1 miR-4429 增殖 迁移 侵袭
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病毒介导多种基因对胆管癌细胞免疫原性的影响
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作者 王征旭 何振平 +1 位作者 胡桂芳 吴祖泽 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期146-148,共3页
目的 探讨IFN γ、IL 2或B7 1基因修饰对胆管癌细胞免疫原性的作用。方法 构建携带人IFN γ或IL 2基因的逆转录病毒表达载体 ,和含人B7 1基因的腺病毒载体 ,导入胆管癌细胞系QBC939,运用淋巴细胞杀伤试验、肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤性... 目的 探讨IFN γ、IL 2或B7 1基因修饰对胆管癌细胞免疫原性的作用。方法 构建携带人IFN γ或IL 2基因的逆转录病毒表达载体 ,和含人B7 1基因的腺病毒载体 ,导入胆管癌细胞系QBC939,运用淋巴细胞杀伤试验、肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤性分析、混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养 ,研究导入的目的基因对QBC939细胞免疫原性的影响。结果 导入IFN γ基因的QBC939细胞体外能增强胆管癌病人外周血淋巴细胞杀伤亲本瘤细胞的活性 ;导入IL 2基因的QBC939细胞在裸鼠体内的成瘤性降低 ;导入B7 1基因的QBC939细胞能刺激外周血T淋巴细胞的增殖。结论 人IFN γ、IL 2或B7 展开更多
关键词 胆管癌 干扰素-Γ 细胞介素-2 B7-1 免疫原性
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